不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性分析

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减不常见非发酵菌对常见抗菌药物敏感性分析（作者：单位：邮编：）作者：邬全会卓超苏丹虹陈冬梅袁锦屏【摘要】目的了解临床分离的伯克霍尔德菌属、金色杆菌属、产碱杆菌属等不常见非发酵菌的耐药性。方法从2004年2006年临床各种标本中分离到的不常见革兰阴性杆菌用VITEK-2全自动微生物分析仪进行检测鉴定，药物敏感性试验采用纸片扩散法。数据分析采 用WHONET5软件进行处理、统计和分析。结果两年中中山大学第 一附属医院共收集患者首次分离株118株，其中伯克霍尔德菌属47株（其中洋葱伯克霍尔德菌41株，皮氏伯克霍尔德菌6株），金色杆 菌属44株（其中脑膜脓毒性金黄杆菌

2、17株，产吲哚金黄杆菌23株）， 产碱杆菌属27株（其中粪产碱杆菌13株，木糖氧化无色杆菌12株）。 96.6%的菌株来源于痰标本。对伯克霍尔德菌属有较强体外抗菌活性 的依次为：复方磺胺甲口恶唑（87.2%）、哌拉西林/三唑巴坦（87.0%）、 左氧氟沙星（85.3%）、头孢吡肟（83.0%）、头孢他啶（78.6%）和头孢哌 酮/舒巴坦（78.3%）。对金色杆菌属有较强体外抗菌活性以复方磺胺甲 口恶唑（87.5%）最高。对产碱杆菌属敏感性较高的药物分别为头孢哌酮/舒巴坦(84.6%)和美罗培南(77.8%)。结论 头孢哌酮/舒巴坦对三 种非发酵菌都有较咼体外抗菌活性。常规实验室鉴定方法易将三种

3、菌 相互混淆，甚至与氧化酶阴性的非发酵菌混淆，这可能是造成各地报道药敏结果差异的原因之一。【关键词】 伯克霍尔德菌属； 金色杆菌属；产碱杆菌属；敏感性； 头孢哌酮/舒巴坦；ABSTRACT Objective To investigatetheantimicrobialsusceptibility ofun com mon non ferme nti ngGram-n egativebacilli such as Burkholderi spp., Chryseobacterium spp. and Alcaligenes spp. from a hospital in Guangzhoufr

4、om 2004 to 2006. Methods Disc diffusiontest (KB methods) was employed to studythe an timicrobial susceptibility. WHONET 5.4 was applied for date analysis. Results In two years of study from 2004 to 2006, 118 strai ns were isolated firstly from each patie nt, in cludi ng 44 strains of Burkholderia sp

5、p. (41 strains of Burkholderia cepacia), 41 stra insof Chryseobacterium spp. (17 C.menin gosepticumand 23 C.i ndologe nes),27 stra insofAlcalige nes spp. (13 A.faecailis and 12 A.xylosoxida ns),96.6%of strains were isolated from sputum. The susceptibility rates of Burkholderia spp. to trimethoprim/s

6、ulfamethoxazole (SMZ/TMP), piperacilli n/tazobactam, levofloxaci n, cefepime,ceftazidime and cefoperazone/sulbactamwere 87.2%, 87.0%,85.3%, 83.0%, 78.6% and 78.3%, respectively. SMZ/TMP was the most activeage nt aga inst Chryseobacterium spp. with thesusceptiblerates of 87.5%. Cefoperaz on e/sulbact

7、amandmerope nem had the most activity aga inst Alcalige nes spp. with susceptible rates 84.6% and 77.8%, respectively. Con clusi on Cefoperaz on e/sulbactam was the better age nt aga inst the three species and these species were not disti nguishal by routi ne laboratory test, oven so with oxydase-ne

8、gative non-fermenting Gram-negatine bactilli which may be one of reasons causing the differe nt susceptible rates among various laboratories.KEY WORDS Burkholderi spp.; Chryseobacterium spp.; Alcalige nesspp.;An timicrobialsusceptibility;Cefoperaz on e/sulbactam非发酵菌是指在厌氧条件下不发酵糖类的革兰阴性杆菌，多为机会 致病菌。随着医疗

9、诊治手段的提高及抗生素不合理应用的增多，非发酵菌已成为医院内感染的常见致病菌。近两年，中山大学附属第一医院在常规检测中发现，一些过去不常见的非发酵菌如伯克霍尔德菌 属、金色杆菌属、产碱杆菌属分离率逐渐增多。本文就20042006年该院收集的这些细菌的来源分布及对常见抗菌药物的药敏实验总 结如下。1材料和方法1.1菌种来源中山大学第一附属医院及广州呼吸疾病研究所细菌室2004年6月2006年6月收集的伯克霍尔德菌属、金色杆菌属、产碱杆菌属临床 分离菌株。用ATB鉴定系统（Bio-Merieux 公司）和API鉴定系统API 20NE（Bio-Merieux公司）将细菌鉴定至种。1.2药物敏感试验

