cyclinD1、p16、Rb在胸腺瘤中表达及预后意义.

1、cyclinD1、p16、Rb在胸腺瘤中表达及预后意义團摘要 目的：探讨cyclin D1、p16、Rb蛋白在胸腺瘤中表达及预后意义。方 法：应用免疫组化S-P法，对54例胸腺瘤标本进行检测。结果：cyclin D1、p16、Rb蛋白在髓质型、混合型胸腺瘤中阳性表达率分别为23.1% (3/13 )、69.2%(9/13)、53.9%(7/13)，器官样、普通皮质型胸腺瘤中阳性表达率分别为 50.0% (8/16)、75.0% (12/16)、75.0%(12/16 )，高分化、高级别胸腺癌中阳 性表达率分别为 84.0% (21/25) 、40.0%(10/25)、56.0% (14/25)

2、 , (P V 0.05) o cyclin D1、p16蛋白的阳性表达与胸腺瘤的 M-H分型、临床分期、淋 巴结转移、预后密切相关。结论：cyclin D1、p16、Rb蛋白参与胸腺瘤细胞增 殖并影响其分化，可作为监测预后的有效指标。关键词 胸腺瘤；细胞周期蛋白类；p16蛋白;Rb蛋白中分类号 R736.3 文献标识码 A文章编号 1001-7399(2000)04-0304-03Sign ificati on relati on ships prog no sis and expressi on of cycli nD1 ， p16 and Rb in thymomaXu Li, Xu W

3、enjuan, Zhao Zhon gshe ng(Dept of Pathol, Zhejia ng Provin cial Peoples Hospital, Han gzhou310014)ABSTRACTPurpose To explore the expressi on and sig ni fica nee ofcycli nD1, p16 and Rb protein in thymoma. MethodsImmuno histochemicalmethod was used for exam in at ing the secti ons from 54 thymomas.Re

4、sults The positive rates of cycli nD1, p16 Rb were23.1%(3/13),69.2%(9/13),53.9%(7/13) in the medullary and mixed thymoma. The positive rates of were 50.0%(8/16),75.0%(12/16),75.0%(12/16) in the cortical. The positive rates of were 84.0%(21/25), 40.0%(10/25),56.0%(14/25)，in the well-differe ntiatedth

5、ymic carci noma and well-grede thymic carci no ma; respectively, (PV0.05 ). The positive rates of cycli nD1, p16 and Rb prote in had relatio n with the histologic subtyp ing, cli ni cal stage and prog no sisin the thymoma. Con clusi oncycli nD1, p16 and Rb protein are invo Ivedin cell proliferati ng

6、 and in flue nee differe ntiati on of thymoma,whichcan be adapted as an useful index for prognosis monitoring. KEY WORDSthymoma; cyclins; p16 protein; retinoblastoma protein细胞周期蛋白cyclin D1与CDK4吉合形成复合物，激活CDK4促使Rb蛋白磷酸化，促进转录因子(TF)产生，使细胞由G期进入S期，正调节细胞增殖 周期。p16蛋白则特异性与cyclin D1竞争性结合CDK4并使之失活而阻止细胞1周期从Gi向S期过

7、渡，负调节细胞增殖周期。文献中，在食管癌中cyclinDi、p16和Rb蛋白异常表达与癌细胞的组织学分级及预后有关2。而对胸腺瘤的研究很少，我们应用免疫组织化学 S-P法，探讨cyclinD1、p16和Rb蛋白 阳性表达与胸腺瘤M-H分型、临床分期、淋巴结转移及预后的关系。i 材料与方法1.1 材料 选自我科19891998年经病理检查证实胸腺瘤的标本 54例，按 Muller-Hermelink 3的标准进行组织学分型，髓质型胸腺瘤 5 例，混合型胸腺 瘤 8 例，器官样皮质型胸腺瘤 10例，普通皮质型胸腺瘤 6 例，高分化胸腺癌 9 例，高级别胸腺癌16例。按Masaoka4临床分期标准分

