实验报告—实验五、果蔬抗氧化物质含量及抗氧化能力测定

1、.实验五、果蔬抗氧化物质含量及抗氧化能力测定.一、实验目的了解果蔬中主要活性物质，掌握其测定方法。二、方法步骤2.1 果蔬汇总活性物质测定2.1.1花青素含量测定1.称取苹果果皮4g，加入适量石英砂，分次加入10ml1%HCl溶液研磨成匀浆，将匀浆液全部转移至100ml三角瓶，再加50-60ml1%HCl溶液抽提40min至样品无色，将抽提液过滤转移至100ml容量瓶，并用1%HCl溶液定容。2.分别取上清液和1%HCl溶液各1ml，分别加入pH4.5DE 0.4M醋酸钠溶液各4ml；同时取上清液和1%HCl溶液各1ml，分别加入pH1.0的0.25M氯化钾溶液各4ml，摇匀混合平衡40min

2、之后，转入光径1cm的比色皿，于520nm和700nm下测定其吸光度。提取液的花青素浓度（mg/L）=A/L103MW稀释倍数式中：最终吸光度A=（A520nm，pH1.0-A70nm，pH1.0）-（A520nm，pH4.5-A700nm，pH4.5）苹果主要花青素是1-矢车菊素-3半乳糖苷，以其为标准，MW为摩尔质量502.5，为摩尔吸光系数30200，L为比色皿光路长（1cm），最终以1g试样含有花青素的量（mg）来表示。2.1.2类黄酮含量测定1.芦丁标准曲线 精确称取芦丁标准样品（105C干燥至恒重）0.0592g，加入60%乙醇，加热使其样品溶解，定量转移至200ml容量瓶中，配置

3、成0.296g/L的标准溶液。分别取上述芦丁标准溶液0、1、2、3、4、5ml，用30%乙醇补充至10ml，分别加入1ml5%NaNO2，摇匀后放置5min，加入1ml10%Al（NO3）3，6min后在加入5ml1MNaOH，混匀，用30%乙醇定容至100ml，10min后于波长510nm下测定吸光值，绘出芦丁标准曲线。2.称取4g番茄样品，加少量石英砂和5-10ml30%乙醇研磨成匀浆，用30%乙醇定容至100ml，过滤至三角瓶中后，取绿野和30%乙醇各2ml，分别加蒸馏水3ml、5% NaNO2 0.3ml，摇匀静置5min，加入10%Al（NO3）3 0.3ml，放置6min，再加1M

4、NaOH 2ml摇匀，5min后于510nm波长下测定吸光值，以芦丁曲线作标准曲线计算类黄酮含量。3.计算样品中每克鲜重中类黄酮含量（mg/g）。三、实验结果1. 花青素含量测定表一 吸光度测定值吸光值520nmk*ABS700nmK*ABSNaAc0.5830.58250.2730.2727KCl0.890.88960.2450.2445由图表可知，A=（A520nm，pH1.0-A70nm，pH1.0）-（A520nm，pH4.5-A700nm，pH4.5）=0.3353，所以花青素浓度（mg/L）=A/L103MW稀释倍数=27.90 mg/L。2. 类黄酮含量测定测得，番茄的吸光度为：

5、0.059，代入公式y = 11.74x + 0.0032 得到番茄的类黄酮含量是 0.0048g，所以所以番茄样品每克鲜重中类黄酮含量为 4.8mg/g。四、思考题1. pH示差法测定花青素的原理，注意事项？花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物，广泛存在于植物中的水溶性天然色素。花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。对于一个给定的PH值，在花色苷的4种结构之间存在着平衡：蓝色的醌式（脱水）碱，红色的花烊正离子，无色的甲醇假碱和查尔酮。花色苷在PH值很低时，其溶液呈现最强的红色。随着PH值的增大，花色苷的颜色将褪至无色，最后在高PH值时变成紫色或蓝色。PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数，起干扰作用的褐