开口箭总皂苷含量分析论文

1、开口箭总皂苷含量分析论文【摘要】目的建立开口箭中总皂苷含量测定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液为发色体系，检测波长为（4582）nm。结果标准曲线在0.100.40mg范围内(r=09997)线性关系良好。平均回收率97.2%，方法的变异系数为4.57%，测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为13.51%。结论方法简便，准确，重现性好，可用于开口箭总皂苷含量测定。 【关键词】开口箭总皂苷开口箭比色法 Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinensisB

2、ak.MethodsThesamplesweredeterminedbyspectrophotometry.Thedetectivewavelengthwas(4582)nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.10.4mgandtheaveragerecoverywas97.2%(RSD4.57%).ConclusionThemethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak. Keywor

3、ds:Totalsaponin；TupistrachinensisBak.；Spectrophotmetry;Spectrophotometry 开口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）铃兰族开口箭属植物。其原植物又名开喉箭、万年青，为多年生常绿草本，以其根状茎入药，作为药用又名岩七、竹根七、竹节参、竹根七、竹节七、牛尾七等。医学古籍记载，开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症。土家族民间用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎，疗效显著1。我国开口箭属植物约占全世界的70%,分布于陕西、甘肃、湖北、四川、云南、贵州等省。主产于湖北三峡

4、库区及神龙架林区，栽培面积大，产量高，资源十分丰富。 本实验室对神农架产开口箭TupistrachinensisBak.的生药学、化学成分和药理活性进行了研究，结果表明开口箭正丁醇提取物对Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，细胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾报道了“开口箭中甾体皂苷元的含量测定”2。本文进一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法测定开口箭中总皂苷含量的方法。 1材料与仪器 1.1材料 开口箭根茎，采自湖北省神农架林区，其原植物标本于200207采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，原植物及药

5、材现保存于本实验室（编号TC200207SNJ）。总皂苷对照品，本实验室自开口箭分离纯化的皂苷单体3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(12)-b-D-吡喃葡萄糖基-(12)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羟基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量98%（HPLC测定）。其他试剂均为分析纯。 1.2仪器S3100紫外分光光度计（韩国Scinco公司），BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）。 2方法 2.1对照品、供试品溶液的制备 2.1.1对照品溶液的制备精密称取经干燥至恒重的开口箭总皂苷对照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫

6、升含1mg的溶液，作为对照品溶液。 2.1.2供试品溶液的制备精密称取开口箭粉末0.70g（60目筛，50干燥4h）置圆底烧瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡过夜，60回流提取两次，2h/次,减压抽滤，滤液合并，置蒸馏烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压浓缩，除尽溶剂后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2.2测定方法适量供试品溶液置干燥具塞试管，60水浴挥干溶剂后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，摇匀，置60恒温水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却15min，加入5ml冰醋酸，摇匀，同时做空白，于（4582）nm波长处测定吸光度值。

7、 2.3标准曲线的绘制与线性关系精密吸取对照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分别加入干燥具塞试管中，60水浴挥干溶剂,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，置60水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反应，加入5ml冰醋酸，摇匀，于458nm处测定吸光度，同时做试剂空白。以吸光度为纵坐标，以对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程W=0.0631+0.2835A，r=0.9997，对照品在0.100.40mg范围内线性关系良好。 3结果 3.1精密度及重现性实验精密吸取对照品溶液0.2ml,共6份，

8、按“2.2”项下方法自60水浴挥干起测定（见表1）。其RSD为1.09%，表明方法精密度良好。精密称取样品粉末0.07g，共5份，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取0.05ml,显色测定（见表2）。其RSD为4.58%，表明方法重现性良好。表1精密度实验结果（略）表2重现性实验结果（略） 3.2显色溶液稳定性实验精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别按标准曲线的制备方法显色后放置,于0，30，60，90，120min测定吸收度值（见表3）。结果表明对照品和供试品在120min内显色稳定。表3显色后溶液稳定性实验结果（略） 3.3加样回收率实验精密称取已知总皂苷含量的开口箭粉末，共5份,加入对

9、照品适量,按照供试品溶液制备方法制备，显色测定。结果见表4,平均回收率为97.2%，RSD为2.26%。表4加样回收率实验结果（略） 3.4样品含量测定精密吸取按供试品溶液0.05ml,按“2.2”测定方法项下操作，同时做空白，计算供试品中总皂苷含量。结果见表5。结果表明开口箭70%乙醇提取物总皂苷含量为135.1mg/g，其百分含量为13.51%，RSD为4.57%。表5样品中总皂苷含量测定结果（略） 4讨论 经过对皂苷类含量测定文献的统计与分析，选定下列4种显色剂：0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸、0.5ml8%香草醛乙醇溶液和5.0ml72%硫酸试液、高氯酸、0.2ml

10、5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸；4种不同的显色温度：55，60，65，70；4种不同的显色时间：10，15，20，25min；通过实验进行比较。发现用0.2ml5%香草醛-冰醋酸和0.8ml高氯酸作显色剂，显色温度为60，显色时间为20min时，对照品溶液与供试品溶液在（4582）nm波长处均有最大吸收。 对照品溶液依法显色后，溶液的波长（400700nm）扫描图中，在458和554nm两处均出现最大吸收峰，但供试品溶液的最大吸收峰分别在456nm和580nm处，表明供试品溶液在580nm处的吸收峰有其它成分干扰，而在456nm处的吸收峰无其它成分干扰，吸收稳定。 供试品溶液制备时分别用水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作溶剂，进行比较，发现70%乙醇溶液浸泡开口箭粉末时其总皂苷溶出量最大。 建立了开口箭总皂苷含量测定方法，采用5%香草醛-冰醋酸溶液为发色体系的比色法测定开口箭中总皂苷的含量，显色后溶液在120min内稳定，标准曲线在0.100.40mg范围内线性关系良好，方法的精密度和重现性好，RSD分别为1.09%和4.58%；加样平均回收率为97.2%，RSD为2.26%；测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为135.1mg/g，其平均百分含量为13.51%，R