补骨脂平喘作用分析论文

1、补骨脂平喘作用分析论文1材料与仪器 1.1动物 SD大鼠，70只，SPF级，雌雄各半，180g左右，合格证号：0012625，由广州中医药大学实验动物中心提供。 1.2试剂 卵白蛋白批号：970612上海化学试剂公司；氢氧化铝干粉批号：20020301-2广州化学试剂厂；灭活百日咳杆菌（100亿个/ml）广东省中医院提供；大鼠IL-4（批号20060620）、IFN-（批号20060620）ELISA试剂盒由晶美生物工程有限公司提供；IL-5（批号20983008）ELISA试剂盒由BanderMedsystems提供。 1.3补骨脂不同溶剂提取物补骨脂95%乙醇提取物浸膏，浓度：3.45g药

2、材/ml（简称浸膏）；补骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物，浓度：10.0g药材/ml（简称石油醚萃取物）；补骨脂95%乙醇提取醋酸乙酯萃取物，浓度：6.67g药材/ml（简称醋酸乙酯萃取物）；补骨脂95%乙醇提取水萃取物，浓度：10.0g药材/ml（水萃取物）；补骨脂水提取物，浓度：10.0g药材/ml（简称水提取物）；补骨脂95%乙醇提甲醇洗脱物，浓度：2g药材/ml（简称甲醇洗脱物），以上试剂均由广州中医药大学中药学院提供。 1.4仪器酶标仪BIO-RADSModel550，日本；CSW-型超声雾化器汕头光电研究所；10L玻璃干燥器。 2方法 2.1分组 将动物随机分成7组，10只/组：哮喘

3、模型组（给水，1.0ml/100g）、浸膏组（药材0.9g/100g）、石油醚萃取物组（药材2.5g/100g）、醋酸乙酯萃取物组（药材1.7g/100g）、水萃取物组（药材2.5g/100g）、水提取物组（药材10.0g/100g）、甲醇洗脱物组（药材2.5g/100g）。以上各组动物连续灌胃给药治疗10次，1次/d。末次治疗后2h，各组动物心脏采血5ml，1000r/min离心15min，血清分装（1ml/管）保存于70低温冰箱内待测：IL-4，IFN-，IL-5（严格按照ELISA试剂盒说明书分别检测）。 2.2卵蛋白哮喘大鼠模型的建立 2.2.1大鼠致敏 上述分组中每只动物腹腔注射抗原

4、液0.5ml/100g(含卵蛋白100mg、氢氧化铝干粉100mg和2.5109个百日咳杆菌/ml,制成悬浊液)7致敏第1次,次日每只大鼠再次腹腔注射0.5ml/只致敏液加强。 2.2.2激发和治疗 首次致敏后第15天，于每天上午89时大鼠置于10L玻璃干燥器内超声雾化吸入2%卵蛋白20min激发哮喘,连续14d。激发后第4天起，于每天激发后大鼠口服给相应试剂治疗（见“2.1实验分组”）。正常组以生理盐水取代抗原液按0.5ml/100g腹腔注射致敏大鼠，第2天以0.5ml/只腹腔注射生理盐水加强；首次致敏后第15天，每天上午89时该组大鼠超声雾化吸入生理盐水20min激发哮喘,连续14d。激发

5、后第4天起，于每天激发后大鼠口服给蒸馏水治疗。 2.3统计分析结果 采用四川大学黄志勇主编的（PEMS3.0）中国医学百科全书医学统计学统计软件包进行统计：两组均数比较t检验（方差齐）或t（方差不齐）。 3结果 3.1补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IL-5含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，血清IL-5含量呈下降趋势，其中补骨脂浸膏、水萃取物、水提取和甲醇洗脱物各成分组大鼠血清IL-5含量降低明显，与哮喘模型组比较P0.05，无显著性差异。 3.2补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IL-4含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，血清IL-4含

6、量呈升高趋势，其中补骨脂浸膏、石油醚萃取物和水提取物各成分组大鼠血清IL-4含量升高明显，与哮喘模型组比较P0.05，无显著性差异。 3.3补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IFN-含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，不同溶剂成分大鼠血清IFN-含量升降不一致，其中补骨脂浸膏和石油醚萃取物两成分组大鼠血清IFN-含量升高明显，与哮喘模型组比较P0.05，无显著性差异。表1不同提取物对哮喘大鼠IL-5，IL-4，IFN-含量的影响(略) 3.4补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠Th1/Th2（IFN-/IL-5）的影响哮喘模型组、醇提浸膏组、石油醚萃取组、甲醇洗脱物组和水提

