《临床检验仪器与技术》复习指导

1、临床检验仪器与技术复习提纲 第六章 电泳仪器与技术 一、发展历程 1809年，俄国科学家列伊斯，发现电泳现象。 1897，Kohlausch导出了带电粒子移动的理论公式。 20世纪初，Hardy发现许多生物胶体粒子的迁移率取决于电解质溶液的pH。 1937年瑞典科学家Tiselius建立了界面电泳技术，证明了血清是由白蛋白、1、2、和蛋白组成，获得1948年诺贝尔化学奖。 1950年后，区带电泳从发展到成熟。 1980年以来，毛细管电泳逐渐受到重视。 二、基本原理 不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。 1、影响电泳

2、速度的因素 1）内在因素 从公式V = EQ/6r，我们认识到：不同物质颗粒具有不同的电泳速度；粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度()成反比。 2）外界因素 A、电场强度 B、溶液的pH值 pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度； 蛋白质电泳：pH8.2-8.8巴比妥或硼酸缓冲液 核酸电泳：TAE、TBE、TPE C、溶液的离子强度I 溶液的离子强度I，离子间的相互作用力越强，电泳速度 D、溶液粘度 粘度电泳速度 E、吸附作用（介质对样品的滞留作用） 吸附作用越强，电泳速度 三、常用电泳分析方法 1、醋酸纤维素薄

3、膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 2、琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持介质进行的电泳。具有大量微孔；较高的机械强度；无毒，不需要催化剂；具有热可逆性，低熔点琼脂糖回收样品容易；生物中性，与别的生物材料结合性低；具有高灵敏度放射自显影；胶凝温度34-43。 3、聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺凝胶作为介质，此凝胶机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率高。具有浓缩效应、分子筛效应和电荷效应。其中的聚丙烯酰胺双向电泳（2-DE）第一向采用等电聚焦，根据复杂的蛋

4、白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳，按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。 4、毛细管电泳 是以柔性毛细管柱作为分离通道，以高压直流电场作为驱动力，对各种小分子、大分子或细胞等进行高效分离、检测或微量制备等有关技术的总称。它具有热效应低；高效（每米塔板数为十万、百万、千万）；高速（几十秒内完成）；高灵敏度、高分辨率（10-1910-21mol）；样品用量少（进样体积仅为纳升，样品浓度低于10 -5mol/L）；毛细管内径很小（一般小于100um）；应用范围广（无机离子到整个细胞）；重复性

5、好；进样的准确性的优点。 第七章 流式细胞分析仪器与技术 一、流式细胞术是一种对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析和分选的技术。 二、流式细胞仪包括液流系统、光路系统、信号检测系统、数据分析与显示系统和分选系统。 1、液流系统由样本和鞘液组成。 样本流和鞘液流分别在各自压力系统作用下经专门管道进入流动室。鞘液辅助样本流，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔，保证被测细胞不会脱离液流的轴线方向并与激光正交。 2、光路系统主要由激发光源的激光器和各种滤光片构成。 3、信号系统包括光电检测器、放大电路和模数转换器。 受激发产生的光信号包括散射光信号和荧光信号。散射光信号又分为前向角散射光（FSC）和侧向角散射光(SSC)。FSC与细胞的大小有关；SSC与细胞的颗粒性及其内部复杂程度有关，反映细胞内的精细结构和颗粒性质等信息。光电检测器包括光电二极管(photodiode)和光电倍增管(photomultiplier, PMT)，光电二极管 光灵敏度低，用于测定强信号（如FSC）；PMT光灵敏度高，用于测定弱信号（如SSC, FL1, FL2, FL3, FL4)。电信号的放大