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1、(完整)细胞自噬预实验(完整)细胞自噬预实验 编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（(完整)细胞自噬预实验）的内容能够给您的工作和学习带来便利。同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快 业绩进步，以下为(完整)细胞自噬预实验的全部内容。细胞自噬预实验化学染色法1、 试验目的通过化学染料吖啶橙（acridine orange，ao）染色木犀草素处理后的hepg2

2、细胞判断木犀草素是否诱导hepg2细胞发生自噬。2、 试验原理 3，6(二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式c17h19n3 hcl zncl2， 分子量438.12g/mol，是一种荧光色素,其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。它与细胞中dna和rna结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与dna结合量少发绿色荧光，与rna结合量多发桔黄色或桔红色荧光.该染料具有膜通透性，能透过细胞膜,使核dna和rna染色。ao也可以渗透进入酸性细胞器，例如自噬溶酶体，发生自噬的细胞经吖啶橙染色,在荧光显微镜下可观察到红黄色点状体,称为酸性小体，当ph值较低的时候，ao发出红色荧光，且强度与

3、酸性程度相关。所以在ao标记的细胞中,酸性囊泡细胞器结构可以通过荧光显微镜下观察到。3、 试验材料及试剂hepg2细胞株、dmem培养基（含10%fbs、100u青霉素和链霉素）、pbs、0。25%胰蛋白酶、吖啶橙（ao）、木犀草素、6孔板、载玻片、盖玻片ao储备液：准确称量10mg吖啶橙融入10ml三蒸水中，配置成储备液。实验前取5.0ml pbs溶解10ulao储备液,配置成染色液。4、 试验方法1） 取对数期生长的细胞按15105个/ml的浓度接种在六孔板中，24h后加入终浓度为50um、100um、200um的木犀草素及100um的5fu，药物处理48h。2） 药物处理后，用pbs清洗2次,0。25的胰酶消化细胞制成细胞悬液。3） 将细胞悬液1000rpm离心3min，去掉上清，加入pbs把细胞浓度调节到1-10105个/ml，吹打混匀。4） 取300ul细胞悬液，加入染色液至终浓度为1ug/ml，37避光孵育15-30min5） 染色结束后用pbs清洗3次，1000rpm离心3min，涡旋震荡混匀6） 最后一次离心后留下少量液体,取10ul染色后

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