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文档简介

1、2021/3/10授课：XXX1 实验十实验十 目的基因的诱导性表达目的基因的诱导性表达 2021/3/10授课：XXX2 一、实验目的一、实验目的 v了解学习目的基因诱导性表达过程以及表达了解学习目的基因诱导性表达过程以及表达 产物的活性检测方法产物的活性检测方法 2021/3/10授课：XXX3 二、实验原理二、实验原理 v诱导性表达方法诱导性表达方法 v表达产物的检测表达产物的检测 2021/3/10授课：XXX4 诱导性表达方法诱导性表达方法 vIPTG诱导目的基因高效表达原理诱导目的基因高效表达原理 v乳糖操纵子模型乳糖操纵子模型 v表达载体表达载体 2021/3/10授课：XXX5

2、 表达产物的检测表达产物的检测 产量高低产量高低 活性高低不同活性高低不同 2021/3/10授课：XXX6 三、实验器材三、实验器材 v转化的转化的Ecoli、LB培养基、培养基、Amp、IPTG、 1XPBS、离心管、指形管、移液器、超声波、离心管、指形管、移液器、超声波 裂解仪等。裂解仪等。 2021/3/10授课：XXX7 四、实验步骤四、实验步骤 v将新鲜菌种液（已含有目的基因）以将新鲜菌种液（已含有目的基因）以1:100接接 种于种于LB（Amp）培养基中，）培养基中，37振荡培养至振荡培养至 OD600=0.4-0.6 ； v加加IPTG至终浓度为至终浓度为0.5mM, 30振荡培养振荡培养5h; v 4, 8000rpm离离, 10min离心收集细菌；离心收集细菌； 2021/3/10授课：XXX8 vPBS充分洗涤充分洗涤2次后进行超声波裂解菌体，次后进行超声波裂解菌体， 分别收集裂解上清和沉淀进行分别收集裂解上清和沉淀进行SDS-PAGE， 分析蛋白表达情况并确定诱导表达的最佳条分

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