酶类药物课件

1、1 第十三章第十三章 酶类药物酶类药物 2 第一节第一节酶类药物的原料来源酶类药物的原料来源 一、原料选择一、原料选择 选用原料应注意以下几点注意以下几点: （1）不同酶的用料选择：哪里有，含量高，选哪。）不同酶的用料选择：哪里有，含量高，选哪。 （2）注意不同生长发育情况及营养状况）注意不同生长发育情况及营养状况, 用微生物用微生物 制酶，故需测其活力来决定取酶阶段。用动物器官用动物器官提 取酶，则与动物年龄及饲养条件有关。 3 （3）从原料来源是否丰富考虑）从原料来源是否丰富考虑；从简化提纯步骤着从简化提纯步骤着 手手 。 （4）如用动物组织作原料）如用动物组织作原料，则此动物宰杀后应立即

2、宰杀后应立即 取材。取材。 从动物或植物中提取酶受到原料的限制限制，随着酶 应用日益广泛和需求量的增加，工业生产的重点已 逐渐转向微生物微生物。用微生物发酵法生产药用酶药用酶，不 受季节季节、气候气候和地域地域的限制，生产周期短周期短，产量高产量高， 成本低，能大规模生产。 4 二、微生物酶制剂高产菌株的选育二、微生物酶制剂高产菌株的选育 菌种菌种是工业发酵生产酶制剂的重要条件。与增加品增加品 种种、缩短生产周期周期、改进发酵和提炼工艺条件酵和提炼工艺条件等密切 相关。 优良菌种的获得有三条途径：优良菌种的获得有三条途径： 是从自然界分离筛选分离筛选： 是用物理域化学方法处理、诱变诱变； 是用

3、基因重组基因重组与细胞融合技术细胞融合技术。因此微生物的分离分离 筛选筛选是一切工作的基础。 5 三、微生物酶制剂生产的发酵技术三、微生物酶制剂生产的发酵技术 首先要合理选择培养方法培养方法、培养基培养基、培养温度培养温度、 pH和通气量通气量等。还要研究酶的分离提纯技术和制备 工艺。 （）原料）原料 利用微生物生产酶制剂的主要原料为碳源碳源和氮源氮源， 此外还有无机盐无机盐、生长因素生长因素和产酶促进剂产酶促进剂等。 6 如果添加少量某种物质就能明显增加酶的产量时， 这类物质通称为产酶促进剂产酶促进剂。它们大多属于酶的诱导诱导 物物或表面活性剂表面活性剂。 1、固体培养法、固体培养法 固体培

4、养法亦称麸曲培养法麸曲培养法 ，该法是利用麸皮麸皮 或米糠或米糠为主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼 等，加水拌成含水适度含水适度的半固态物料半固态物料作为培养基 。 2、液体培养法、液体培养法 液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁 殖和产酶。根据通气（供氧）方法的不同，又分为液液 体表面培养体表面培养和液体深层培养液体深层培养两种。 7 3、影响酶产量的因素、影响酶产量的因素 菌种菌种的产酶性能性能是决定决定发酵效果的重要因素，但 是发酵工艺条件对产酶的影响也是十分明显的。 （1）温度）温度一般发酵温度比种子培养时略高些略高些，这 样对产酶有利。 （2）pH可用糖或淀粉调节，pH低

5、则可用氨来调节。 8 （3）通气（供氧）通气（供氧）临界氧浓度 。氧必须是溶解于培 养基中的氧 。 （4）搅拌）搅拌增加液体湍流速度增加液体湍流速度 ，减少气泡周围液膜减少气泡周围液膜 厚度厚度 。有利于促进细胞的新陈代谢有利于促进细胞的新陈代谢。 （5）泡沫和消沫剂）泡沫和消沫剂由于培养基中蛋白质分子排在 气泡表面形成一层吸附膜，吸附膜，聚集成泡沫层泡沫层之故 。 （6）添加诱导剂和抑制剂）添加诱导剂和抑制剂 诱导酶诱导酶的合成， 诱导酶是该酶作用底物或者是其类似物类似物。抑制剂促进 酶的形成 。加入适量表面活性剂表面活性剂 。 9 第二节第二节酶类药物的提取和纯化酶类药物的提取和纯化 一、

