云香复合胃痛胶囊对慢性浅表性胃炎的作用机制探究

1、云香复合胃痛胶囊对慢性浅表性胃炎的作用机制探究云香复合胃痛胶囊是浙江省中医院治疗慢性浅表性胃炎(CSG)、功能性消化不良(FD)等疾病的一种自制中药制剂,该药在临床上有较好的治疗效果,但相关机制尚不清楚。笔者通过建立大鼠CSG模型,检测大鼠幽门括约肌组织中一氧化氮合酶(NOS)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性来初步探讨其对CSG的作用机制。现报告如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物清洁级Wistar成年大鼠80只,一级质量标准,雌雄各半,体重(230±20)g,由浙江中医药大学实验动物中心提供。1.1.2 药物与试剂云香复合胃痛胶囊由云母粉、香附、白芍、延胡索(醋制)

2、、海螵蛸、甘草6味中药组成,浙江中医药大学附属第一医院药剂科提供;雷尼替丁由福州海王福药制药有限公司提供(批号:060820);水杨酸钠为上海化学试剂采购供应五联化工厂生产(批号:20040309);NOS测定试剂盒:南京生物工程研究所(批号:20060728);AchE测定试剂盒:南京生物工程研究所(批号:20060824);考马斯亮兰蛋白测定试剂盒:南京生物工程研究所(批号:20060820)。1.1.3 实验仪器Au2700自动生化分析仪:日本Olympus公司;RM2135病理切片机:德国Leica公司;BX60型显微镜:日本Olympus公司;DK-S22型电热恒温水浴箱:上海精宏实

3、验设备有限公司;低温高速离心机(Biofuge28RS):上海医用分析仪器厂。1.2 实验方法1.2.1 动物造模及分组与给药详见文献1.2.2 检测指标及方法取大鼠新鲜幽门部胃组织0.5g,加9倍0.9%氯化钠4.5ml,手动匀浆,制成10%的组织匀浆液,继以3000r/min离心10min后,取3ml组织匀浆液放入-80冰箱中,待测以下指标:幽门括约肌NOS活力的测定:样本及试剂从冰箱取出,37水浴3min,进行下列操作,空白管双蒸水a*(50μl);总NOS测定管样本量a*(50μl),2管试剂一底物缓冲液,200μl,试剂二促进剂,10μl,试剂三显色剂,100

4、μl,混匀,37水浴准确反应15min,试剂四透明剂100μl,试剂五终止剂2000μl,混匀,530nm处,1cm光径,蒸馏水调零,测吸光度值。总NOS活力(U/mgprot)=总NOS测定管OD值-空白管OD值/呈物色纳摩尔消光系数×反应液总体积/取样量×1/(比色光径×反应时间)/蛋白含量(mgprot/L)。根据以上公式得出总NOS活力=总NOS测定管OD值-空白管OD值/(38.3×10-6)×(2.41+a*)/a*×1/(1×15)/蛋白含量(mgprot/L)。组织AchE活力

5、的测定:取上清液25μl测定AchE活力,操作步骤见表1。计算公式:组织匀浆中AchE活力(U/ml)=测定管OD值-对照管OD值/标准管OD值-空白管OD值×标准管浓度×样本测试前稀释倍数。a*为取样量及补足蒸馏水的量。1.3 统计学处理方法采用SPSS11.5forWindows统计软件对其进行分析,计量资料以x珚±s表示,采用t检验。2 结果各组大鼠幽门括约肌NOS、AchE活性的比较见表2。3 讨论 在治疗CSG中,NO在炎症过程中具有双重作用,一方面,内皮源性NO具有抑制炎症过程的作用;另一方面,炎症过程后期合成大量NO又可参与炎症反应,具

6、有细胞毒作用,可以导致胃黏膜损伤。NO的这种细胞毒作用被认为是内毒素所致胃肠道损伤的机制之一。胃肠蠕动和括约肌收缩主要依靠兴奋性神经递质,如Ach、胃动素和P物质等,其中Ach起主要作用,而胃中Ach水平能反应迷走神经活性,为胃肠动力兴奋性递质,具有刺激胃肠肌收缩和促进胃-肠蠕动的作用,还与胃肠腺分泌有关。幽门括约肌是调节和控制胃-十二指肠的消化运动生理功能的关口;,有较丰富的内源性神经支配系统(ENS)直接支配。Koch等研究发现迷走神经张力丧失和交感神经活性增加引起胃节律紊乱,这可能是CSG导致胃黏膜损伤的机制之一。本实验结果表明,实验性CSG大鼠幽门括约肌组织iNOS表达显著高于正常组,各治疗组iNOS表达明显低于模型组,其中云香复合胃痛胶囊中剂量组基本接近正常组。这可能是由于:慢性炎症刺激iNOS诱导合成,进而合成大量NO参与胃黏膜局部损伤与炎症反应;云香复合胃痛胶囊有直接抑制iNOS生成的作用,或可能通过多种途径减轻胃黏膜的损伤与炎症,减少了介导促进iNOS生成的细胞因子,间接抑制了iNOS的合成。同时,有资料显示:NOS有拮抗Ach的作用,但不影响Ach的释放。本实验研究结果提示实验性CSG大