拟层孔菌属中7种羊毛甾烷型三萜抗肿瘤活性及构效关系研究

1、拟层孔菌属中7 种羊毛甾烷型三萜抗肿瘤活性及构效关系研究羊毛甾烷型三萜 (LTT) 类成分是在多孔菌中普遍存在的抗肿瘤活性成分。本文对多孔菌中 LTT 类物质的结构、抗肿瘤构效关系及抗肿瘤机理进行了研究, 包括以下四部分内容 : 首先 , 对多孔菌科 (polyporaceac)中 LTT 类成分的结构及药理活性研究进展进行综述。到目前为止 , 从多孔菌科 (polyporaceac)真菌中共发现了 159 种 LTT,LTT 类单体具有抗肿瘤、 抗炎和抗菌等药理活性。 这些 LTT结构相似而抗肿瘤活性却差别很大 ,LTT 结构中哪个位置的变化引起了抗肿瘤作用的差异性以及LTT类成分是如何发挥

2、抗肿瘤作用等问题还没有明确的解释。化学方面 , 本文选取拟层孔菌属中药用拟层孔菌 (Fomitopsis officinalis)子实体和红缘拟层孔菌 (Fomitopsis pinicola)子实体为获取 LTT 类物质的试验原材料 , 在前期工作的基础上 , 对菌物中 LTT 类组分的提取工艺及分离方法进行了改进 : 提取时 , 采用石油醚 (60-90 ) 和乙酸乙酯两种试剂梯度提取LTT 类组分的方法代替乙醇提取再用不同极性的有机试剂萃取或者先用石油醚(30-60 ) 脱脂再用氯仿、乙酸乙酯提取 LTT 类组分的方法 ; 分离纯化方面 , 本文采用精细接瓶的方法代替组分接瓶的方法。通过

3、改进 , 大幅度提高了 LTT 单体的得率。共分离鉴定的 LTT 单体及得率 :( 化合物 1)Fomitopsin C(0.004%),(化合物2)3- 酮基 - 去氢硫色多孔菌酸 (0.0964%),(化合物 3) 去氢齿孔酮酸(0.1721%),( 化合物 4)3- 乙酰氧基 -8,24-羊毛甾二烯 -21- 酸(0.1043%),(化合物5) 松苓酸 A(0.0754%),( 化合物 6) 栓菌酸 (0.0065%),( 化合物 7) 齿孔酸 (0.0087%) 。构效关系方面 , 采用 MTT法测试 7 种 LTT 单体化合物对人乳腺癌 MCF-7细胞、人宫颈癌 Hela 细胞、人肝

4、癌 HepG2细胞和人肺癌 A549 细胞增殖的影响 , 并初步探讨 LTT类化合物抗肿瘤的构效关系 ; 结果表明 , 上述 7 种单体化合物对 4 种肿瘤具有不同程度抑制作用 , 并且表现出了构效关系 ,LTT 结构中 3 位羟基被酮基或乙酰基取代和 C 环中 15 位连有羟基 , 都可以增强 LTT 类化合物的抑瘤作用。体内抗肿瘤方面 , 采用 H22荷瘤小鼠模型 , 对比研究体外抗肿瘤活性较好的化合物 2、 3、4、5 对 H22荷瘤小鼠的影响。通过以下三方面进行研究:(1) 通过实体肿瘤大小的测量 ,HE 染色法观察肿瘤切片细胞的形态变化和肿瘤匀浆液中血管内皮生长因子VEGF(Vasc

5、ular Endothelial Growth Factor)含量的改变 , 对比研究 4 种化合物对肿瘤的影响。结果表明 4 种化合物都有一定的抑瘤作用, 并呈现一定的剂量依赖关系。化合物 2、4、5 高剂量组的抑瘤率分别为65.31%、59.75%和 58.72%, 接近阳性药组的抑瘤率 69.19%。肿瘤病理切片观察结果显示,4 种单体化合物作用后 , 肿瘤细胞发生变形、 坏死和生长受到抑制 , 其中化合物 2 和化合物 4 的作用明显 , 并且坏死面积随用药剂量增强而增大。 肿瘤组织中的VEGF的检测结果表明 ,4 种单体化合物对肿瘤组织中 VEGF的表达呈现较好的抑制作用, 化合物

6、2 和化合物 4 的抑制作用强于化合物3 和化合物 5。(2) 通过检测荷瘤小鼠的免疫器官指标及血清中免疫因子IL-2 、IL-4 、IFN- 和 TNF-含量的变化 , 探讨 4 种化合物对荷瘤小鼠免疫系统的影响。结果分析表明 , 与空白对照组相比 , 小鼠荷瘤后脾指数升高。与模型组相比 , 化合物 2、 3 的高中剂量组可使荷瘤小鼠的脾脏指数降低, 但不明显 , 低剂量反而可使荷瘤小鼠的脾脏指数升高(P<0.05);化合物 4 可使脾脏指数降低 ; 化合物 5 的高、低剂量组使脾脏指数升高(P<0.01)。化合物 2、3、4、5 对荷瘤小鼠的胸腺指数的影响没有规律性。化合物2、3、4、5 可以降低荷瘤小鼠血清中IL-4的含量 , 使IFN- 升高 ,对 TNF-和IL-2影响较小。(3) 通过检测荷瘤小鼠肝脏组织匀浆液中MDA、 SOD酶、CAT酶和 GSH-Px酶的含量水平 , 初步探讨 4 种化合物对荷瘤小鼠抗氧化功能方面的作用。结果显示 , 与模型相比 , 各给药组的 MDA含量均有不同程度的下降, 而各化合物的高剂量组的MDA含量显著性降低 (P<0.05);与模型组相比 , 各给药组对SOD酶和 CAT酶含量水平影响小 ,