风湿病自身抗体荧光模式

1、风湿病自身抗体荧光模式 及临床意义,风湿性疾病相关自身抗体 1.抗核抗体谱：ANA、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗DNA抗体、抗DNA组蛋白复合物抗体、抗核仁抗体、抗其他细胞成分抗体 2.抗磷脂抗体(ALP)：抗心磷脂抗体（ACL）、抗2糖蛋白1（2GP1）抗体 3.抗中性粒细胞胞浆抗体谱( ANCA )：anti-PR3、 anti-MPO 4.早期诊断相关抗体：抗角质蛋白抗体（AKA）、抗Sa抗体、抗核周因子（APF）、抗RA33抗体、抗CCP抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA,抗核抗体(ANA)的概念 传统定义：是以细胞核内成份为靶抗原的器官非 特异性自身抗体总称。 现代定义：是指抗

2、细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸(nucleic acid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称。 靶抗原分布：细胞核、细胞浆、细胞骨架、 细胞分裂周期,ANA筛选实验基本原理 患者血清中存在的ANA(第一抗体)能与相应细胞核（浆）抗原成分结合，再用荧光标记的抗人球蛋白抗体(第二抗体)复染，经过荧光显微镜观察即能反映ANA的存在,而且通过对患者血清做一定稀释后的检测还可以对抗体含量作半定量（滴度）测定。 ANA阳性的定义:一般将超过95正常人群ANA水平数值定义为ANA阳性，对大多数实验室而言，通常认为IFANA滴度1：80为阳性,

3、原因 ：在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖,1:1000,1:1000,ANA核均质型和着丝点型,1:100,1:100,ANA 核均质型和核仁型,推荐一个标本平行作两个稀释度 1:100和1:1000,整个细胞核呈 现一片模糊而均匀的荧光，有时核仁部位也可见到荧光，分裂期细胞的染色体区也出现荧光,以HEp-2细胞为基质检测ANA免疫荧光模式,抗组蛋白抗体(AHA,靶抗原：组蛋白亚单位H1、H2A、H2B、H3、H4及其复合物抗体（主要抗原H1和H2B） 功能：组蛋白+DNA ：核小体 相关性：药物（普鲁卡因胺、肼屈嗪等）诱导性的红斑狼疮： 100%（唯一的标志抗体） SLE： 56.4%

4、 （EUROIMMUN研究） 40% - 80% 其它风湿性疾病： 少见,抗非组蛋白抗体,抗ENA抗体：Sm、SSA、SSB 抗染色体抗体：抗着丝点,核颗粒型 核内荧光呈斑点或颗粒状，核膜存在，分裂期细胞的染色体区无荧光，此型多与可溶性核抗原（ENA）有关,抗Sm抗体 靶抗原：与U1-、U2-、U4-、U5- 或U6-nRNA连接的6 种不同蛋白分子（core proteins B, B, D, E, F, G） 功能：切割pre-mRNA 相关性：SLE:6.3% （EUROIMMUN研究）5% - 30,核粗颗粒型（ RNP/Sm类型,抗核糖核蛋白抗体（抗U1-nRNP） 靶抗原：与U1-

5、nRNA 连接的3个颗粒特异性蛋白 （70K、A和C） 功能：切割pre-mRNA 相关性：MCTD: 95% - 100%SLE: 17.5% （EUROIMMUN研究） 15% - 40,抗SS-A抗体/抗Ro抗体 靶抗原：与 Y1, Y3, Y4 或Y5 型 RNA 连接的2个蛋白 （52 kDa和60 kDa） 功能：调节 mRNA 的转译活性 相关性： 干燥综合征：40% - 95%SLE: 34.7% （EUROIMMUN研究）20% - 60,抗SS-B抗体/抗La抗体 靶抗原：与 小分子RNA （U6-RNA, pre-tRNA） 结合的磷脂蛋白 （48 kDa） 功能：RNA

6、多聚酶III的辅助蛋白 相关性：干燥综合征： 40% - 95% SLE: 13.3% （EUROIMMUN研究） 10% - 20,核细颗粒型（SS-A/SS-B类型,抗着丝点抗体 靶抗原：连接动粒（着丝点） 上的4个蛋 白分子：A- 、B- 、C-、D-蛋白，分 子量（17 、80、140、50 kDa) 主要的靶抗原：着丝点B蛋白 （与 IIFT相关性： 100%） 相关性：对系统性硬化诊症局限型（CREST综合征）有确诊意义（80%-95%）,ANA： 着丝点型,抗DNA抗体(ssDNA / dsDNA) 靶抗原：单链、非天然（变形）DNA（嘌呤和嘧啶碱基对）双链、天然DNA （脱氧核

7、糖核酸结构） 相关性：ssDNA 类风湿80.8% （EUROIMMUN研究）SLE40.0% （EUROIMMUN研究） 干燥综合征 44.0% （EUROIMMUN研究）皮肌炎12.3% （EUROIMMUN研究）类风湿性关节炎 51.7% （EUROIMMUN研究）献血员 6.8% （EUROIMMUN研究）dsDNA SLE30% - 90,抗ds-DNA（绿蝇短膜虫,抗DNA组蛋白复合物抗体 狼疮细胞 抗DNP抗体 抗核小体抗体,抗核仁抗体 抗RNA多聚酶/ 原纤维蛋白 NOR-90和Th/To等抗体,RNA多聚酶I、II和III 靶抗原：多个蛋白亚单位组成的核 仁酶复合物 功能：