10、采用KB（纸片扩散）法。药敏纸片和MH培养基为英国Oxiod公司产 品。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853试验方法与判定标准按美 国临床实验室标准化研究所（CLSI）2006年版的规定1。未提供抗 菌药物折点判断标准的菌种参照铜绿假单胞菌标准。1.3分析方法临床分离的病原菌耐药性分析采用患者首次分离株；用世界卫生组织细菌耐药性监测中心推荐的 WHONET5软件进行分析。2结果2.1细菌来源和分类共分离非重复株为118株，来源于痰标本114例，尿液3例，中心 静脉导管1例。其中伯克霍尔德菌属47 株（洋葱伯克霍尔德菌41 株, 皮氏伯克霍尔德菌6株），金色杆菌属44 株（脑膜脓毒性金黄杆菌

11、17 株、产吲哚金黄杆菌23株和粘黄杆菌4株），产碱杆菌属27株粪 产碱杆菌13株，木糖氧化产碱菌木糖氧化亚种（木糖氧化无色杆菌）12株，木糖氧化产碱菌反硝酸亚种 2株;来源于重症监护病房 （ICU）65株，其中伯克霍尔德菌属36株，金色杆菌属21株。2.2细菌体外药敏实验结果见表1表2。对伯克霍尔德菌属有较强体外抗菌活性的依 次为：复方磺胺甲口恶唑(87.2%)、哌拉西林/三唑巴坦(87.0%)、左 氧氟沙星(85.3%)、头孢吡肟(83.0%)、头孢他啶(78.6%)和头孢哌酮/ 舒巴坦(78.3%)。美罗培南的敏感率高于亚胺培南(75%vs40.4%)，交 叉耐药分析显示，47.2%对亚

12、胺培南不敏感菌株都对美罗培南敏感， 仅有5.6%对美罗培南耐药的菌株对亚胺培南敏感。对金色杆菌属有 较强体外抗菌活性以复方磺胺甲口恶唑(87.5%)最高，其余药物敏感 性均在50%以下，亚胺培南和美罗培南几乎完全耐药。对产碱杆菌属 敏感性较高的药物分别为头孢哌酮/舒巴坦(84.6%)和美罗培南(77.8%)。其它第三代头孢菌素、氨基糖苷类和氟喹诺酮类的敏感性 都低于60%3讨论非发酵菌目前是医院内感染最主要的致病菌之一。据王辉报道，铜 绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌是医院获得性肺炎 (VAP)中分离率最高的三种非发酵菌。由于它们对多种抗菌药物耐药， 给表1抗菌药物对三种非发酵菌属的

13、体外活性临床治疗带来极大困 难，已引起国内外学者的极大关注，并对其耐药机制和致病性进行了 大量研究。与此同时，一些生物性状与它们相似的少见非发酵菌由于 临床分离率逐渐增多，也开始得到关注。伯克霍尔德菌属在自然界中广泛分布，是植物病原菌，对 免疫功能正常的人并不致病。国外报道洋葱伯克霍尔德菌是肺囊性纤 维化(CF)合并感染的最常见病原菌之一 2。我国肺囊性纤维化的发病率很低，主要感染者是一些由于病情严重入住ICU、免疫功能受损、 介入措施多的老年患者及肿瘤患者3, 4。随着医疗水平提高和人 口的老龄化，免疫功能低下、老年及肿瘤患者在住院患者中的构成比 增加，并且危重患者的抢救成功率提高、存活期延

14、长，故洋葱伯克霍 尔德菌引起的院内感染呈增加趋势。一项中国十家医院的革兰阴性杆 菌的耐药性监测结果表明，洋葱伯克霍尔德菌的分离率由2003年的第9位上升至2004年的第6位5，广州市的一项调查也显示相似 结果。以脑膜脓毒性金黄杆菌为代表的金色杆菌属和产碱杆菌属是近 年逐渐增多的两类非发酵菌。它们主要存在于土壤和水中，可在医院 相对潮湿的环境中（如湿化器、静脉导管、呼吸机管道等）长期生存， 当患者免疫功能下降时，可引起菌血症、肺炎、脑膜炎、心内膜炎等 感染，其中脑膜脓毒性金黄杆菌所致新生儿脑膜炎的死亡率可达57%6。与粪产碱杆菌相比，木糖氧化无色杆菌所致的呼吸系统感染明 显增多。文献报道，该菌还