6、生物材料的预处理一、生物材料的预处理 （一）动物材料的预处理（一）动物材料的预处理 1、机械处理、机械处理 用绞肉机绞，一般细胞并不破碎 。有的酶必须细胞必须细胞 破碎破碎后才能有效地提取，在实验室常用的是玻璃匀浆玻璃匀浆 器和组织捣碎器。器和组织捣碎器。 2、反复冻融、反复冻融 冷到冷到-10左右左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。 由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高剩下液体中盐浓度的增高， 能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放酶释放 出来出来。 10 3、丙酮粉、丙酮粉 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉丙酮粉，不仅可减减 少酶的变性少酶的变性，同时因细胞结构成份的破

7、碎细胞结构成份的破碎使蛋白质蛋白质 与脂质结合与脂质结合的某些化学键打开化学键打开，促使某些结合酶结合酶释 放到溶液中，常用的方法是将组织糜或匀浆悬浮于 0.0lmolL，pH6.5的磷酸缓冲液的磷酸缓冲液中，在0下下一边搅 拌，一边徐徐倒入10倍体积的-15无水丙酮无水丙酮内，10 分钟后，离心过滤取其沉淀物，反复用冷丙酮洗几次， 真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低温下可保存数年丙酮粉在低温下可保存数年。 11 （二）微生物的预处理（二）微生物的预处理 要是酶是胞外酶胞外酶，则可除去菌体后再直接从发酵 液中吸附提取酶吸附提取酶。但对胞内酶胞内酶则需将菌体细胞破壁， 制成无细胞无细胞的悬液后再行提

8、取。 菌体用生理盐水洗涤除去培养基后，应深冻保存深冻保存。 1、干燥法：、干燥法： 干燥干燥常能导致细胞自溶细胞自溶，增加酶的释 放，从而在后处理中破壁不必太剧烈就能达到预期目 的。 空气干燥空气干燥2530 真空干燥还真空干燥还原剂作保护剂原剂作保护剂 冷冻干燥对较敏感的酶冷冻干燥对较敏感的酶宜用此法。 2、机械法：、机械法：常用的方法有研磨法，组织匀浆法，超 声波法，高压匀浆法等。 12 3、酶法处理、酶法处理 用得最多的是溶菌酶溶菌酶，如在37，pH8.0下对小球 菌进行破壁处理，历时15分钟，即可提取核酸酶核酸酶。也 有用脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶处理，操作与溶菌酶溶菌酶同。 二、酶

9、的提取二、酶的提取 1、水溶液法、水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取稀盐溶液或缓冲液提取。一般在低温下操作低温下操作。 在酸性条件下稳定的酶要在酸性条件下提取。一般来一般来 说说，碱性蛋白酶用酸性溶液提取碱性蛋白酶用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用碱性酸性蛋白酶用碱性 溶液提取。溶液提取。 13 盐浓度盐浓度一般以等渗为好等渗为好，相当于0.15molLNaCl 的离子强度是最适宜于酶的提取。的离子强度是最适宜于酶的提取。 2、有机溶剂法、有机溶剂法 某些结合酶结合酶如微粒体和线粒体膜的酶微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂和脂 质牢固结合质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶 变性，最常用的有机

10、溶剂是丁醇有机溶剂是丁醇。 3、表面活性剂法、表面活性剂法 表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故 可用于提取结合酶。可用于提取结合酶。 14 三、酶制剂的工业提取法三、酶制剂的工业提取法 （一）发酵液的预处理及过滤（一）发酵液的预处理及过滤 微生物发酵液的分离分离，过滤过滤，发酵液中加絮凝剂絮凝剂 或凝固剂或凝固剂 。絮凝剂絮凝剂有聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷 氨酸氨酸 。 （二）酶液的脱色（二）酶液的脱色 活性炭、脱色树脂活性炭、脱色树脂 。 （三）盐析法（三）盐析法 用得最多的是（NH4）2SO4，在常温下不会造成酶在

11、常温下不会造成酶 的失活的失活，若分级沉淀分级沉淀应用得当，杂蛋白杂质也较少。 15 （四）有机溶剂法（四）有机溶剂法 有机溶剂沉淀蛋白质的能力有机溶剂沉淀蛋白质的能力为丙酮异丙醇乙丙酮异丙醇乙 醇甲醇醇甲醇 。工业上通常采用乙醇作为沉淀剂工业上通常采用乙醇作为沉淀剂。 （五）喷雾干燥直接制备粉末酶制剂（五）喷雾干燥直接制备粉末酶制剂 喷雾干燥用于干燥菌体干燥菌体，药用酶常用冷冻干燥。 四、酶的纯化四、酶的纯化 评价纯化工艺主要看二个指标，一是酶比活酶比活，二二 是总活力是总活力回收。 16 酶在纯化过程中的一些技术难点：酶在纯化过程中的一些技术难点： （一）杂质的除去（一）杂质的除去 酶提取

