DNA粗提取和鉴定复习.ppt

1、复习巩固: (1)如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况? (2)真核细胞DNA的主要存在场所? (3)证明DNA是遗传物质的三个经典实验? (4)DNA分子双螺旋结构模型的提出者是谁? (5)DNA分子双螺旋结构模型的主要特点?,1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构.,2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧.,3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对.,专题5,DNA和蛋白质技术,课题1,DNA的粗提取和鉴定,1、你所知道的生物大分子有哪些?,2、如何来提取生物大分子?,3、提取DNA的基本思路是什么?

2、,一、基础知识,多糖、核酸、蛋白质等。,选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。,利用DNA与RNA、蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，选择适当浓度使DNA充分溶解而使杂质沉淀或者相反使DNA析出，以达到提取和分离目的。同时利用DNA不溶于酒精的原理可将DNA与蛋白质等其他杂质进一步分离提取含杂质较少的DNA。,根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？,DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度

3、的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？,当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。,DNA的粗提取与鉴定,一、实验原理,1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。,2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在0.14 molL的氯化钠溶液中的溶解度最低，

4、利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出与杂质分离或用2 molL的氯化钠溶液使DNA溶解过滤除去不溶杂质。,3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。,4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。,二、方法与过程,1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）,500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。,2.提取DNA。,取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。,纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。,原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒

5、快速搅拌，机械加速血细胞破裂。,.提取血细胞核物质：,.溶解核内的DNA：,滤液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶解DNA 。,.析出含DNA的粘稠物：,.滤取含DNA的粘稠物：,. DNA粘稠物的再溶解：,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。,用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。,在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。,.过滤含有DNA的NaCl溶液：,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得的溶液，滤液中含有DNA。,.提取

6、含有杂质较少的DNA：,步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。,3.DNA的鉴定：,加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。,1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”,2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”,三、实验小结,四、实验原理拓展介绍。,1.DNA的释放。,DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血

7、细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。,2.DNA与蛋白质分离。,在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中,3.DNA的析出与获取。,因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。,4.DNA的再溶解。,用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。,5.DNA的沉淀和浓缩。,对于除去了蛋白质

8、的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na的DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。,6.DNA的鉴定。,鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,提取纯化DNA（与蛋白质分离）, A出现蓝色 B无变化,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DN