15、可引起菌血症、败血症、中枢神经系统感 染、泌尿系统感染、心内膜炎、腹膜炎、伤口感染、中耳炎、眼部感 染及化脓性胰腺炎等7。此外，范昕建等报道，产碱杆菌感染者有 30%- 50%为多种微生物感染，即产碱杆菌可与其它需氧菌共同形成复 数菌感染，最常见合并产碱杆菌感染的需氧病原菌为不动杆菌、假单 胞菌及链球菌，厌氧菌为脆弱类杆菌8。与铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等非发酵菌相似，伯克霍尔德菌属、 金色杆菌属和产碱杆菌属常存在多种耐药机制，导致对多种抗菌药物 天然耐药。以洋葱伯克霍尔德菌、脑膜脓毒性金黄杆菌和木糖氧化产碱菌耐药情况尤为严重，其中洋葱伯克霍尔德菌以膜通透性降低（膜孔蛋白缺失）为主，部分菌株产

16、诱导性的I类头孢菌素酶9,导致 细菌对第三代头孢菌素耐药。脑膜脓毒性金黄杆菌产染色体介导的金 属B -内酰胺酶BlaB，导致对碳青霉烯药物完全耐药10。木糖氧 化产碱菌的固有耐药机制报道较少，主要是通过整合子获得的金属B -内酰胺酶IMP或VIM,导致对碳青霉烯药物和部分第三代头孢菌素 耐药11，12。值得一提的是，国内外报道的这三种非发酵菌对部分药物敏感性都 存在一定差异。如SENTR监测分析19972001年全球脑膜脓毒性金 黄杆菌的药敏结果，西亚太区的哌拉西林/三唑巴坦和敏感率为50% 而欧洲和北美洲的敏感率均为100% 13。国内也有类似情况，沈阳 和杭州两地在同时期采用同样方法（KB

17、纸片法）检测洋葱伯克霍尔德 菌的敏感性，结果显示头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦的耐药 率对比分别为6.6%、31.2%和8.5%、44.2% : 14。究其原因，除了各 地菌种的耐药机制可能差异外，另外一个原因可能是菌种的鉴定误差 问题。目前许多实验室都采用仪器鉴定细菌，而这三种同为氧化酶阳性的 非发酵菌容易混淆，有时甚至和氧化酶阴性的嗜麦芽寡养单胞菌相 混。Shelly 等比较了鉴定卡 Vitek GNI Plus（Bio-Merieux 公司）； Vitek GNI（Bio-Merieux 公司）；MicroScan Conventional Gram Neg Panel（Micro

18、Scan GNP） （Dade International,West Sacramento,Calif.) ; API 20NE(Bio-Merieux 公司);RapID NFPlus (InnovativeDiag no Stic Systems, In c., Norcross, Ga.); MicroSca n Rapid Neg ID (Dade Intern ati on al); CrystalEn teric/N on ferme nterID(Crystal E/NF) (BD Biosciences,Sparks,Md.) ; Remel Uni-N/F Tek Plate

19、、N/F Screen (Remel N/F system) (Remel,Lenexa,Kans.) 和 Sherlock gas-liquid chromatography (Sherlock GLC) (MIDI, In c.,Newark,Del.) 等手工和仪器的11种方法鉴定洋葱伯克霍尔德 菌,结果发现阳性预测值PPV为71%-98%阴性预测值为50%-82% 一些系统将不能确认菌种或铜绿假单胞菌、产碱杆菌属、嗜麦芽寡养 单胞菌都鉴定为洋葱伯克霍尔德菌15。同样，木糖氧化产碱菌也 易误认为洋葱伯克霍尔德菌16。由于木糖氧化产碱菌和洋葱伯克 霍尔德菌的耐药机制、临床预后存在差别，特别

20、是在肺囊性纤维化中， 后者的预后明显不及前者。因此，采用准确的鉴定方法尤为重要。目 前国外推荐使用多相性分析(polyphasic an alyses)，即选择性培养 基结合生物学鉴定方法来鉴定洋葱伯克霍尔德菌16，同时许多分 子生物学方法如16sDNA(16r RNA)多位点测序(MLST)也逐渐成为鉴 定这些易混淆的非发酵菌的常规实验室方法17，18，国内部分实 验室目前已开始用16sDNA或 23SDNA鉴定细菌，相信以后也会推广到 基层医院的实验室。【参考文献】1 NationalCommittee for Clinical LaboratoryStan dards. Performa

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