清热解毒化浊片对肠源性内毒素血症大鼠胰腺PECAM

1、清热解毒化浊片对肠源性内毒素血症大鼠胰腺PECAM引言肠源性内毒素血症（Intestinal endotoxemia, IETM）胰腺损伤是指在肝脏原有致病因子（如高脂、酒精等）损伤基础上，通过门静脉进入肝脏且不能够被肝脏库普菲细胞（Kupffer cell，KC）吞噬清除的内毒素（Lipopolysaccharide, LPS），进入体循环形成肠源性内毒素血症，并能够再次激活多种促炎介质的释放引起炎症瀑联式反应，反过来对肝脏造成更严重的二次打击1，从而形成恶性循环，诱发导致全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）及多器官

2、功能衰竭综合征（multiple organ dysfunctin syndrome, MODS），其中以胰腺微循环障碍所致胰腺损伤已经得到广泛认可2。大量的研究表明，胰腺损伤程度与肝功能损伤程度、内毒素水平成正相关3-4。胰腺微循环是胰腺独立的功能单位，其血管完整性和血管流通性可为胰腺及周围组织提供丰富血流提供安全保障。血小板内皮细胞粘附分子-1（PECAM-1）作为免疫球蛋白超家族成员之一，表达于内皮细胞、血小板和循环中绝大部分白细胞中，且特异性地集中定位于内皮细胞间的链接处，维持血管壁的完整性，对胰腺微循环起到支架作用5。LPS 通过直接或间接作用诱发导致炎症级联反应，使得 PECAM-

3、1 表达失调而造成胰腺微循环障碍，从而启动或参与了胰腺损伤过程，进一步诱发急慢性胰腺炎或糖尿病等胰腺疾病，PECAM-1 也成为胰腺微循环及胰腺损伤的标志性指标。因此通过对 IETM 的治疗调节 PECAM-1 的表达可为我们对胰腺疾病治疗研究提供新的方向。目前，现代医学对于胰腺疾病的治疗,虽有较多有效的治疗药物及手段,然而仍然存在明显缺陷及不足。就肠源性内毒素血症胰损伤而言，现代医学应用肠内外营养支持疗法和抗生素抗菌，只起到了直接向肠黏膜提供其代谢所需营养物质，阻止肠黏膜氧化损伤，避免肠道屏障功能破坏和菌群移位，维持肠道内细菌平衡的作用6，但却没有从根本上清除内毒素，更值得一提的是抗生素并无

4、防治 IETM 的作用7。二千多年前中医经典黄帝内经确定的整体观认为，人体是以脏腑为中心，通过经络运行气血与五官、形体相联系形成一个有机的整体。在生理方面，不仅每个脏腑与有关组织存在有机联系，而且脏与脏，脏与腑功能活动也是分工协作，不可分割，故在病理上也是相互影响，治疗时则要全面考虑，才能取得好疗效。导师赵国荣教授本着中医整体观，立足中焦脾胃湿热浊毒，兼顾上焦、下焦，创清热解毒化浊片，投放临床治疗病毒性免疫性肝损伤疗效确切8-12。而现代医学的消化腺除了唾液腺外，肝、胰均为人体最大的消化腺，同属消化系统，对人体代谢起着重要的作用。它们的功能恰恰与源于黄帝内经难经的肝脾理论密切相关13。前期研究

5、，清热解毒化浊片有较好的减轻肝损伤作用，而是否对 IETM 导致的胰损伤也有保护作用尚未可知。本实验以 IETM大鼠为研究对象，观察清热解毒化浊片对大鼠血浆内毒素水平的影响，胰腺 PECAM-1、IL-1 及 IL-4 的表达及病理改变，并进一步探讨其治疗机制是否与减轻炎症反应、保护胰腺微循环有关。本研究为肠源性内毒素血症胰腺疾病提供新的治疗参考，也丰富发展了中医药与现代医学的联系。.第一部分 材料与方法1.实验材料1.1 实验动物SPF 级雄性 SD 大鼠 70 只，体重 200±20g，由湖南斯莱克景达实验动物公司提供。动物许可证号：SYXK(湘) 2013-0005，合格证

6、号：43004700007002。1.2 实验室喂养条件湖南中医药大学实验动物中心 SPF 级实验室，实验室室温(20-26)，明暗各 12h，分笼（2-3/笼）喂养，自由饮水进食，每周定时清扫粪便、更换垫料，按时通风，保持环境安静。1.3 饲料及乙醇高脂饲料14:配方为 10%猪油+2%胆固醇+0.5%胆盐+8%蛋黄粉+2%白糖+77.3%基础饲料+0.2%丙基硫氧嘧碇。普通饲料：湖南中医药大学动物实验中心提供。乙醇：52 度红星二锅头白酒（北京红星股份有限公司），批号：20140128。.2.实验方法2.1 造模：70 只大鼠在正式实验前予适应性喂养 5 天,随后按随机数字表法分组。将 1

