[生物医药论文精品a]微透析技术探针回收率的影响因素研究进展

1微透析技术探针回收率的影响因素研究进展A1A0A3A2A4A6A7A5A8A10A11A9A12A13A14A15A16A17A13A18A19A15A20A22A23A17200433A24摘要微透析技术是近年来发展起来的动态生物取样技术，具有“活体、微创、实时、高效”等特点，其与现代分析技术联用，实现了连续取样和动态测定，可进行微量的定性、定量分析。微透析探针回收率的准确校正，是测定生物体中待测组分确切浓度的关键步骤，可提高大分子、难溶性物质的回收率，使微透析的应用更为广泛。本文对微透析探针回收率的影响因素、校正方法以及近年来提高回收率所取得的进展做一综述。关键词微透析；探针；校正；回收率；生物取样RESEARCHDEVELOPMENTOFINFLUENCEFACTORSFORMICRODIALYSISPROBERECOVERYWANGDAN,SHILIFU,HUJINHONGDEPARTMENTOFPHARMACY,CHANGHAIHOSPITAL,SECONDMILITARYMEDICALUNIVERSITY,SHANGHAI200433,CHINAABSTRACTASANEWTECHNIQUEFORSAMPLING，MICRODIALYSISHASMANYMERITS,SUCHASINVIVO,MINIMALLYINVASIVE,REALTIMEANDHIGHPERFORMANCEMICRODIALYSISHASBECOMEANIMPORTANTMEANSOFCONTINUOUSLYMONITORINGREACTIONSFORQUALITATIONANDQUANTITATIONTHROUGHCOUPLEDWITHANALYTICALTECHNIQUEPROBECALIBRATIONSAREREQUIREDFORACCURATEESTIMATIONSOFEXTRACELLULARCONCENTRATIONSINMICRODIALYSISEXPERIMENTSTHISPAPERDESCRIBESTHERECOVERYOFMICRODIALYSISPROBE，FACTORSAFFECTINGPROBERECOVERY,METHODSOFCALIBRATIONANDTHEAPPROACHTOENHANCETHERECOVERYOFMACROMOLECULEANDINDISSOLVABLECOMPONENTSKEYWORDSMICRODIALYSIS；PROBECALIBRATIONRECOVERYBIOLOGICALSAMPLING微透析采样技术简称微透析是一种活体细胞外液ECF生化物质采样分析技术。因其具有的微创性和取样的连续性,以及活体、原位取样，实时、在线检测等突出特点现已G15999广泛应用G1122G14053组G13467G2520种G11161G10714生G10714现G16949的探G13046性实G20576和G12082G13475生物化G4410的G11429测。G19555G11540微透析的发展与G6925进，其应用G20058G3507已G6205展G14279G14659G10714、G14659物代A21A25A26A27A28A29,A30,A31A32A33A34A35A36A37,A35A36A38A39A40A41A42A43A44,TEL02125070674,EMAILWDYY_618SINACOMA45A46A21A25A47A48A49A50,A51,A52A53,A35A36A38A39A40A41A42A43A44,TELA4702125070668,EMAILA47SHILIFU72227SOHUCOMG16886、G14659物G5332发等研究中。透析液中的G14659物G2559量G2494是ECF中的一G18108分A54A55A56。G2528时探针的回收率G7143G2475G3822方G19766因素的G5190G6212，G19555G11540G11154G11161进G12255的G6925G2476A54A57A58A59A56，采样和G13485G14659时G19400的G5322G19283，2回收率G1075G5529定有所G6925G2476。1微透析技术的原理物质G8851浓度G7811度G6205G6967和G2334透G14192对G4579分子化G2524物具有G17902透性，G4570微透析探针G13634G1122组G13467中，G5415G9760G8981液G17902G17819探针时，细胞外液中G11468对分子质量G2524G17878的物质G1427G1262G20046浓度G7811度G17902G17819G2334透G14192进G1849G9760G8981液中。G11013G1122透析G12661中的G9760G8981液G993G7041G8981动更G7044，因G8504，G17340G14192浓度G7811度G3999G13468G4396在，微透析得以G6357续进行。2回收率的测定方法21体外校正体外校正实G20576是G6238探针G6930G1849已G11705浓度的样G2709溶液中，G6365体G1881微透析方法进行G6817G1328，一G8585时G19400G2530收G19610G9760G8981液，测定G9760G8981液中的G14659物浓度，G5194与溶液G7643准浓度G11468G8616，G2375得G11468对回收率。