12、液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白杂蛋白、 多糖、脂类和核酸多糖、脂类和核酸等 。 （1）pH和加热沉淀法和加热沉淀法 （2）蛋白质表面变性法）蛋白质表面变性法 利用蛋白质表面变性表面变性性质的 差别，也可除去杂蛋白除去杂蛋白，加入氯仿和乙醇进行震荡氯仿和乙醇进行震荡， 可以除去杂蛋白。 17 （3）选择性变性法）选择性变性法 利用蛋白质稳定性的不同，除去杂蛋白。 甚至可用2.5%三氯乙酸三氯乙酸处理。 （4）核酸沉淀剂法）核酸沉淀剂法 用核酸酶核酸酶，将核酸降解成核苷酸，使粘度下降便将核酸降解成核苷酸，使粘度下降便 于离心分离于离心分离。 用核酸沉淀剂核酸沉淀剂如三甲基十六烷基溴化铵三甲基

13、十六烷基溴化铵、硫酸链硫酸链 霉素霉素、聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰等。 （5）将酶与底物结合）将酶与底物结合 酶和底物结合或竞争性抑制剂结合后，热稳定性酶和底物结合或竞争性抑制剂结合后，热稳定性 大大提高，这样就可用加热法除去杂蛋白。大大提高，这样就可用加热法除去杂蛋白。 18 （二）脱盐和浓缩（二）脱盐和浓缩 1、脱盐、脱盐 脱盐方法是透析和凝胶过滤透析和凝胶过滤。 2、浓缩、浓缩 酶的浓缩方法浓缩方法很多，有冷冻干燥、离子交换、超滤离子交换、超滤、 凝胶吸水凝胶吸水、聚乙二醇吸水聚乙二醇吸水等。 （三）酶的结晶（三）酶的结晶 把酶提纯酶提纯到一定纯度以后（

14、通常纯度应达纯度应达50%以以 上上），可使其结晶，酶的纯度经常有一定程度的提高一定程度的提高。 为研究蛋白质空间结构提供X射线衍射样品射线衍射样品。 19 1、酶的结晶方法、酶的结晶方法 酶的结晶方法主要是缓慢地改变酶蛋白的溶解度缓慢地改变酶蛋白的溶解度， 使其略处于过饱和状态。 （1）盐析法）盐析法 操作要在低温下进行低温下进行，加盐，缓冲液缓冲液pH要接近酶要接近酶 的等电点。多数酶就可形成结晶的等电点。多数酶就可形成结晶。有时也可交替置交替置 在在4冰箱中和室温下冰箱中和室温下来形成结晶。 （2）有机溶剂法）有机溶剂法 酶液中滴加有机溶剂，有时也能酶液中滴加有机溶剂，有时也能 使酶形成

15、结晶。使酶形成结晶。 一般要含少量无机盐的情况下，选择使酶稳定的 pH，缓慢地滴加有机溶剂有机溶剂 。使用的缓冲液使用的缓冲液一般不用不用 磷酸盐磷酸盐，而用氯化物或乙酸盐氯化物或乙酸盐。 20 （3）复合结晶法）复合结晶法 有时可以利用某些酶与有机化合物有机化合物 或金属离子形成复合物或盐的性质金属离子形成复合物或盐的性质来结晶。 （4）透析平衡法）透析平衡法 （5）等电点法）等电点法 2、结晶条件的选择、结晶条件的选择 （1）酶的纯度）酶的纯度酶的纯度越高，结晶越容易，长成大 的单晶可能性也越大。结晶对酶有明显的纯化作用纯化作用。 （2）酶的浓度）酶的浓度 （3）温度）温度 结晶的温度通常

16、在4下或室温下或室温25下下， 低温条件下酶不仅溶解度低，而且不易变性低温条件下酶不仅溶解度低，而且不易变性。 21 （4）时间）时间 结晶形成的时间,数小时到几个月数小时到几个月，有的 甚至需要1年年或更长时间。一般来说，较大而性能好 的结晶是在生长慢的情况下得到的。一般希望使微晶 的形成快些，然后慢慢地改变沉淀条件，再使微晶慢 慢长大。 （5）pH 调整pH可使结晶长到最佳大小最佳大小，也可改变晶形改变晶形。 结晶溶液pH一般选择在被结晶酶的等电点附近。被结晶酶的等电点附近。 （6）金属离子）金属离子 许多金属离子能引起或有助于酶的结晶引起或有助于酶的结晶，在酶的 结晶过程中常用金属离子有