7、0 只分为空白对照组予超纯水灌胃及普通饲料喂养、其余 60 只予酒精灌胃及高脂饲料喂养造模。灌胃剂量为 1ml/100g15，持续时间为 3 个月，每周称重两次，根据体重增加情况调整酒精及蒸馏水灌胃剂量。3 个月后，随机抽取模型组大鼠 4 只，取肝脏组织及胰腺组织 HE染色观察组织形态学改变，另取所有大鼠剪尾采血，检测肝功能及血浆内毒素水平，较空白对照组比较明显升高（P0.01）差异有统计学意义，造模成功。2.2 分组及给药造模成功后，随机取 20 只成功造模的模型组，按随机数字表法分为模型对照组和清化组各 10 只，然后空白对照组、模型对照组、清化组，分别予蒸馏水（10g/kg/d）、蒸馏水

8、（10g/kg/d）、清热解毒化浊片悬浊液（10g/kg/d）灌胃，参考药理实验方法学16人和动物间体表面积折算表，折算药物用量，每天两次（9 时和 16 时各 1 次），持续 4 周。每日观察记录大鼠的活动情况、毛色、饮食、饮水机粪便情况，每周称重两次，以适时调整给药剂量。（见表 1：）.第三部分 讨论.161.现代医学胰腺与中医脾之关系.162.中医对酒精和高脂饮食致肠源性内毒素血症的认识 .163. 清热解毒化浊片的立法依据及方药分析.184. 现代医学对酒精和高脂饮食致肠源性内毒素血症的认识.185. 现代医学对肠源性内毒素血症致胰腺损伤的认识.196. 清热解毒化浊片对肠源性内毒素血

9、症胰腺损伤大鼠的影响 .206.1 一般情况的影响.206.2 对肝脏及胰腺组织形态学的影响.206.3 对肝功能指标的影响.216.4 对内毒素的影响.226.5 对胰腺组织 IL-1 和 IL-4 表达的影响.226.6 对胰腺组织 PECAM-1 表达的影响.236.7 相关性分析.23第四部分 结论.25第三部分 讨论1.现代医学胰腺与中医脾之关系考之中医学古籍中未有胰腺之说。难经·四十二难：脾重二斤三两，扁广三寸，长五寸，有散膏半斤，主裹血，主藏意。;此散膏;实乃现代医学的胰腺;。清·王清任医林改错：脾中有一管，体象玲珑，易于出水，故名珑管。;可见其从解剖

10、形态发现胰，属脾，为脾中珑管。张山雷难经汇注笺正：胃后有甜肉一条 所生之汁，如口中津水，则古所谓散膏半斤，盖即指此，古之所以称脾者。固并此甜肉而言 ;，张氏不仅考证散膏;甜肉;为胰，而且提出其分泌之汁 运入小肠，即以化食物中之脂肪质者;。现代医学之胰腺位于胃的后方，呈三棱柱状，为人体重要的消化腺，参与蛋白质、糖类、脂肪等的代谢，可见其与中医散膏;甜肉;功能相似。圣济总录·三消通论：消瘅者高粱之疾也，肥美之过积为脾瘅，瘅病既成，乃为消中，皆单阳无阴，邪热偏盛故也。;不难发现现代过食肥甘厚味而致胰腺分泌胰岛素功能障碍诱发糖尿病，与中医学之脾瘅病机存在密切对应关系。故其从解剖形态、功能

11、、所主疾病角度得出，今之胰腺为脾之副脏，同属中焦，与脾共主运化等功能17。酒性辛、温，有毒，味甘、苦，为热毒之品，多饮则酿生湿热之邪于人体为患，成酒癖;、酒疸;等。诸病源候论·卷二：酒性有毒，而复大热，饮之过多，故毒热气渗溢经络，浸溢腑脏，而生诸病也。;高脂为肥甘厚味之品，过食之易成食滞，阻滞中焦脾胃气机而于人体酿生湿热之邪，亦于人体为病，成伤食;消渴;脘痞;食积;等。素问·奇病论：数食甘美而多肥，肥则令人内热，甘者令人中满，转为消渴;。诸病源候论·下凡二十七论：凡诸肉脯，若为久故茅屋屋漏所湿则有大毒，不可食。;酒精及高脂合而为患，酿生湿热之邪，致病更速、伤人更甚。.结论本实验通过用酒精及高脂等复合因素经过 12 周的造模，造成肠源性内毒血症胰腺损伤大鼠模型，然后用清热解毒化浊片对模型大鼠进行干预治疗。通过观察模型大鼠肝功能、血浆内毒素水平、胰腺 IL-1、IL-4、PECAM-1 的表达，以及肝脏、胰腺组织形态学改变，结果发现清热解毒化浊片对肠源性内毒血症胰腺损伤有明显的治疗作用。结论如下：1.成功造出了酒精及高脂等复合因素所致的肠源性内毒血症胰腺损伤大鼠模型。2.该药能改善肝功能、降低血浆内毒素水平、促进抗炎细胞因子 IL-4 的表达、抑制促炎细胞因子