7、取物组的Th1/Th2比值依次为（n=10)：0.50.2，1.10.5，0.90.5，0.80.4和1.20.5。提示，大鼠服用补骨脂醇提上述4种溶剂萃取物后，血清Th1/Th2比值呈增加明显，与哮喘模型组比较P 4讨论 哮喘与Th1细胞分泌的IFN-等细胞因子及Th2细胞产生的IL-4，IL-5等细胞因子含量和Th1/Th2比值密切相关。Th2的主要代表产物IL-4，能促进B细胞产生IgE，引发炎症介质释放的链式反应，促进炎症细胞的趋化聚集，引起呼吸道血管通透性增加和粘膜水肿，平滑肌痉挛及粘液分泌亢进，是引起哮喘的重要因素。Th1的主要代表产物是IFN-，能抑制IL-4，IL-5等细胞因子

8、的产生，进而抑制IgE的产生和Eos活性，抑制IAR和LAR，是哮喘免疫调节中的一个重要的抑制因子，许多细胞因子通过它发挥生物效应8。因此，采用IFN-，IL-5，IL-4作为哮喘敏感指标进行药物筛选具有合理性。补骨脂是临床上常用的补肾助阳中药，具平喘之功，临床上常用于虚寒喘咳9。补骨脂是今后应加强研究和开发的抗气道抗炎症中药之一2。我院从20世纪80年代初使用补骨脂注射液治疗支气管哮喘取得了理想的疗效，但其作用的物质基础并不清楚。因此，我们在前期研究的基础上2，3，采用卵蛋白哮喘大鼠为模型，以体内血清IFN-/IL-4/IL-5含量变化为指标，初步筛选补骨脂平喘作用的有效部位。 从IFN-含

9、量变化来看，补骨脂95%乙醇提取物浸膏和补骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物作用明显，可能是补骨脂平喘的主要成分，但从抑制IL-5和IL-4含量分析，补骨脂95%乙醇提取水萃取物和补骨脂95%乙醇提甲醇洗脱物对Th2细胞产生的IL-4，IL-5细胞因子有较强的抑制作用，其他成分却升高或对IL-5，IL-4没有显著影响，而补骨脂水提取物对IFN-含量提高作用不明显。另外，补骨脂95%醇提水萃取物显著降低IL-5和IFN-含量，同时在给药的过程中我们发现水萃取物的毒性明显强于其他成分，这与其肾毒性是否相关值得关注。根据以上分析，我们初步推测补骨脂平喘有效部位应该主要是醇提成分：补骨脂95%乙醇提取物浸

10、膏，补骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物和甲醇洗脱物。 从哮喘中考察Th1/Th2的比值变化更具有意义10，因此我们以IFN-/IL-5为例，分析Th1/Th2的变化，探讨补骨脂3个醇提成分（浸膏、石油醚萃取物和甲醇洗脱物）哪个为平喘的最佳有效部位。哮喘模型组、醇提浸膏组、石油醚萃取物组和甲醇洗脱物组的Th1/Th2依次为（n=10）：0.50.2，1.10.5，0.90.5和0.80.4，与哮喘组比较三者的P补骨脂95%乙醇提甲醇洗脱物=补骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物。 【参考文献】 1黄剑，赵陆华.补骨脂化学成分及药理研究进展J.药学进展，2000，24（4）：212. 2钟南山.未来十年哮

11、喘防治展望J.实用医学杂志，2001，17（6）：471. 3谭慧淇补骨脂注射液对支气管哮喘平喘作用的动物实验和临床观察J.广东医学，1984，11：29. 4邓时贵，李爱群，欧润妹，等.补骨脂总香豆素的平喘作用J.中国现代应用药学杂志，2001，18（6）：439. 5邓时贵，区勇全，李爱群，等.补骨脂中黑色粘稠物鼻腔给药的止喘作用J.西北药学杂志，2000，15（5）：211. 6邓时贵，李伟英，韩凌.总香豆素抗支气管哮喘气道变应性炎症的作用机制J.中国新药杂志，2006，15（9）：24. 7童舜华，吴敦序，陈淑俊，等.小青龙汤对哮喘大鼠气道阻力、肺动态顺应性和血嗜酸细胞数的影响J.中国

