lio转染操作步骤精_第1页
lio转染操作步骤精_第2页
lio转染操作步骤精_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、以24孔板为例，其余规格的转染见表11中板，细胞密度为30-50%适宜。注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测， 则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天(24-36小时后)每个孔转染方式如下：A将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem 无血清培养基中。B将1ul lipo2000 溶于50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min。C将A B两管混合，放置20min。3转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔 400ul。将C管mix加入24孔板对 应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。

2、Plasmid DNA Tran sfecti onDNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。5贴壁细胞：0.5-2X10 cells/well ，第二天待细胞密度达到 90%以上时转染悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。2转染。A将0.8ug DNA溶于50ul Opti-mem 无血清培养基中。B将2ul lipo2000 溶于50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置 5min。C将A B两管混合，放置20min。转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每

3、孔 400ul。将C管mix加入24孔板对应 孔中，4-6小时候换成有血清培养基。Table 1. Culture Shared reage nts DNA tran sfectio n RNAi tran sfectio n中板密度*Culture vesselSurf.area perwellVol. of plati ng mediumVol. of diluti on mediumDNALipofec tami ne ?2000RNALipofec tami ne ?20001000-10000cell/well96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ul5pm

4、ol0.25ul0.5-2X10 5 cell/well24-well2cm2500ul2X50ul0.8ug2.0ul20pmol1.0ul1-3X105cell/well12-well4cm21ml2X100ul1.6ug4.0ul40pmol2.0ul2-3X105cell/well6-well(35mm)10cm22ml2X250ul4.0ug : 6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。10ul100pmol5ul8-10X105cell/dish60mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug : 6cm dish细胞质粒转染量 4-6ug足以。20ul200pmol10ul2-3X106 cell/dish10cm60

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论