体外法G8821有G13783G15397体G1881的生G10714因素对回收率得影响，所以，G2494有在体G1881因素对实G20576G13479G7536影响G993大，G6122G2494G19668G11705G17959G14659物在体G1881的G2476化G13792G993G16213G8726G13489对G2559量时，体外校正G6177G9397G17287G16213G8726。22体内校正G11468对回收率可以进行体外校正INVITROCALIBRATION和体G1881校正INVIVOCALIBRATION，在G15892液G6122G13978G8725微透析实G20576中，因为G14659物在其中G6205G6967G17907度G5567，G993影响探针的回收率，所以G2494进行体外校正G2375可；G13792在一G1135实体组G13467中，G3926G14053、G13937G14051、G13920G13917等，G17902G5132G11013G1122取样G18108位的G7366度G3698G2164G4560G14280G6205G6967G17329G12175G2476G19283，G6205G6967G12366G19400G2476G4579A54A55A60A56，使得G14659物在其中的G6205G6967G8616G17902G17819G2334透G14192G5942，回收率G991G19489，因G8504G5529须进行体G1881校正。一般体G1881校正的方法有G3926G991几种221G1881G7643法INTERNALTECHNIQUE是在G9760G8981液中G2164G1849一已G11705浓度且性质与G15999分析物质G11468似的另一种物质（一般为G13479构类似的化G2524物）做G1881G7643物，G17902G17819体外实G20576G8726得G14659物和G1881G7643的回收率G8616，G5194且假设体G1881实G20576中，两者的回收率G8616G993发生G2476化，G17902G17819测定G1881G7643在体G1881的G11468对回收率来计算G14659物的回收率。222反透析法RETRODIALYSIS是G6238已G11705量的G14659物G2164G1849G9760G8981液中，一G8585时G19400G2530测定透析液中的G14659物浓度。应用反向透析法校正微透析探针回收率的前提条件是探针的回收率和传递率G11468等。223释G6930量法DELIVERY是反透析法的一种G6925良方法，G1075可认为是零净G17902量法的简化形式，可以克服应用一种类似物G1328G1881G7643所引G1849的G993确定因素。是在实G20576前测定待测化G2524物向体G1881靶组G13467释G6930量，释G6930量G2375等G1122回收率，G5194在在实G20576完成G2530，重G7044测定释G6930量，以证实探针行为在实G20576G17819G12255中G8821有G6925G2476，该方法简单、方G1427A54A55A55A56A61224零净G17902量法ZNF,ZERONETFLUX配制一系列G993G2528浓度G14659物的G9760G8981液进行微透析实G20576，G3926G7536细胞外液中的G14659物浓度大G1122G9760G8981液中的浓度，G14659物G1262G8851浓度G7811度3进G1849探针，反之，G14659物G1262G8851浓度G7811度进G1849组G13467。G5415两者浓度G11468等时，就G8821有G14659物的净G6205G6967。这时以G14659物在G9760G8981液中的浓度为横坐G7643，G14659物的浓度G2476化为纵坐G7643G1328图，G13479G7536应为一直线，与横轴的交点所对应的浓度G2375为组G13467中的浓度，斜率为G11468对回收率A54A55A57A56。动态零净G17902量法（DYNAMICZNF）A54A55A59A56是零净G17902量法（ZNF）的G6925进形式，是G4570一种浓度的G9760注液G9760注到34个G2475试者体G1881进行实G20576，在G993G2528的时G19400点G4570其近似视为稳态从G13792连续进行零净量法测定，耗时且探针消耗G8616较大。曾G15999运用到检测P糖蛋白对司帕沙星队G14053分布的影响A62A63A64A65225外推G14279零G8981量法EXTROPOLATIONTOZEROFLOWRATE是G17902G17819测定在G993G2528G9760G8981G17907度条件G991微透析液中待测化G2524物的浓度，用所测得浓度对G11468应G9760G8981G17907度进行非线性回归，G17902G17819外推G14279零G8981G17907获得探针周围样G2709基质中待测化G2524物浓度的估计值。