植物源性食品中10种多酚类化合物的测定 高效液相色谱串联质谱法-标准文本

1、ICS点击此处添加ICS号点击此处添加中国标准文献分类号中华人民共和国农业行业标准XX/T XXXXXXXXX植物源性食品中10种酚酸类化合物的测定高效液相色谱串联质谱法Determination of 10 polyphenols in plant-based foods by LC-MS/MS 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施发布XX/T XXXXXXXXX前言本标准的附录A、附录B、附录C为资料性附录。本标准按照GB/T1.1-2020给出的规划起草。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由农业农村部农业农村部农

2、产品营养标准专家委员会归口。本标准起草单位：农业农村部食物与营养发展研究所，北京市营养源研究所，中国标准化研究院，内蒙古蒙牛乳业集团有限公司，中国合格评定认可委员会，北京市理化分析测试中心，北京市农林科学院蔬菜研究中心。本标准主要起草人：朱大洲，崔亚娟，徐佳佳，孔凡华，白沙沙，孙君茂，史波林，黄家章，刘鹏，梁克红，赵欣，杨春雪，李东，马文丽，宋晓东，杨志刚，李宏，马杰，贾丽，刘光敏，赵雪梅。7植物源性食品中10种酚酸类化合物的测定 高效液相色谱串联质谱法1 范围本标准规定了植物源性食品中绿原酸、没食子酸、阿魏酸、原儿茶酸、龙胆酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、对-香豆酸、 芥子酸的高效液相色谱串联质

3、谱法的测定方法。本标准适用于植物源性食品中10种多酚类化合物含量的测定。本标准方法丁香酸、香草酸和芥子酸的检出限为0.2 mg/kg，定量限为0.5 mg/kg；龙胆酸、绿原酸和咖啡酸的的检出限为0.1 mg/kg，定量限为0.3 mg/kg；原儿茶酸、没食子酸、对香豆酸、阿魏酸的的检出限为0.03 mg/kg，定量限为0.1 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样经碱性水解液提取处理后

4、得到酚酸，采用电喷雾离子源-液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4 试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。4.1试剂4.1.1 盐酸（HCl）：优级纯。4.1.2氢氧化钠（NaOH）：优级纯。4.1.3乙酸乙酯（C4H8O2）：优级纯。4.1.4乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.1.5甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.6甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.7 3 mol/L 氢氧化钠溶液：称取120.0 g氢氧化钠（4.1.2），用水溶解并定容至1000 mL。4.1.8 6 mol/L盐酸溶液：量取50 mL盐酸（4.1.1，12 mol/L）5

5、0 mL，缓慢注入50 mL蒸馏水中，混匀。4.2标准品4.2.1 绿原酸：CAS号327-97-9，纯度98.0%。4.2.2原儿茶酸：CAS号99-50-3，纯度98.0%。4.2.3 阿魏酸：CAS号1135-24-6，纯度98.5%。4.2.4对-香豆酸：CAS号501-98-4，纯度98.0%。4.2.5没食子酸：CAS号149-91-7，纯度98.5%。4.2.6龙胆酸：CAS号490-79-9，纯度98.0%。4.2.7香草酸：CAS号121-34-6，纯度98.0%。4.2.8咖啡酸：CAS号331-39-5，纯度98.0%。4.2.9丁香酸：CAS号530-57-4，纯度98

6、.0%。4.2.10芥子酸：CAS号530-59-6，纯度98.0%。4.3标准溶液的配制4.3.1标准储备溶液：分别准确称取绿原酸、没食子酸、阿魏酸、原儿茶酸、龙胆酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、对-香豆酸、 芥子酸标准品各10.0 mg（精确到0.1mg），用甲醇溶液溶解并定容至10 mL即为1.0 mg/mL的单标储备液，于-18下，贮存于密闭棕色玻璃瓶中，保存有效期为6个月。4.3.2标准中间溶液：分别吸取0.2 mL标准储备液于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇-水（体积比为7：3）定容至刻度，制成标准中间液，用时现配。4.3.3 标准曲线工作溶液：吸取适量标准中间溶液，用甲醇-水（体积比为