17、Ca2+、Zn2 、 、Co2 、 、Cu2 、 、Mg2 、 、Mn2 、 、Ni2 等 等。 22 （7）晶种）晶种 不易结晶不易结晶的蛋白质和酶，有的需加入微量加入微量 的晶种才能结晶的晶种才能结晶， （8）结晶器皿处理）结晶器皿处理 结晶用的器皿要充分清洗、烘干清洗、烘干。使用前用结晶 母液再冲洗再冲洗一次。 结晶的玻璃器皿，可用硅涂料硅涂料进 行表面处理，以使表面光滑且不润湿光滑且不润湿。这样可减少晶减少晶 核数目核数目，形成大的结晶。，形成大的结晶。 （四）酶分离和纯化工作的注意事项（四）酶分离和纯化工作的注意事项 1、防止酶蛋白变性、防止酶蛋白变性 2、防止辅因子的流失、防止辅因

18、子的流失 3、防止酶被蛋白水解酶降解、防止酶被蛋白水解酶降解 23 第三节第三节酶类药物酶类药物 一、药用酶类的概述一、药用酶类的概述 早期酶制剂主要用于治疗消化道疾病消化道疾病，烧伤及感染 引起的炎症疾病炎症疾病，现在国内外己广泛应用于多种疾病 的治疗，其制剂品种已超过700余种。 （一）促进消化酶类（一）促进消化酶类 （二）消炎酶类（二）消炎酶类 （三）与纤维蛋白溶解作用有关的酶类（三）与纤维蛋白溶解作用有关的酶类 （四）抗肿瘤的酶（四）抗肿瘤的酶 （五）与生物氧化还原电子传递有关的酶（五）与生物氧化还原电子传递有关的酶 (六）其它药用酶六）其它药用酶 24 （一）胃蛋白酶（一）胃蛋白酶（

19、Pepsin，EC3.4.4.1） 胃蛋白酶胃蛋白酶广泛存在于哺乳类动物的胃液胃液中，药用 胃蛋白酶系从猪、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取胃粘膜中提取。 1、组成（结构）、性质、组成（结构）、性质 药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶多种蛋白水解酶的混合物混合物，含 有胃蛋白酶胃蛋白酶、组织蛋白酶组织蛋白酶、胶原酶胶原酶等，为粗制的酶 制剂。水溶液呈酸性酸性，难溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。 pI为为pH1.0，最适最适pH1.52.0。可溶于可溶于70乙醇和乙醇和 pH4的的20乙醇中。乙醇中。 胃蛋白酶能水解大多数天然水解大多数天然蛋白质底物。 25 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路

20、线： 胃蛋白酶原盐酸催化激活胃蛋白酶原盐酸催化激活成胃蛋白酶。 常用的脱脂剂脱脂剂有乙醚乙醚、氯仿氯仿、四氯化碳四氯化碳。 26 （2）工艺过程：）工艺过程： （3）胃膜素和胃蛋白酶联产工艺）胃膜素和胃蛋白酶联产工艺：向经消化消化、提取提取、 脱脂脱脂、分层分层、浓缩浓缩及60丙酮沉淀分离胃膜素丙酮沉淀分离胃膜素的母液 中，边搅拌边加冷丙酮冷丙酮，至比重为比重为0.91，即有淡黄色 胃蛋白酶沉出，静放过夜，去上清液，沉淀真空干燥， 即得胃蛋白酶。 （4）结晶胃蛋白酶的制备）结晶胃蛋白酶的制备：药用胃蛋白酶原粉，溶 于20酒精酒精中，加H2SO4调pH3.0，5静置20h后过滤， 加硫酸镁硫酸镁

21、至饱和，进行盐析盐析。盐析物再在pH3.84.0 的乙醇中溶解，过滤，滤液用硫酸调硫酸调pH至至1.82.0， 即析出针状胃蛋白酶。沉淀再溶于20%pH4的乙醇的乙醇中， 过滤，滤液用硫酸调pH至至1.8，在20放置，可得板 状或针状结晶。 27 （二）胰蛋白酶（二）胰蛋白酶 胰蛋白酶是从牛、羊胰脏牛、羊胰脏提取、结晶的冻干制剂。 易溶于水易溶于水，不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有机溶剂不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有机溶剂。在 pH1.8时，短时煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则 变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用有保护和激活作用，胰蛋白酶的pI为为 10.1。 牛胰蛋白酶在肠激酶肠激酶或自身自身催化下，