8、多聚酶 I: 转录rRNA基因 多聚酶 II: 转录 mRNA 基因 多聚酶 III: 转录 tRNA 基因 相关性： 硬皮病： 4,核仁颗粒型（抗RNA多聚酶抗体,核仁均质型（Scl-70类型,抗Scl-70抗体 靶抗原：DNA拓扑异构酶I 降解产物（100 kDa） 功能：DNA复制和翻译过程的辅助蛋白 相关性：系统性硬化症： 79.7% （EUROIMMUN研究） 25% - 75%抗Scl-70抗体阳性患者肺间质纤维化的危险性明显增加，并且提示预后不良,抗PM-Scl抗体 靶抗原：多个蛋白分子的复合物主要的靶抗原 100 kDa（与 DNA拓扑异构酶I不同） 功能：未知 相关性：硬皮病

9、： 2% - 5% 皮肌炎： 8% 重叠综合征： 24,核仁均质型（PM-Scl类型,抗原纤维蛋白（U3-nRNP） 抗体（AFA) 靶抗原：与基础蛋白 （34 kDa） 连 接的U3-nRNA和其它5个蛋白 功能： 分离pre-rRNA 相关性： 硬皮病： 5% - 10,核仁颗粒型（ 抗原纤维蛋白 抗体,抗增殖性细胞核抗原抗体 靶抗原: PCNA 功 能: DNA聚合酶 的辅助蛋白 相关性: SLE的特异性抗体 3,抗周期蛋白I抗体,抗周期蛋白II抗体,抗核点型抗体 主要有两种荧光模型 少核点型(p80卷曲蛋白抗体）： 1-5个点；SLE、干燥综合症、 原发性胆汁性肝硬化 多核点型（Sp1

10、00)：5-20个点，常与线粒体抗体同时出现；原发性胆汁性肝硬化、进行性系统性硬化症、SLE、重叠综合症,ANA：核点型,抗Ku抗体 靶抗原： 66KD 、 88KD核蛋白 相关性：PM/DM 、 SLE,核细颗粒/网状型（抗Ku抗体类型,HEp-2细胞/灵长类肝脏：抗核膜型,抗中性粒细胞抗体（ANCA） 一组与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的一些特异性抗原发生反应的自身抗体 靶抗原谱：丝氨酸蛋白酶3（PR3） 髓过氧化物酶（MPO） 杀菌/通透性增高蛋白（BPI） 人白细胞弹性蛋白酶（HLE） 乳铁蛋白（LF） 组织蛋白酶G（CG） 溶菌酶（LYS） 天青杀素（AZU,ANCA荧光染色模型,固定

11、剂作用人为形成 胞浆型: C-ANCA (cytoplasmic pattern) 主要靶抗原成份是PR-3(在活动性韦氏肉芽肿(WG)中阳性率几乎100%,特异性在90%以上,也可见于显微镜下多血管炎等原发性血管炎,且与疾病活动度具有明显相关性)。 核周型: P-ANCA (perinuclear pattern) 主要靶抗原成份是MPO(要与坏死性血管炎，特发性坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)，Churg-Strauss综合征及炎症性肠病等有关,在SLE患者可有10%15%阳性,RA患者存在关节外损害及血管损害时也可呈阳性)。 非典型型: X-ANCA (atypical patter

12、n) A-ANCA 为上述两型的混合型,P-ANCA C-ANCA,目前ANCA临床常规检测存在的问题 仅用IIF法检测ANCA，而不检测ANCA特异性抗体降低了ANCA对疾病诊断的特异性 仅检测抗PR3和抗MPO两种特异性抗体，而不做 IIF-ANCA，降低了ANCA对疾病诊断的应用范 用IIF法检测ANCA时，未能严格排除ANA的干扰，出现假阳性结果 IIF和/或ELISA 的检测仅为定性结果，而无定量结果,类风湿关节炎的自身抗体,名 称,敏感性(,特异性(,类风湿因子 RA33/36抗体 Sa抗体 抗角蛋白抗体 抗核周因子 抗CCP抗体 抗CB10抗体 抗BiP抗体,50-70 25-4

13、5 37 33 38-62 60-70 72 70,86 93.6 78-97 87-92 70-90 96 70-88 92,不同抗体在RA诊断中的意义,系统性红斑狼疮的自身抗体,抗 体 敏感性 (%) 特异性 (,抗核抗体 (ANA) dsDNA抗体 抗Sm抗体 膜DNA抗体 核小体抗体 U1RNP抗体 SS-A 抗体 SS-B 抗体 抗心磷脂抗体 类风湿因子 PCNA抗体 组蛋白抗体 核蛋白抗体,80 95 99 94 92 87-94 70 40 75 30 95 50 50,99 70 25 78 85 50 25-35 15 20-40 25 5 30-80 58,干燥综合征的自身抗体,自身抗体 阳性率(,ANA 抗SSA抗体 抗SSB抗体 抗a-胞衬蛋白抗体 抗M3受体抗体 类风湿因子 ANCA 抗M2抗体 ACA 抗RNP抗体,60-80 50-70 30-60 65-87 92 60-