12、中医药科技，1999,6(2)：79. 8BarnesPJ.Effeckofnedocromilsodiumorplatet-activatingfactorinducedairwayresponsesJ.JAllergyClinImmunol,1993,92:187. 9柴瑞霁.温肾助阳化痰饮，摄纳肾气平喘咳-补骨脂治疗虚寒喘咳的体会J.山西中医，1997，13（4）：49. 10邓时贵，韩凌，李伟英.总香豆素对卵蛋白致敏哮喘大鼠血清Th1/Th2的影响J.中国现代实用医学杂志，2005，4(8)：1. 【摘要】目的初步筛选补骨脂平喘有效部位。方法建立大鼠哮喘模型，采用ELISA法检测补骨脂

13、不同溶剂提取物对血清IFN/IL-4/IL25含量的影响，筛选补骨脂平喘有效部位。结果对IL5含量的影响：醇提浸膏、醇提水萃取物、水提取物和醇提甲醇洗脱物对血清IL-5含量抑制明显，而醇提石油醚萃取物、醇提醋酸乙酯萃取物抑制作用不明显。对IL-4含量的影响：醇提浸膏、醇提石油醚萃取物和水提物对血清IL-4含量有较强的升高作用，而醇提醋酸乙酯萃取物、醇提水萃取物和醇提甲醇洗脱物作用不明显。对IIFN含量的影响：醇提浸膏和醇提石油醚萃取物明显提高IFN含量，而醇提醋酸乙酯萃取物、醇提水萃取物和醇提甲醇洗脱物却降低大鼠体内血清IIFN含量，水提取物对IIFN含量影响不明显。结论补骨脂乙醇提取物浸膏、

14、石油醚萃取物和甲醇洗脱物是补骨脂平喘主要有效部位。 【关键词】补骨脂哮喘有效部位筛选6 1、最灵梦想是一个天真的词，实现梦想是个残酷的词。21.3.33.3.202106:1306:13:413月-2106:132、只有收获，才能检验耕耘的好处；只有贡献，方可衡量人生的价值。二二一二二一年三月三日2021年3月3日星期三3、不要放弃，你要配的上自己的野心，也不要辜负了所受的苦难。06:133.3.202106:133.3.202106:1306:13:413.3.202106:133.3.20214、找一个理由，否认忧伤，笑容就会灿烂到无所不在。3.3.20213.3.202106:1306:

15、1306:13:4106:13:415、成功与不成功之间有时距离很短只要后者再向前几步。三月 21星期三, 三月 3, 20213/3/20216、只要努力抬起你的双脚，胜利将属于你。6时13分6时13分3-3月-213.3.20217、青春如此华美，却在烟火在散场。21.3.321.3.321.3.3。2021年3月3日星期三二二一二二一年三月三日8、真正没有资格谈明天的人，是那个不懂得珍惜今日的人。06:1306:13:413.3.2021星期三, 三月 3, 20211、你始终不属于我，属于我的只是我自己。21.3.33.3.202106:1306:13:413月-2106:132、一份

16、信心，一份努力，一份成功；十分信心，十分努力，十分成功。二二一二二一年三月三日2021年3月3日星期三3、你是唯一的，你是十分独特的，你就是你生命中的第一名。06:133.3.202106:133.3.202106:1306:13:413.3.202106:133.3.20214、要跟成功者有同样的结果，就必须采取同样的行动。3.3.20213.3.202106:1306:1306:13:4106:13:415、我们的生命，就是以不断出发的姿势得到重生。三月 21星期三, 三月 3, 20213/3/20216、只要站起来的次数比倒下去的次数多，那就是成功。6时13分6时13分3-3月-213.3.20217、自知之明是最难得的知识。21.3.321.3.321.3.3。2021年3月3日星期三二二一二二一年三月三日8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。06:1306:13:413.3.2021星期三, 三月 3, 20211、最灵繁的人也看不见自己的背脊。21.3.33.3.202106:1306:13:413月-2106:132、最困难的事情就是认识自己。二二一二二一年三月三日2021年3月3日星期三3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。06:133.3.202106:133.3.202106:1306:13:413.3.202106:133.3.2021