8、为I期18例；U期10 例;川期6例;W期20例。另选2例正常胎儿胸腺和6例增生胸腺组织做对照 组。 54 例病人全部随访。1.2 方法 应用免疫组织化学S-P法，兔抗人多克隆抗体p16、Rb为美国Zymec公司产品，cyclinD1鼠抗人单克隆抗体购自北京中山试剂公司，S-P试剂购自福州迈新公司，工作液浓度均为1 ： 100。用已知肺癌阳性切片做阳性对照，阴性对照一抗用PBS取代。DAB染色，苏木精复染。1.3 阳性结果判定 cyclin D1 、 Rb 定位于细胞核， p16 定位于细胞核或浆， 呈棕色细颗粒状，根据阳性肿瘤细胞所占全部细胞的比例，分为：阴性 (-) 无阳 性细胞反应；(+

9、)阳性细胞V 25% (?)阳性细胞在25%75沱间；(?)阳性细胞 75%1.4 统计学处理 采用x 2检验。2 结果2.1 cyclin D1、p16、Rb蛋白的表达与胸腺瘤组织学分型、临床分期的关系在正常胸腺及增生的胸腺组织中 cyclin D1 、 p16、 Rb 蛋白为阴性。 cyclin D1的阳性表达与胸腺瘤恶性程度及临床分期呈正相关，p16、Rb蛋白表达与肿瘤恶性程度及临床分期呈负相关(PV 0.05 )。髓质型、混合型胸腺瘤为临床I 期，cyclin D1表达低于p16、Rb;器官样皮质型、普通皮质型胸腺瘤为临床IU期，cycl in D1阳性表达逐渐增高但仍低于 p16、R

10、b;高分化、高级别 胸腺癌为临床川W期，cyclin D1阳性表达逐渐增高且呈强阳性(1，2)，细 胞核内深棕色颗粒，浸润至包膜内及转移的瘤细胞尤为明显， p16、 Rb 阳性表 达则明显降低 (PV0.05 ，表 1)。2.2 cyclin D1、p16和Rb阳性表达与淋巴结转移及预后的关系表1显示，淋巴结转移组中cyclin D1阳性表达率高于p16与Rb，无淋巴结转移组中 cyclin D1 阳性表达率低于p16与Rb(P0.05 ) 。随访资料显示髓质型、混合型胸腺瘤 5 年生存率明显高于器官样皮质型、普通型皮质型胸腺瘤、高分化胸腺癌和高级别胸腺癌，cycli n D1阳性表达与生存率

11、呈负相关（Pv0.05） , p16阳性表达与生存率呈正相关（PvO.05 ）。1高分化胸腺癌细胞核cyclinD1强阳性。S-PX 400表1 cyclinD1、p16、Rb与胸腺瘤临床各参数的关系项 目ncycli nD1P值p16P值RbP值5年生存 率+性% 阳率+阳性率（%）nM-H分类髓 质型 胸腺 瘤500360.00240.005100混 合型 胸腺 瘤8323.08675.00562.508100器 官样 皮质 型胸 腺瘤10440.00770.00770.00990.00普 通皮 质型 胸腺 瘤6466.66005 583.33：0.05583.330.05583.33高

12、分化 胸腺 癌9777.78555.56777.78550.00高161487.50531.25743.75531.25级别 胸腺 癌临床 分期I 期18527.782 (56.671161.118100n期10550.00：0.05 880.00005880.000.0510100期6583.83466.67466.67350.00期201785.00735.001050.00630.00淋巴 结转 移组有 转移161487.50531.25743.70*531.25无 转移381847.36：0.052668.42 0.053284.213讨论胸腺瘤是起源于胸腺上皮细胞的肿瘤，术后易复发，

13、具有侵袭性生长的能 力，其恶性程度主要依据包膜浸润及转移的范围。本实验结果证明应用M-H组织分型具有临床意义，可提示胸腺瘤的侵袭能力及临床期别。cycli n D1、p16、Rb蛋白表达结果说明，cyclinD1随着分化程度的降低，临床分期增高， 阳性表达增强。p16、Rb则随着分化程度的降低，临床分期增高，阳性表达减 弱。3种蛋白在不同的组织分型、临床分期中的表达状况可预示肿瘤恶性程度 及侵袭能力。细胞周期蛋白cyclin D1在肿瘤生长恶变和转移中起着重要作用，cyclin D1能刺激细胞周期素依赖激酶(cyclin-dependent kinase 4) CDK4介导成视网膜母细胞瘤易感

