血清蛋白与免疫固定-文档资料

1、1,孙 丽 生化室 20157 -1,血清蛋白电泳与免疫固定,2,血清含有各种蛋白质，其等电点均在pH7.5以下，若置于pH8以上的缓冲液电泳时均游离成负离子，再向正极移动。由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度也就不同，故可将血清中蛋白质区分开来。分子量小，带电荷多者，泳动速度就快，反之亦然。按其泳动速度顺序把血清蛋白粗略分为白蛋白，1、2、及球蛋白,3,常用的电泳技术,醋酸纤维素薄膜电泳 凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 : 琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质. 聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 最常用的定性分析蛋白质的电泳方法，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量. 毛细管电泳

2、:经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物,4,在电场内,每种蛋白在下列因素的影响下,以特定的速度移动 : 由电场（电压）及缓冲液的离子强度 电泳载体 胶片的蒸发程度 载体的多孔性,血清蛋白电泳的原理,5,_ _,_ _,_,加样点,带强负电荷的蛋白快速地向正极方向移动,带微弱负电贺的蛋白由于受电子力的作用下，向负极方向移动,负极,正极,蛋白在琼脂糖上电泳的原理,_ _ _,_ _ _,6,在血清蛋白电泳试剂中，蛋白质在PH值为8.8含缓冲液的琼脂糖凝胶中被分离，然后用氨基黑对其进行染色，再用酸性溶液进行脱色,7,8,正常血清蛋白电泳图谱,9,正常参考范围： Alb: 57%-68% 1: 1.

3、0%-5.7% 2: 4.9%-11.2% : 7%-13% : 9.8%-18.2,10,血清蛋白电泳的目的是什么,检测异常 : 含量的变化 : 条带中蛋白含量的增加或减少 性质的变化 : 异常条带的出现,11,血清白蛋白,血清白蛋白是血清总蛋白的主要蛋白质成分，由肝脏合成。它在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质运输、营养等方面均起着很重要的作用,12,白蛋白部分的变化,白蛋白浓度升高： (1)常见于严重失水，血浆浓缩所致。如严重脱水、休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能降低症。 (2)静脉输注白蛋白过多。 (3)尚未发现单纯白蛋白浓度升高的疾病,13,白蛋白浓度降低： (1)白蛋白合

4、成不足: 急性或慢性肝脏疾病，由于白蛋白半衰期较长，在一般急性肝病患者中，其浓度变化不明显； 蛋白质营养不良或吸收不良。 (2) 白蛋白丢失： 各种肾病，Alb从尿中丢失； 肠道炎症性疾病； 烧伤及渗出性皮炎等，可从皮肤丧失大量Alb。 (3)白蛋白分解代谢增加：组织损伤（手术和创伤）或炎症使组织分解增加，需要Alb大量补充,14,4)白蛋白的分布异常: 肝硬化导致门脉高压时，由于合成减少和大量Alb漏入腹水的双重原因，使血浆Alb显著减少。 (5) 无白蛋白血症： 是极少见的遗传性缺陷，血浆Alb含量常低于1g/L，可能无水肿症状出现，部分原因是血管中球蛋白含量代偿性升高所致（一般血浆Alb

5、低于28g/L时，会出现水肿,15,16,双白蛋白: 持久型 ：家族性血清白蛋白异常的疾病，极少见。 暂时型 ：由药物引起 如：大量使用抗生素或水杨酸类药物时，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失,17,双白蛋白血症,18,1球蛋白区域的变化,减少: 肝细胞的缺失， 营养不良, 蛋白的丢失, 先天性的a1抗胰蛋白缺乏 增加: 炎症引起a1区域的增高： a1酸性糖蛋白， a1抗胰蛋白酶和结合珠蛋白的增加,19,急性炎症,20,2球蛋白的变化,减少:肝细胞的缺失, 营养不良, 蛋白的丢失 增加:炎症 (伴随 a1区域的增高), 肾病综合症 (a2 巨球蛋白的增加伴随b区域的增高，同时白蛋

6、白减少)。 出现游离轻链或完整的免疫球蛋白伴随着a2的变化,21,双条带: 溶血标本 ：结合珠蛋白-血红蛋白结合, 观察标本的颜色 ， 结合珠蛋白显型, b 脂蛋白的异常移动 ：比正常 b 脂蛋白移动速度快， 出现单克隆条带,22,双 a2 条带 : 溶血血清标本,g,b,a2,a1,Alb,23,肾病综合症,总蛋白= 42 g/l,24,球蛋白的变化,减少: 肝细胞的缺失, 营养不良, 蛋白的丢失. 增加: 贫血症的转铁蛋白增加, 脂蛋白的增加, 酒精性硬化（肝硬化）中的-桥连, 出现单克隆成分. 肾病综合症,25,酒精性硬化（肝硬化）中的- 桥连,g,b,a2,a1,白蛋白,26,球蛋白区

