免疫学技术原理

1、抗原抗体反应,主要内容,抗原抗体反应的原理,抗原抗体反应的特点,影响抗原抗体反应的因素,免疫学检测技术的类型,思考题 小结,一）抗原抗体反应的原理,抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体,物质基础,体内：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素或引起免疫病理的损伤,体外：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应,二）抗原抗体反应的特点,特异性 可逆性 比例性 阶段性,特异性：抗原与抗体结合反应的专一性,抗原抗体反应特异性示意图,分子基础:抗原表位与抗体分子高变区

2、之间空间构型的互补性,1）特异性,两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应,交叉反应（cross reactions,抗原抗体交叉反应示意图,Ag B,2)可逆性,可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性,影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，结合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响pH、离子强度,前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适,抗原抗体反应比例性示意图,比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比

3、关系,3)比例性,第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象,4)阶段性,A.抗原、抗体反应物的自身因素 环境因素,三） 影响抗原抗体反应的因素,抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价,B.环境因素,电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6pH9 温 度: 1540，37最适,四）免疫学检测技术的类型,按实际用途分为:e 免疫组织化学技术(immunohistochemistry techniqu,IHCT) 免疫测定(immunoassay,标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标

4、记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析,按测定反应体系的物理状态分为: 均相免疫测定(homogenous immunoassay） 非均相免疫测定(heterogenous immunoassay,按检测现象分为: 放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 化学发光免疫技术 金免疫技术,1什么是抗原抗体反应？ 抗原抗体反应的原理是什么？ 2.抗原抗体反应有哪些特点？ 3.如何理解抗原抗体反应的特异性？ 4什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？ 5抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？ 6抗原抗体反应有哪些影响因素？ 7基于抗原抗体反应的

5、免疫学检测技术有哪些,思考题,小结,抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性,影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。 免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型,排斥,抗体,Y,颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应,第二节 凝集反应,分类,直接凝集反应- 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,细胞性抗原：细菌和红细胞,凝集原(agglutinoge

6、n)：凝集反应中的抗原,凝集素(agglutinin)：凝集参与反应的抗体,颗粒性抗原,凝集素,直接凝集反应,1、玻片凝集反应,已知抗原,未知抗体,凝集团块 混浊,2、试管凝集反应,定量抗原,系列稀释抗体,不同程度的凝集反应,YES NO,确定抗体的滴度,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,试管凝集试验,间接凝集反应(indirect agglutination): 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,间接凝集试验示意图,载体种类及

7、其处理方法,红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。 聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒,1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验,间接凝集反应的类型,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集试验,反向间接凝集试验,用抗体致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制试验,用抗原致敏载体-检测抗原,间接血凝试验,间接乳胶凝集试验,概念,金黄色葡萄球菌协同凝集试验,间接凝集反应的应用,抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 抗体的检测 检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体,1.孕妇尿中绒毛末促性腺激素含量明显增高 2.糖脂是结核杆菌细