14、基因Rb的磷酸化，使Rb对细胞生长抑制效应失活，cyclin D1过表达将使CDK4对Rb调节失活，从而导致细胞失控性生长 。本实验中 cyclin D1过表达仍伴随Rb阳性，结果支持三者同时参与肿瘤的发生发展，与 文献报道一致5。器官样皮质型和普通皮质型胸腺瘤中cyclin D1表达增加，提示cyclin D1可出现在癌变的早期阶段。高分化和高级别胸腺癌cyclin D1表达明显增加，其表达率随病变的进展而逐渐上升，这一事实说明cycl in D1不仅出现在病变早期，在肿瘤的恶性转化中起着重要促进作用。p16是一种多重肿瘤抑癌基因，参与肿瘤的进展和转移，有些细胞系p16蛋白过表达，而这些p1

15、6过表达的细胞均有Rb蛋白失活，认为Rb可抑制p16 蛋白表达，进而影响cyclin D1 的表达 。p16蛋白与cyclin D1 和Rb蛋白 均密切相关。本实验中p16与cyclin D1在胸腺瘤中呈反向表达，随着分化程 度的降低差异越明显。Hirabayashi6报道在胸腺瘤中Rb阴性常伴随p16过表 达，Rb阳性则伴随p16的表达缺失或低表达，本组结果与之一致，进一步说明 p16丢失cyclin D1过表达及Rb失活，通过共同的途径参与胸腺瘤的发生发 展。同时也表明了 p16蛋白在肿瘤细胞的发生发展中起着不可低估的作用。因 此两者间任何一种蛋白出现异常均会导致 G1 期细胞调节周期失控

16、，而促进细胞 的恶性转化。cyclin D1、p16蛋白表达与淋巴结转移的关系在肺癌中已被证实，且与肿 瘤的浸润、淋巴结转移和肿瘤的分期等临床病理参数有关7，8。这部分肿瘤预后不良，本资料中有淋巴结转移的病例中cycli n D1过表达、p16表达缺失或低表达。cyclin D1过表达与病人淋巴结转移机率呈正相关。p16蛋白表达缺失与病人淋巴结转移呈负相关。cyclin D1、p16蛋白的阳性表达与病人的预后有 关，而病人生存率的高低取决于肿瘤细胞的分化程度和浸润及转移范围。随访 资料表明在高分化和高级别胸腺癌中p16蛋白阳性表达者生存率高于p16蛋白阴性者，p16阴性组中死亡率明显高于p16

17、阳性组。p16蛋白阳性表达者预后 好。因此，p16蛋白可做为检测胸腺瘤恶性程度和预后的一个有效指标之一。cyclin D1 阳性表达者生存率低于 cyclin D1 蛋白阴性者， cyclin D1 阳性组中 死亡率明显高于 cyclin D1 阴性组。 cyclin D1 蛋白阳性表达者预后差。综上所述，cyclin D1是作用于G期的重要细胞周期蛋白。可促进 G/S期 转换而加速细胞周期进程，cyclin D1调节与p16、Rb蛋白密切相关，三者形 成调节环路，cyclin D1和p16与胸腺瘤的早期恶变、淋巴结转移、预后密切 相关。因此，多基因检测分析对肿瘤发生发展及预后判断是有意义的。

18、作者简介：许励，女， 43 岁，副主任医师 许励（浙江省人民医院病理科，杭州310014）徐文娟（浙江省人民医院病理科，杭州310014）赵仲生（浙江省人民医院病理科，杭州310014）参考文献1 ，胡云,辛晓燕, 陈兵. cyclin D1 与肿瘤. 国外医学遗传学分册 , 1999 ； 22(1 ):30 322,郑杰，周传农，萧枫等.Rb、p16、细胞周期素cyclinD1蛋白在食管癌中的 表达及其意义 . 中华病理学杂志，1996；25(6):336 3393，蒋智铭, 张惠箴, 陈洁晴等. 胸腺瘤的病理诊断和 Marino, Muller- Hermelink 分类. 临床与实验病理学杂志 , 1999;15(1):27 294， Masaoka A, Monden Y, Nakahara K et al. Follow-up study of thymomas with special reference to their clinical stages. Cancer,1981;48:2485 24925， Sha