版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、斑点印迹杂交斑点印迹杂交 掌握斑点印迹杂交的原理及方法 实验目的实验目的 ?杂交杂交:具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及 离子强度等)可按 碱基互补原则 形成双链,此杂交过程是高度特异的。 杂交的双方是待测核酸及探针。 ?斑点杂交斑点杂交:是指将待测的 DNA变形后点加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜) 上,用已标记的探针进行杂交,洗膜(除去未结合的探针),放射自 显影,判断是否有杂交或其杂交强度,主要用于基因缺失或拷贝数改 变的检测。根据点样磨具不同,点样形状呈圆形称为斑点杂交,呈狭 缝形则称为狭缝杂交。 实验原理 斑点印迹杂交斑点印迹杂交不需要电泳和转移,杂交过程包括点样, 变
2、性,中和,干燥固定,预杂交,杂交,封闭,检测杂交 结果等步骤,相对southern印迹杂交和Northern印记杂交 来说快,适合于同时分析多个样品。 实验步骤实验步骤: 1变性:按8:1将80ul ddH 2O加入至10ul待测DNA样品中,稀释样品。 100加热10min后,立即置于冰中5min(使DNA变性),加入90ul 20SSC混匀。 ?点样:将上述变性后的样品180ul点在尼龙膜的毛面上,真空抽滤, 室温下风干后,于烤箱中120烘烤15min。使变性的DNA与膜结合牢固 1预杂交:将膜封入15ml离心管中,做好剪角标记。加入预杂交液3ml。 置42恒温摇床上,轻轻振摇30min。
3、封闭杂交膜上多余的非特异性 DNA结 合位点 2杂交:加入探针3ml(生物素-DNA),置42 恒温床上,轻轻振荡1- 2h。变性DNA与探针结合 5 洗膜:倒掉杂交液,洗液 1(每次5ml)洗膜三次( 洗液1预热到 42),每次5min;再将洗液2 (每次5ml)洗膜两次( 预热 到42),每次15min。洗去未结合的探针,否则本底会太高 6 封闭:倒掉洗液 2,加入5ml封闭液,37作用15min。封闭杂交 膜上非特异性的蛋白结合位点 7 酶联抗体结合:倒掉封闭液,加入 3ml亲和素-辣根过氧化物 酶(HRP),于37轻轻振摇30min。酶联抗体与生物素结合 8 洗膜:倒掉第七步骤中液体,加入 5ml洗液3,洗膜三次,每次 2-3min。洗去未结合的酶联抗体 9 显色:洗膜后,加 3ml的显色液避光显色1-2min,斑点出来后 就可倒掉显色液,用 ddH20冲洗几次,终止显色。 斑点杂交预期结果图斑点杂交预期结果图 ? 制备样
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 新媒体数据分析 实训题 项目8 实训4 相关账号的对比分析
- 2024中英文合同终止协议模板
- 2024二手房购房定金协议书合同
- 2024口译服务合同范本正规范本
- 2024个人中介租赁合同书
- 2024个人借款合同简单模板
- 2024印刷品协议供货合同范本
- UG NX12.0基础与应用教程 教案 王元平 1.1 UG NX12.0设计环境与基本操作- 4.2关联特征与其他特征
- 钢筋工安全教育试卷2021
- 2024年年中国电子政务项目建议书
- 大学电网课程设计电网规划课程设计
- 二氧化碳制取的研究说课公开课一等奖市优质课赛课获奖课件
- 回归分析在企业管理中的应用
- 固定资产投资统计培训
- DB61T 447.5-2023 林麝人工繁育规范 第5部分:生产记录
- 19K413 高大空间供暖(空调)设备选用与安装-侧向送风型
- 安徽省合肥市蜀山区2022年小升初数学试卷-2023修改整理
- 小学六年级数学计算题100道(含答案)
- 精选海南省2023年普通高中地理会考试卷-及答案解析
- 《认识居民身份证》说课 课件
- 房地产质量管理体系:质量方针质量目标
评论
0/150
提交评论