226G5942G9760G8981法SLOWPERFUSIONMETHOD是根据外推G14279零G8981量法的原G10714发展G13792来的,G11468对回收率G19555G9760G8981G17907度的G3698G2164G13792G19489低A66G5415G9760G8981G17907度G4579G112250NLMIN1、G11468对分子质量G4579G1122500时，G11468对回收率G4570大G112295，G8504时，引G1849的回收率误差可以忽略。G8504方法对分析仪器提出了极高的G16213G8726。除了上述介绍的定量的方法之外还有G1881源性参照物的方法A62A63A67A65G6122者是数G4410模型A62A63A68A65。迄今为止，微透析活体分析的定量难以令人十分G9397意，每种定量方法都有其G993尽G3926人意之G3800，因G8504在G17885用测定回收率G6177的方法时,应视具体试G20576G5785G1929G13792定，使所测定的G13479G7536尽可G14033准确可G19764。3影响回收率的因素影响微透析探针回收率因素有G5468G3822，一般体外因素有G9213度、G51G43值、待测物质的G10714化性质、G6205G6967G17907度、探针的G13479构、G9760注液的性质成分和G17907度、透析G14192的物G10714性质、G2399G2159、探针与G15999测物质的反应。体G1881因素有生物体本G17535的G1593G5259条件和生物G14422G5471、取样G18108位的生物G4410性质、G14659物的细胞G2572收、G1039动G17728运、代G16886G17907率、蛋白G13479G2524等。31温度在进行微透析体外实G20576时，应尽量模G6323体G1881的微G10627G3671，实G20576G10627G3671与体G1881G1457G6357一G14280，使测得的回收率更为准确，实G20576G15932G7138A62A63A69A70A63A71A65，体外微透析试G20576的G9213度G6523制在3G26G263G5050G2503。32PH值G993G2528的G14659物具有G993G2528的G83G43值，G2494有在G17878G4464的G83G43值G991G14659物的溶G16311度G7380高，回收率G1075G7380大。MICHALOWSKI等A62A63A72A65在G16792G1227微透析G1328为一G20045测定G1158G14038性G14659物从G8639G17241微G3230G2070、G8639微G10711G2070型中的G6441获效率和G14659物释G6930时，G13783G4531了影响微透析探针回收率的因素，G13479G7536发现G19555G11540G83G43值得G993G7041G3698大，回收率得到了提高。PLOCKA62A73A74A65等在体外微透4析G13783G4531了G987G2488G19677素G17902G17819G2334透G14192G9195透性实G20576中发现，G9760G8981液为G7531G7696G8675液时，G6925G2476G9760G8981液中G987G2488G19677素的浓度，回收率G1075G11468应有所G2476化，回收率G2588现浓度G1393G17194性。G1306G4570G9760G8981液更G6454为G83G43G26G174G255950MMG19090G12175子的G11979G18252G11428G13543G1926溶液时，回收率的浓度G1393G17194性消G3845。这可G14033是G11013G1122G6925G2476G993G2528浓度的G987G2488G19677素的G83G43值，使其G6205G6967系数发生G2476化的原因。33探针结构除了在上述探针的分类时提到的探针的种类,有时为了方G1427试G20576的G6817G1328,G5132对探针进行G4579G4579的G6925动,G10714G16782上G16774,这样做G4570G1262G6925G2476探针的性G14033G1375G3926KLIMOWICZA62A73A63A65G4570G11979G18252G13543G1926液G1328为透析液、G9760注液G17907度为115LG103MIN1,用5MG/L的G8712G7484G18252G6122者G2464G2789G8900G7655G1328为G15999测化G2524物对体外有与G8821有G1881G18108G4560线的微透析探针回收率进行了G13783G4531，HPLC检测透析液，G13479G7536G7186G12046透析探针在低G8981G17907时，G8821有G7138G7186G2318G2047，G13792在高G8981G17907G9760G8981时1015LMIN1，有G1881G18108G4560线的探针与G8821有的探针的回收率有G2318G2047,G1306是其差G2047G993大，G5194且，G11013G1122在体G1881试G20576中低G8981G17907G9760G8981运用较G3822，G137921015LMIN1的G9760G8981G17907度所获得的回收率G5468低，所以应用G5468G4581。因G8504G11013G1122高G8981G17907G9760G8981所G5114来的差G2047可以G993G1116G13783G15397。