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文档简介

1、免疫组化标签： 免疫 免疫组化免疫组化可以：（1）恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； （2）确定转移性恶性肿瘤的原发部位； （ 3）对某类肿瘤进行进一步的病理分型； （ 4）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定， 包括手术范围的确定。详细实验方法即用型 （Envision） 快速酶免疫组化二步法链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化物酶连结 SP 法卵白素 -生物素 -过氧化物酶复合物（ ABC ）法链霉亲和素 生物素过氧化物酶复合物（ SABC ）法实验方法原 根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔 IgG 分子结合在多聚酶上形成多理聚物分子 , 其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。实验材料

2、 石蜡切试剂、试剂盒酸二氨基联苯胺仪器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头滴管一、石蜡切片置于67 C烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用 pH7.4的PBS冲洗三 次，每次3分钟（3 X3 ）。二、取一定量 pH=6.0 柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡 水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波实验步骤 处理 10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用 PBS冲洗2 X3 （注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体 情况而定）三、每张切片加1滴3%H 2O2,室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活

3、性。 PBS 冲洗 3X3）。四、除去 PBS 液，每张切片加 1滴相应的第一抗体（相应稀释倍数） ，室温下孵育2小时。五、PBS冲洗3X5 除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育 20分钟。PBS冲洗3 X3 六、除去 PBS 液，每张切片加 1滴酶标抗鼠 /兔聚合物，室温下孵育 30分钟。 PBS冲洗 3X5。七、除去 PBS 液，每张切片加 1 滴新鲜配制的 DAB 液（二氨基联苯胺） ，显微镜下观察 5分钟。八、苏木素复染， 0.1%HCl 分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。收起一、特点1. 在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（ HRP ）的复合物与一抗结 合，在多聚螯合物上有大量的 HRP 分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较 SABC 、 SP 法高。其他2. 由于多聚物在体内不存在， 又不使用生物素， 从而避免了由于生物素引起的非 特异性背景染色，背景比 SABC 、 SP 法清晰。3. 辣根过氧化物酶与二抗结合在多聚物上，替代传统方法的 二抗、三抗，减少 了

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