7、域的变化,减少: 在儿童和青少年中属生理现象（不包括带着母亲所有IgG的新生婴儿） 免疫球蛋白的缺失， 肾上腺皮质类脂醇，免疫抑制性治疗, 化疗或放射性治疗， 轻链骨髓瘤 增加: 肝的感染、硬化、炎症而出现的多克隆条带（部分原因是抗原刺激肝外网状内皮系统并诱发免疫反应产生抗体所致,27,球蛋白区域的变化,异常条带: 出现纤维蛋白原 ：血浆， 区的单克隆条带：恶性或良性 寡克隆条带：一般与自身免疫类疾病、先天性缺失、滤过性病毒感染及免疫抑制性治疗相关 C反应蛋白的异常增高,28,低球蛋白血症,29,血浆电泳中出现的纤维蛋白原,为了避免单克隆条带的混淆，必须对血清样本进行确认,30,高球蛋白血症,

8、31,弱单克隆条带,32,强单克隆条带,33,双克隆条带,34,寡克隆条带,35,临床疾病的识别 炎症 肝病 肾病 “M”蛋白的筛查 对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白 早期检出无症状的骨髓瘤患者 对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察,血清蛋白电泳的临床应用,36,正常血清蛋白电泳图谱,37,急性炎症白蛋白区降低，1，2升高,P N,38,慢性炎症白蛋白区降低，1，2，,升高,39,肝病时的电泳图谱,40,N P,肝硬化 - 桥,beta 区：多克隆Ig A,41,N P,总蛋白浓度降低(低于 60g/l,肾病综合征,42,原因: 免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病,低免疫球蛋白 区降低,N P,

9、43,高免疫球蛋白 区升高,原因: 慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿,N P,44,血清蛋白电泳图谱常见类型总结,N: 正常,45,什么是M蛋白,单克隆 浆细胞 恶性增殖产生的均一蛋白 “M” Multiple Myeloma 多发性骨髓瘤 Macroglobulinemia 巨球蛋白血症 Malignant lymphoma恶性淋巴瘤 Monoclonal Gammapathies单克隆丙种球蛋白病 电泳曲线：单株峰,46,正常浆细胞,多克隆免疫球蛋白,P1 P2 P3 P4 P5,正常电泳结果,免疫球蛋白电泳结果（正常,正常 所有浆细胞同步合成免疫球蛋白= 多克隆免疫球蛋白,47

10、,浆细胞恶性增殖,多克隆免疫球蛋白,单克隆免疫球蛋白,异常电泳结果 M蛋白,免疫球蛋白电泳结果（异常,骨髓瘤,48,多克隆 Igs,单克隆Ig-“M”蛋白,正常,异常,49,多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma MM,50,多发性骨髓瘤临床表现/并发症,Calcium,Renal,Anemia,Bone,51,涉及多个科室,52,多发性骨髓瘤诊治现状,晚 骨折 预后差 增加负担 感染发生率高 肾脏病变不可逆,死亡率,53,1557例多发性骨髓瘤误诊分析,吕鸿雁, 张金巧. 河北医药. 2009, 31(9): 1052-54,误诊率：65.17,重视实验诊断,39.8,15.6,19

11、.8,7.6,15.6,54,实例,患者信息 性别：女 年龄：73 科室：中医科 诊断：贫血,55,多发性骨髓瘤分型,早发现、早诊断、早治疗,早发现、早诊断、早治疗,肿瘤,M蛋白筛查是关键,56,国际骨髓瘤基金会 2010推荐的M蛋白早期筛查流程,57,正常血清,单克隆 Ig,单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测,血清蛋白电泳是检测M蛋白的唯一方法,若在区出现异常的峰,可以初步判定为M蛋白峰,58,白蛋白,Gamma,Beta-2,Beta-1,Alpha-2,Alpha-1,徐玲令, 杨再兴, 赵文静, 屠小卿, 高春芳, 孔宪涛. 第二军医大学学报. 2004, 25(12): 1343-45

12、,单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测,单克隆M蛋白的电泳位置,59,血清蛋白电泳出现下列异常结果,在区出现明显条带 在2 或区带出现多余条带 条带含量出现单一升高,免疫固定电泳（IFE） ImmunoFixation Electrophoresis,60,M蛋白？ 什么类型,为什么要做免疫固定,G A M kappa lambda,61,型别 例数 % IgG型骨髓瘤 205 31.73 IgA型骨髓瘤 93 14.40 IgM型骨髓瘤 56 8.67 IgD型骨髓瘤 12 1.86 重链病 5 0.77 轻链病 214 33.13 半分子病 1 0.15 7S IgM 2 0.31 BMG 4

13、9 7.59 双M蛋白病 8 1.24,上海新华医院, 2005年,出现异常血清蛋白结果 需要免疫分型电泳进一步确认,646例M蛋白类型分类,62,免疫球蛋白,免疫球蛋白是机体的正常生理成分 分类 重链：IgG、IgA、IgM 、 IgD、IgE 轻链：、 10种类型,63,免疫固定电泳,将待测血清或尿标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗k或轻链或各类重链的抗血清抗体，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链或重链型别,64,正常血清,65,确认IgM 型M蛋白,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1,IF,在区发现疑似M蛋白,66,确认IgM + IgM 型 双克隆M蛋白,在区发现疑似双克隆M蛋白,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （2,67,IgG Lambda型M蛋白,IgA Lambda型M蛋白,2-区 2区,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （3,68,需要使用抗游离轻链和/或抗 Ig D和Ig E的抗血清确认,该结果为 l型游离轻链,HYDRAGEL BENC