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1、葡萄糖标准曲线 1 dns dns即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(dns)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故dns方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。 2 试剂制备 将6.3克dns和262ml 2mol/l氢氧化钠,加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中,再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加水定容到1000m
2、l,即制成3,5-二硝基水杨酸试剂,贮于棕色瓶中备用。 3 标准曲线 分别取葡萄糖标准液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中,用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入dns试剂2ml,沸水浴加热2min,流水冷却,用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。 4 样品测定 样品液适当稀释,使糖浓度为0.1-1.0mg/ml,取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中,加dns试剂2.0ml,沸水煮沸2min,冷却后用水补足到15ml刻度,在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。 ph 0.1m柠檬
3、酸/ml 0.1m柠檬酸钠/ml ph 0.1m柠檬酸/ml 0.1m柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 14.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 14.0 6.0 5.8 4.7 15.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 c6h8o7h2o分子量210.14 0.1m溶液
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