OMEGAdna提取说明书(最新整理)

1、材料与仪器：离心机（至少 14000g）、1.5ml 或 2ml 无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。试验之前：先用 absolute ethanol 稀释 dna wash buffer concentrate,每瓶 dna wash buffer concentrate 加 80ml（200 份装） 试验步骤：1. 使用 mortar 和 pestle 在 liquidnitrogen 中研磨样品（不超过 50 毫克），放入 1.5ml microcentrifuge tube。2. 加 350ulbuffer ml1 和 25ul proteinase k,涡旋混匀，

2、60孵育（最少 30 分钟），大多数孵育不超过 4 小时或者 37孵育 1 晚。3. 裂解产物加 350ul 氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。 10000g 室温离心 2min，转移上清液到 1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。4. 估计步骤 3 supernatant 体积，加等集体的 buffer mbl，涡旋 15s 混匀，70孵育 10min。5. 加步骤 3 等体积的无水乙醇，涡旋 15s 混匀。（tips:300ul 上清液+300ul buffer mbl+300ul absolute ethanol）6. 把柱

3、子和提供的 2ml 收集管装配好，加步骤 5 的溶液750ul，10000g 室内离心 1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml 收集管。7. 把步骤 5 剩余的混合物按照步骤 6 的方法离心，但抛弃提供的 2ml收集管。8. 把柱子放在新的 2ml 收集管，加 500ul hb buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。9. 重复利用 2ml 收集管，加 700ul dna wash buffer,10000g,1min,抛弃被离心的液体，重新利用 2ml 收集管。10. 重复步骤 9，加 700ul dna wash buffer,室温 15000g,2min（这一步关键是

4、去除微量的乙醇，以防其感染下游的实验）。11. 把柱子放入 1.5ml 离心管，预热 elutionbuffer60-70,加 50- 100ul 到柱子内，室温下浸泡 2min，10000g，1min 离心。12. 使用 50-100ul elution buffer,重复洗脱步骤，再次收集 dna 样品。“”“”at the end, xiao bian gives you a passage. minand once said, people who learn to learn are very happy people. in every wonderful life, learni

5、ng is an eternal theme. as a professional clerical and teaching position, i understand the importance of continuous learning, life is diligent, nothing can be gained, only continuous learning can achieve better self. only by constantly learning and mastering the latest relevant knowledge, can employees from all walks of life keep up with the pace of enterprise development and innovate to meet the needs of the market. this document is also edited by my studio professiona