培养基及其制备技术

1、培养基及其制备技术习题作业一、填空题 1、营养物质主要以式进入细胞。2、EMB 培 养基按培 养基功能属于 培养基3、 微生物细胞的化学成分以和种状态存在.4、 微生物的营养物质按其在机体中的生理作用可区分为： ?_、 、 、 六大类。5、 微生物营养类型： 、。6营养物质进入到细胞的四种形式： 、.等7、培养基按照物理性质进行划分为： 、。二、应用题1、鉴别培养基的定义以及应用。2、请写出选择培养基并举例说明。3、请写出合成培养基以及天然培养基的应用以及特点。4、请写出培养基配制的过程。三、选择题1、微生物细胞中含量最多的元素是（）A、 C B、 H C、 O D、 N2、琼脂在培养基中的作

2、用是（）A、碳源B、氮源C、凝固剂D、生长调节剂3、实验室常用的培养细菌的培养基是（）A、牛肉膏蛋白胨培养基B、马铃薯培养基C、高氏一号培养基D、麦芽汁培养基4、在实验中我们所用到的淀粉水解培养基是一种（）培养基A、基础培养基 B、加富培养基C、选择培养基 D、鉴别培养基5、下列物质属于生长因子的是（）A、葡萄糖B、蛋白胨C、NaCID、维生素6培养基进入细胞的方式中运送前后物质结构发生变化的是（）A、主动运输 B、被动运输C、促进扩散 D、基团移位7、 常用消毒酒精的浓度的（）A、30% B、70% C、95%D、100%8、占微生物细胞总物质量70%90%以上的细胞组分是（）A、碳素物质

3、B、氮素物质C、水D、无机盐9、 为缩短细菌培养的延迟期，菌龄应控制在（）A、潜伏期 B、对数生长期C、稳定期D、衰亡期10、 酵母菌常用于酿酒工业中，其主要产物为（）A、乙酸B、乙醇C、乳酸D、丙醇11、接种环常用的灭菌方法是（）A、火焰灭菌 B、干热灭菌C、高压蒸汽灭菌D、间歇灭菌12、微生物分批培养时，在延迟期（）A、微生物的代谢机能非常不活跃B、菌体体积增大C、菌体体积不变 D 菌体体积减小13、酵母菌适宜的生长PH值为（）A、5.0-6.0 B、3.0-4.0 C、8.0-9.0 D、7.0-7.5培养基及其制备技术作业习题答案一、填空题：1、单纯扩散、促进扩散、主动运输、基团转位2

4、、鉴别培养基3、有机物、无机物4、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子、水5、光能自养型、化能自养型、光能异氧型、化能异养型二、应用题：1、答:鉴别培养基是用于鉴别不同类型微生物的培养基。 在培养基中加入某种特殊 化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化， 根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。 鉴别培养基主要 用于微生物的快速分类鉴定，以及分离和筛选产生某种代谢产物的微生物菌种。2、答:选择培养基是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的 培养基。根据不同种类微生物的

5、特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同， 在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长， 有利于所需微生物的生长。一种类型选择培养基是依据某些微生物的特殊营养需求设计的，例如，利用以纤维素或石蜡油作为唯一碳源的选择培养基， 可以从混杂的微生物群体中分离 出能分解纤维素或石蜡油的微生物；利用以蛋白质作为唯一氮源的选择培养基， 可以分离产胞外蛋白酶的微生物；缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生 物。另一类选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，这种化学物质没有营养 作用，对所需分离的微生物无害，但可以抑制或杀死其他微生物，例如，在培养 基中加入数滴10%酚可以抑制细菌和

6、霉菌的生长，从而由混杂的微生物群体中分 离出放线菌；在培养基中加入亚硫酸铵，可以抑制革兰氏阳性细菌和绝大多数革兰氏阴性细菌的生长，而革兰氏阴性的伤寒沙门氏菌(Salmom nella typhi)可以在这种培养基上生长；在培养基中加入染料亮绿(brilliant green)或结晶紫(crystalviolet)，可以抑制革兰氏阳性细菌的生长，从而达到分离革兰氏阴性细菌的目的； 在培养基中加人青霉素、四环素或链霉素，可以抑制细菌和放线菌生长，而将酵 母菌和霉菌分离出来。现代基因克隆技术中也常用选择培养基，在筛选含有重组 质粒的基因工程菌株过程中，利用质粒上具有的对某种(些)抗生素的抗性选择标记