G2528样,WISNIEWSKIA75A76A76A77等发现,G4570G2528G5527G3290探针G1881G18108G6566G12661的外G2334G5464G3698大50G8,G14033G3827使回收率G3698G216426G8。34探针半透膜的材料微透析系G13491所用到的微透析G14192是一种可对一定分子量物质进行G6142G11053的G14192，G14192的G7460G7021和大G4579对回收率G1075有影响。G1375G3926KHRAMOV等A78A79A80A81在对一G1135G11107G8712的G989G10627类G14659物G1005G2686G3006、G3332G7144帕G7138、G19475G12871G7379G7531、G2357G20544G16211G5191、G5334G1005G3006的微透析G11468对回收率进行G13783G4531时发现。使用PCG14192与使用G19120G13454和AN69G14192G11468G8616G14033G3827使回收率提高两G1505。35探针植入的位置探针G6566G1849待测组G13467时，尽G12661G6451G1272G17743微，G1306G1185可引起G4628G18108组G13467反应G13792影响G9760注液中待测物质回收率。因G8504微透析中样G2709的采G19610应在G14279G4581G9760G8981G5332G399930G25260MING2530G6177G14033进行，且尽可G14033使实G20576G6523制在24HG1881。36灌流速度G9760G8981G17907度G17246G5942，其G11468对回收率就G11468应的G17246高，G2375G8981G17907与G11468对回收率成反G8616。G1306是，KJELLSTROMA78A79A82A81G1075曾G6265G17959，在检测白细胞G989G9923时，在G8981G17907低G11221ULMIN1时，G19555G11540G8981G17907的G19489低回收率G1075G991G19489。原因可G14033是G11013G1122白细胞G989G9923G15999G2334透G14192所G2572G19480。G1955G4579G9760G8981G17907度G15441G9994可以提高G11468对回收率，G1306是G8981G17907G19489低G1262使样G2709量G1955G4581，为了收G19610G17287G3827的样G2709以G17810到检测限，G19668G16213G5322G19283取样的时G19400G19400隔，因G8504G19489低了微透析的时G19400分辨性TEMPORALRESOULATION，所以G9760G8981的G17907度根据实G20576的G19668G16213G13792定。与细胞外液G9195透G2399G11468等透析实G20576用的G9760G8981液的G9760G8981G17907度G993G17241G17819510LMIN1，因为高G8981G17907G5194G993G14033进一步G3698G2164G13489对回收率，G13792且G9760G8981液在G2399G2159G991G8981出探针可G14033G1262引起组G13467G64515G1272，G5194使透析G14192两侧物质交G6454G993G14033充分进行。G9760G8981G5332G3999时，回收率G5468高，一般认为这是探头G6566G1849所引起的G1272害性组G13467反应G3926G15892G14053屏障的G4628G18108破坏和细胞G14192的破裂等，大约G13475G178193060MING2530，回收率基本趋G1122稳定。因G8504，样G2709的采G19610G14279G4581G16213在G9760G8981G5332G39993060MING2530G6177G14033进行。37灌流液的成分G14659物G6205G6967是G1393据G17340G14192浓度G7811度，在G6205G6967的G17819G12255中，G14192两侧的浓度G993G7041G2476化，因G8504，G9760G8981液两侧的成分对回收率起G11540G14279关重G16213的G1328用。KHRAMOV等A78A79A83A81的体外实G20576中描述了一种G17902G17819提高透G17819微透析G14192的G17728运G14033G2159从G13792G3698G2164微透析回收率的G7044颖的方法。这种方法G17902G17819在微透析G9760G8981液中添G2164络G2524成分使大分子物质透G17819微透探针。G10627糊精0G17252G170W/V添G2164到G7531G7696G8675溶液中，与布洛芬形成包G2524络G2524物，其回收率提高了1G1752G1505，G13783G4531了G993G2528透析G14192（PC，AN69和G19120G13454），G83G43，G10627糊精的浓度，布洛芬的浓度对回收率的影响。