7、7：3）配制成质量浓度为7 ng/mL、12.5 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、800 ng/mL的标准曲线工作溶液，用时现配。4.4 滤膜：0.22 m，有机相滤膜。5 仪器设备5.1 高效液相色谱串联质谱仪带电喷雾离子源（ESI-）。5.2 天平：精度0.01 mg，0.0001 g。5.3 粉碎机。5.4 超声波清洗仪。5.5 离心机。5.6 旋转蒸发仪：带有温度控制。5.7振荡器。5.8 漩涡振荡器。6 分析步骤6.1 试样制备固体试样：用四分法缩分至约200 g样品经粉碎机粉碎、混匀、备用。液体试样：测定前需混合，摇匀，备用。 6.2提取称取1

8、.05.0（精确至0.001 g）试样于50 mL离心管中，加入30 mL 3 mol/L 氢氧化钠溶液，用漩涡振荡器混匀，振荡提取60 min，用6 mol/L盐酸溶液调节pH至1.52.0，再用70 mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，于35下旋转蒸发至干，加入5 mL70%甲醇水溶液，溶解蒸干后的物质。6.3测定6.3.1液相色谱-串联质谱参考条件a) 色谱柱：色谱柱为HSS T3（100 mm2.1 mm, 1.7 m）或性能相当者；b) 流动相：A为0.1%甲酸乙腈 B为0.1%甲酸水溶液；c) 进样量：2 L；d) 柱温：30；e) 梯度洗脱条件，见表1。表1 洗脱梯度表时间，min

9、流速mL/min流动相A，%流动相B，%0.00.35.095.01.00.35.095.06.50.390107.00.35.095.010.00.35.095.0f) 扫描方式：离子源为电喷雾电离源负离子扫描方式(ESI-)；g) 去溶剂气和锥孔反吹气流速分别为800 L/h和150 L/h，气体均为高纯氮气；h) 碰撞气流速为0.15 mL/min，气体为氦气；i) 去溶剂辅助加热温度为400 ，j) 离子源温度为150 。6.3.2 标准工作曲线 混合标准工作液注入液相色谱质谱仪按照6.3.1条件进行测定，以各酚酸类化合物质量浓度为横坐标，响应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。6.3

10、.3 样品测定制备好的试样溶液注入液相色谱质谱仪按照6.3.1条件进行测定，以保留时间和子离子定性，以试样溶液峰面积外标法定量。试样中各酚酸类化合物响应值应在标准工作曲线范围内，若超出范围应进行稀释。6.4 结果计算试样中酚酸类化合物的含量以质量分数表示，单位为毫克每百克，按公式(1)计算： (1)式中：X: 试样中酚酸类化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）c-从标准曲线上得到的被测组分溶液质量浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；f-试样溶液稀释倍数；V-试样溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；m-试样质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。7 精密度 在重复性条件下获得的两次

11、独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的15%。AA附录A （资料性附录）10种酚酸类化合物基本信息序号名称CAS号英文名称分子式分子量1绿原酸327-97-9Chlorogenic acidC16H18O9354.312原儿茶酸99-50-3Protocatechuic acidC7H6O4154.123阿魏酸1135-24-6Ferulic acidC10H10O4194.194对-香豆酸501-98-4P-coumaric acidC9H8O3164.165没食子酸149-91-7Galllic acidC7H6O5170.126龙胆酸490-79-92,5-dihydroxybenzo

12、ic acidC7H6O4154.127香草酸121-34-6Vanillic acidC8H8O4168.158咖啡酸331-39-5Caffric acidC9H8O4180.169丁香酸530-57-4Sringic acidC9H10O5198.1710芥子酸530-59-6Sinapic acidC11H12O5224.21BB附录B （资料性附录）10种酚酸类化合物质谱分析参数序号名称母离子,m/z子离子,m/z锥孔电压,V碰撞能量，eV1绿原酸353.5191.040152原儿茶酸153.0109.040153阿魏酸193.0134.035154对-香豆酸163.0119.038125没食子酸169.0125.045126龙胆酸1