7、，在培养基中加入相应抗生素，就能比较方便地淘汰非重组菌株，以减少筛选 目标菌株的工作量。3、答：天然培 养基(complex medium)这类培养基含有化学成分还不清楚或化学成分不 恒定的天然有机物，也称非化学限定培养基(chemically undefined medium)。牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria Berta ni)培养基也是一种天然培 养基。牛肉浸膏、蛋白胨及酵母浸膏的来源及主要成分营养物质来源主要成分牛肉浸膏瘦牛肉组织浸出汁浓缩而成的膏状 物质富含水溶性糖类、有机氮化合物、维生素、盐等蛋白胨将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干

8、燥而成富含有机氮化合物、也含有一些维生 素和糖类的粉末状物质酵母浸膏酵母细胞的水溶性提取物浓缩而成的膏状物质富含B类维生素，也含有有机氮化合物和糖类常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表5.10)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡萝卜汁、椰子汁等，嗜粪 微生物(coprophilous microorganisms)可以利用粪水作为营养物质。天然培养基成本较低， 除在实验室经常使用外，也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。合成培养基(synthic medium)是由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也 称化学限定培 养基(che

9、mically defined medium)，咼氏I号培养基和查氏培养基就属于此种 类型。配制合成培养基时重复性强，但与天然培养基相比其成本较高，微生物在其中生长速度较慢，一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。4、答:i液体培养基的制备(1) 称量 根据培养基配方要求，准确称取试剂与药品。(2) 溶解 先在烧杯内加入所需水量的2/3左右(可以是自来水、深井水或 蒸馏水，根据项目要求而定)，将称取的各种成分放入水中加热溶解。为避免因 沉淀造成营养物质的损失，加入各种成分的顺序为：先加缓冲化合物，再加主要 元素，然后再加微量元

10、素，最后加维生素、生长素等，待完全溶解后加水至量。(3) 调节pH 用滴管逐滴加入Imol/L的NaOH或Imol/L的HCI，边搅动边用 精密pH (5.59.0)试纸测其pH至所需值为止。(4) 过滤需要过滤的培养基要趁热用四层纱布过滤。在发酵工业生产中， 这一步也可省去，但对培养微生物条件的控制及结果的观察的培养基需要过滤。(5) 分装 取玻璃漏斗一个，装在铁架上。漏斗出口用乳胶管与玻璃管相 连接，乳胶管上装一弹簧夹。趁热将培养基放入玻璃漏斗内分装。 分装时用左手 拿空管(锥形瓶)或手控制弹簧夹的放和关。注意不要沾染到试管壁和试管口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管(锥形瓶)的液体培养

11、基，根据试管的大小及需要而定，一般装量 为试管高度的1/5。(6) 包扎、灭菌 将分装好的培养基塞上棉塞，再用牛皮纸包扎，注明培 养基的名称、配制日期、组别等，然后立即进行高压蒸汽灭菌(O.IMPa, 121T， 30min)。ii固体培养基的制备(1) 称量、溶解、调节pH与制备液体培养基的相同。(2) 加琼脂熔化 先加热配制好的液体培养基，沸腾后添加2%的琼脂，不 断搅拌直到完全熔化，然后加水至所需体积。(3) 过滤、分装 同液体培养基的制备。但分量要适当，如分装在锥形瓶1 丄的量一般为其体积的32 ;如用试管作斜面，则每管应装5mL左右(约为管长1 1的54 )。(4) 包扎、灭菌 将分装好的培养基塞上棉塞，再用牛皮纸包扎，注明培 养基的名称、配制日期、组别(在此操作中，应注意尽量快速，以免培养基凝固)， 然后立即进行高压蒸汽灭菌(O.IMPa,