G2494有G51CG14192G14033G3827使G11468对回收率G3698大高G1122100G8，一般，G5415G9760G8981液中的G10627糊精为0G175W/V时，G11468对回收率G17810到G7380大。G13792对G993G14033与G10627糊精形成络G2524物的安G7379G8616G7531的G13783G4531中，在G9760G8981液中添G2164G10627糊精G5194G8821有提高安G7379G8616G7531的回收率。SUN等A78A79A84A81应用G993G2528的G14192G7460G7021、G993G2528的回收率提高G2070对G1158G14038性化G2524物前列素B2、白细胞G989G9923B4和C4进行了G13783G4531，G2528样使回收率得到了提高。在体G1881试G20576中，WARD等A78A79A85A81G4570甘油和2羟G1005基G10627糊精添G2164到G9760G8981液中G1328为G1158G14038的高蛋白G13479G2524化G2524物的回收率提高G2070。微透析探针透析G14192对大分子物质的透G17819G14033G2159的G3698强使得活性肽和蛋白质类的物质G14033G3827透G17819透析G14192。G9994G13792，高分子量筛（透析G14192孔G5464较大）的透析G14192G15441G9994可以使大分子物质G17902G17819，G1306是G11013G1122G9760G8981液进G1849探针G1881G18108G8981体G2399的原因，使透析G14192更G7143G3845G8712，G13792且G19555G11540时G19400的G8981G3845，探针G8712分的G8981G3845可以G6925G2476取样组G13467G18108位的生G10714G4410特性。WILLIAM等A78A79A86A81G20576证了G9195透性成分牛G15892清白蛋白G14033G3827补偿微透析探针的G3845G8712量，牛G15892清白蛋白G17902G17819抗衡G9760G8981液引起的G8981体G2399引起的对G8981液体丢G3845，使探针的G3845G8712G17810到G7380G4579。另外，在G9760G8981液中G2164G1849牛G15892清白蛋白使透析液的回收率G7186著提高，校正时G19668G16213G9195透G2070的量G1393G17194G1122G9760注液进G1849探针时G8981体G2399G2159、探针G14192G15932G19766的G9195透性、有效G9195透溶质。应用这G20045技术可以对生物活性的大分子，G1375G3926肿瘤坏死因子和白细胞介素进行G11429测。WARDA78A79A87A81G8616较G1005二醇和ENCAPSING1328为微透析G9760G8981液对SB265123（一种G1158G14038的高蛋白G13479G2524化G2524物）在体和G12175体回收率提高的G14033G2159。G7380初G12175体实G20576以普G17902生G10714G11428G8712G1328为G9760G8981液时SB265123回收率非G5132低（1G17G26G8）。体外回收率用5G820G8的G1005二醇提高到24G865G8，5G820G8的ENCAPSIN提高到59G862G8。在体G1881试G20576中，用20G8的G1005二醇G1328为G9760G8981液使其回收率G17810到了G265G880G8，所以ENCAPSIN是一种G5468有效的体外回收率提高6G2070，G2375使是对高G15892浆蛋白G13479G2524的化G2524物，G2528时应用G1122体G1881G1075是十分有效的。结语近年来人们G17246来G17246关注微透析在G14659G4410G20058G3507的应用，G15441G9994自微透析技术自问世20G3822年以来,取得了G5468大的发展,尤其是对回收率的定量方G19766,使微透析技术对许G3822难溶性,大分子物质G1075实现了实时、在线G11429测。G1306是每种定量方法都有其G993G17287且尚有G5468G3822G14659物G993G17878G2524进行微透析试G20576，因G8504，使微透析的G13479G7536具有准确、可重复性，G6205大微透析的G17878用范围还G19668G16213进一步努G2159。参考文献A881A89KREILGIARDMASSESSMENTOFCUTANEOUSDRUGDELIVERYUSINGMICRODIALYSISJA90ADVDRUGDELIVREV,2002,54SUPPL1S99L21A912A92HILLEVEDLA93PERSSONLMICRODIALYSISFORNEUROCHEMIEALMONITORINGOFTHEHUMANBRAINJA94STANDCARDIOVASCJ,2003,37113L7A953A96JOHNSTONAJA97GUPTAAKA98ADVANCEDMONITORINGINTHENEUROLOGYINTENSIVECAREUNITA99MICRADIALYSISJA98CURROPINCRITCAREA972002,82121127A954A96KONDRATRWA97KANAMORIKA97ROSSBDA98INVIVOMICRODIALYSISANDGASCHROMATOGRAPHY/MASSSPECTROMETRYFOR13CENRICHMENTMEASUREMENTOFEXTRACELLULARGLUTAMATEINRATBRAINJJNEUROSCIMETHOD,2002,1202179192A955A96OCONNORWTFUNCTIONALNEUROANATOMYOFTHEBASALGANGLIAASSTUDIEDBYDUALPROBEMICRODIALYSISJNUCLMEDBIOL,1998,258743746A956A96BUNDGAARDC,JRGENSENM,MRKAANINTEGRATEDMICRODIALYSISRATMODELFORMULTIPLEPHARMACOKINETIC/PHARMACODYNAMICINVESTIGATIONSOFSEROTONERGICAGENTSJJPHARMACOLTOXICOLMETHODS,2007,55221423A957A96MATHYFX,LOMBRYC,VERBEECKRK,ETALSTUDYOFTHEPERCUTANEOUSPENETRATIONOFFLURBIPROFENBYCUTANEOUSANDSUBCUTANEOUSMICRODIALYSISAFTERIONTOPHORETICDELIVERYINRATJJPHARMSCI,2005,941144152A958A96GUNARATNAPC,KISSINGERPT,KISSINGERCB,ETALANAUTOMATEDBLOODSAMPLERFORSIMULTANEOUSSAMPLINGOFSYSTEMICBLOODANDBRAINMICRODIALYSATESFORDRUGABSORPTION,DISTRIBUTION,METABOLISM,ANDELIMINATIONSTUDIESJJPHARMACOLTOXICOLMETHODS,2004,4915764A959A96CHANGYL,CHIOUSH,CHOUYC,ETALQUANTITATIVEDETERMINATIONOFUNBOUNDCEFOPERAZONEINRATBILEUSINGMICRODIALYSISANDLIQUIDCHROMATOGRAPHYJJPHARMBIOMEDANAL,2007,451158163A9510A96NICHOLSONC,SYKOVAEEXTRACELLULARSPACESTRUCTUREREVEALEDBYDIFFUSIONANALYSISJTRENDSNEUROSCI,1998,215207215A9511A96AULTJM,RILEYCM,MELTZERNM,ETALDERMALMICRODIALYSISSAMPLINGINVIVOJPHARMRES,1994,111116311639A9512A96CHAURASIACSINVIVOMICRODIALYSISSAMPLINGTHEORYANDAPPLICATIONSJBIOMEDCHROMATOGR,1999,135,317332A9513A96STAHLM,BOUWR,JACKSONA,ETALHUMANMICRODIALYSISJCURRPHARMBIOTECHNOL,2002,32165178A9514A96DELANGEEC,MARCHANDS,VANDENBERGD,ETALINVITROANDINVIVOINVESTIGATIONSONFLUOROQUINOLONESEFFECTSOFTHEPGLYCOPROTEINEFFLUXTRANSPORTERONBRAINDISTRIBUTIONOFSPARFLOXACINJEURJPHARMSCI,2000,1228593A9515A96BRUNNERM,JOUKHADARC,SCHMIDR,ETALVALIDATIONOFUREAASANENDOGENOUSREFERENCECOMPOUNDFORTHEINVIVOCALIBRATIONOFMICRODIALYSISPROBESJLIFESCI,2000,678977984A9516A96STAHLELONMATHEMATICALMODELSOFMICRODIALYSISGEOMETRY,STEADYSTATEMODELS,RECOVERY7ANDPROBERADIUSJADVDRUGDELIVREV,2000,4523149167A9517A96A100A101A102A97A103A104A105A106A107A108A109A110A111A112A113A114A115A116A117A118A119A120A121A122A123A124A125A126A127A128A129A130A131A132A133A134JA135A136A137A138A139A140A141A141A142,2006,234332335A9518A96ROJASC,NAGARAJANV,DERENDORFHINVITRORECOVERYOFTRIAMCINOLONEACETONIDEINMICRODIALYSISJPHARMAZIE,2000,559659662A9519A96MICHALOWSKICB,GUTERRESSS,DALLACOSTATMICRODIALYSISFOREVALUATINGTHEENTRAPMENTANDRELEASEOFALIPOPHILICDRUGFROMNANOPARTICLES