细菌与病毒的微生物学检查法

1、第七章 细菌与病毒的微生物学检查法,教学大纲,掌握内容 标本的采集和送检原则 病原菌的检验程序 细菌感染的血清学诊断及常用方法 了解内容 病原体的抗原成分、核酸及其他成分的检测方法,病原学检查的目的,进行病因学诊断 指导合理用药 观察治疗 进行传染病的流行病学调查,标本的采集和送检六原则,无菌操作：避免杂菌污染,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,运送注意保存,采集双份血清,第一节 细菌感染的微生物学检查法,可疑细菌感染,采集标本,血清学实验 双份血清,直接形态学 检查,细菌成分检测,特异性抗体检测,细菌分离培养,鉴定,形态学检查 生化学检查 血清学鉴定 药物敏感实验 动物（毒力）

2、实验,抗原检测,核酸检测,直接凝集实验 协同凝集实验 乳胶凝集实验 免疫荧光检测 ELISA等,核酸杂交 聚合酶链反应（PCR） DNA芯片,凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 中和试验 ELISA等,细菌学 诊断,检测 病原菌成分,检测患者血清中特异性抗体,细菌 病原学检查法,形态学检查 分离培养,纯培养 生化试验 血清学鉴定 药物敏感试验 毒力实验 动物实验,抗原,核酸,一、细菌学诊断,（一）形态学检查,光学显微镜检查法：细菌染色检查法 革兰染色法 抗酸染色法 负染法 暗视野检查：用于检查活菌、螺旋体及其动力 荧光显微镜,脑脊液的直接涂片染色-肺炎链球菌,链球菌,淋病奈瑟球菌-脓液直接涂片,

3、结核分枝杆菌,霍乱弧菌,暗视野显微镜,钩端螺旋体,肺炎双球菌,病原菌的分离培养/直接涂片,大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性,Flame sterilize wire loop, metal forceps, etc before and after use in a hooded Bunsen burner,细菌动力的检测,化脓性球菌,葡萄球菌,链球菌,肠道杆菌,大肠埃希菌,沙门氏菌,志贺菌,细菌形态无特异性可采用生化学检查法-鉴别细菌的重要方法,（二）生化试验,糖发酵试验 H2S试验 枸橼盐利用试验,鉴定中最重要的生化反应,乳糖发酵试验,肠道非致病菌（埃希菌属） 发酵乳糖、产酸产气

4、,肠道致病菌（志贺菌属、 沙门菌属等）不发酵乳糖 ,（三）血清学鉴定,利用含已知的特异性抗体的免疫血清，检测未知的细菌抗原，对细菌进行种的鉴定 志贺菌属、沙门菌属 常用方法是玻片凝集试验,测定抗生素或其他抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力 方法： 扩散法、稀释法,（四）药物敏感试验,MIC & MBC,最低抑菌浓度，MIC 最低杀菌浓度，MBC,全自动分析仪,全自动细菌鉴定仪,全自动生化分析仪,（五）检测毒力-动物实验,1. 常用动物 MouseGuinea Pig Rabbit Dog Monkey,接种途径,皮内 皮下 腹膜内 静脉 颅内 椎管内 鼻内 灌胃,毒力检测,半数致死量 LD5

5、0 半数感染量 ID50,二、检测病原菌成分,抗原的检测 核酸的检测,（一）抗原的检测,利用已知的特异性Ab检测Ag的方法 常用的方法有 玻片凝集 协同凝集试验 ELISA 免疫荧光法,ELISA,（二）核酸检测方法,聚合酶链反应（PCR） 核酸杂交技术 Southern blot Northern blot Dot blot In situ hybridization 基因芯片(Gene chip) 16S rRNA,16sRNA基因序列分析,只存在于原核细胞型微生物的染色体基因中 16sRNA，23sRNA, 5sRNA 可变区和保守区 保守区：所有的细菌所共有 可变区：属和种的特异性,P

6、CR,Gene Chip,三、抗体的检测,用已知细菌或其Ag检测相应的特异性Ab及其量的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断 急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高4倍有诊断价值 方法 玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、 冷凝集试验、ELISA 局限 难以早期诊断,第二节 病毒感染的微生物学检查法,形态学 病毒的分离鉴定 在培养细胞中增殖的鉴定指标 病毒成分的检测 病毒抗体的检测,（一）病毒的形态学检查,电子显微镜（ EM） 免疫电镜, IEM 光学显微镜（CM） 包涵体 内基小体（Negri body）,HAV,Negri body,动物接种：动物模型,鸡胚接种： 914d,组织培养

7、,器官培养,组织培养,细胞培养,原代细胞培养,二倍体细胞培养,传代细胞培养,三大培养方法,（二）病毒的分离培养的方法,血凝抑制实验 中和实验 PCR检测,病毒分离培养及鉴,细胞病变（cytopathy) 红细胞吸附 (hemadsorption) 病毒干扰作用 (viral interference) 中和试验 (neutralization test, NT) 空斑形成试验 (plaque formation),病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标,细胞病变细胞病变效应（CPE）,细胞病变 红细胞吸附：血凝素（HA） 病毒干扰作用 中和试验 病毒数量及感染性的检测 空斑形成试验 红细胞凝集,红细胞

8、吸附,病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标,plaque,空斑形成试验,用于病毒浓度的精确定量和测定抗病毒药物的作用 一个空斑是由一个病毒大量复制而成，称为空斑形成单位（Plaque forming unit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示,（三）病毒成分的检测,病毒抗原的检测: ELISA 病毒核酸的检测 核酸杂交、PCR、 基因芯片,病毒成分的检测,（四）病毒抗体的检测,中和试验（NT） 血凝抑制试验（HT） 补体结合试验（CF） ELISA法 蛋白印迹技术,小 结,细菌感染的微生物学检查法 病原体检查 核酸的检测 抗原、抗体的检测 病毒感染的微生物学检查法 电镜及免疫电镜 病毒的分离培养和鉴定 核酸的检测 抗原、抗体的检测,小结,抗细菌免疫 固有免疫 获得性免疫 抗病毒免疫 固有免疫 干扰素 获得性免疫,问 题,采集标本的原则？ 病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标？ 干扰素的概念及其抗病毒机制,自检内容,1. 机体抗结核分枝杆菌的感染免疫主要依赖 A. 屏障结构 B. 细胞免疫 C.抗体的中和作用 D.非特异性免疫分子 E. 吞噬细胞的吞噬作用 2. 灭活和清除游离病毒主要依靠 A.干扰素 B.抗体 C.细胞因子 D.非特