22、释放出6肽， 变成有活性的胰蛋白酶有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶分子量分子量24000，由 223个氨基酸残基组成。 胰蛋白酶胰蛋白酶专一作用于由碱性氨基酸精氨酸及亮氨碱性氨基酸精氨酸及亮氨 酸羧基所组成的肽键酸羧基所组成的肽键。酶本身很容易自溶很容易自溶。 28 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： 29 （三）糜蛋白酶（三）糜蛋白酶（Chymotrypsin，EC3.4.4.5） 胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原成胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原成-糜蛋白酶糜蛋白酶。 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： （2）工艺过程：）工艺过程： 酶原加少量胰蛋白酶酶原加少量胰蛋白酶 ，p

23、H7.6 30 （四）尿激酶（四）尿激酶（Urokinase，EC3.4.99.26） 尿激酶，是一种碱性蛋白酶碱性蛋白酶。由肾脏肾脏产生，主要存 在于人及哺乳动物的尿中尿中。人尿平均含量56国际单国际单 位位m1。 1、组成（结构）性质、组成（结构）性质 （1）尿激酶有多种分子量形式。尿中的尿胃蛋白酶 原，在酸性条件下酸性条件下可以激活生成尿胃蛋白酶，尿胃蛋白酶，把天 然尿激酶降解降解成为尿激酶尿激酶。 （2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶蛋白水解酶，血纤维蛋 白溶酶原是它唯一唯一的天然蛋白质底物，它作用于精氨精氨 酸酸-缬氨酸键使纤溶酶原缬氨酸键使纤溶酶原转为纤溶酶。尿激酶也具有 酯酶活力

24、酯酶活力。 31 （3）尿激酶的pI为为pH89，主要部分在pH8.6左右左右。 溶液状态不稳定溶液状态不稳定，冻干状态可稳定数年稳定数年。加入1 EDTA、人血白蛋白或明胶人血白蛋白或明胶可防止酶的表面变性表面变性作用。 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： 32 （2）工艺过程：）工艺过程： 硅藻土吸附 ，0.02氨水加0.1molL氯化钠洗脱。 QAE-Sephadex层析柱 去热原、色素。CMC浓缩 。 33 （五）细胞色素（五）细胞色素C（CytochromeC） 细胞色素细胞色素C存在于自然界中一切生物细胞里，其含 量与组织的活动强度成正比活动强度成正比。以哺乳动物

25、的心肌心肌、鸟 类的胸肌胸肌和昆虫的翼肌翼肌含量最多，肝、肾肝、肾次之，皮肤 和肺中最少。 1、组成（结构）、性质、组成（结构）、性质 细胞色素细胞色素C是含铁卟啉含铁卟啉的结合蛋白质结合蛋白质，铁卟啉环铁卟啉环 与蛋白质部分比例为比例为1 1。猪心细胞色素C分子量分子量 12200。pI为为pH10.210.8。 34 细胞色素C对干燥、热和酸干燥、热和酸都较稳定。 氧化型氧化型呈水溶液深红色，在饱和硫酸铵中可溶解。 还原型还原型水溶液呈桃红色，溶解度较小。 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： 35 人造沸石人造沸石pH7.5吸附吸附 ，蒸馏水和氯化钠溶液反复洗 涤 ，25

26、硫酸铵溶液洗脱硫酸铵溶液洗脱 。 20三氯醋酸沉淀细胞色素C，Amberlite IRC50 （NH4）树脂柱吸附 。 36 （六）溶菌酶（六）溶菌酶（Lysozyme） 溶菌酶溶菌酶，又称胞壁质酶胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解乙酰胞壁质聚糖水解 酶酶。它广泛存在于鸟类和家禽鸟类和家禽的蛋清蛋清、哺乳动物的 泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如肝、泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如肝、 肾）细胞内肾）细胞内，其中以蛋清含量最丰富蛋清含量最丰富。 溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质杀菌作用的天然抗感染物质， 具有抗菌、抗病毒、抗炎症抗菌、抗病毒、抗炎症。 1、组成（结构）和

27、性质、组成（结构）和性质 溶菌酶是一碱性球蛋白碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸碱性氨基酸、酰酰 氨残基氨残基及芳香族氨基酸芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。 37 溶菌酶能催化粘多糖粘多糖或甲壳素甲壳素中的N-乙酰胞壁酸 和N-乙酰氨基葡萄糖之间的-1，4糖苷键糖苷键。 溶菌酶是一种罕见的稳定蛋白质稳定蛋白质。在pH5.5加热4h 后，酶变得更活泼。低浓度的低浓度的Mn（10-7molL）在 中性和碱性条件下中性和碱性条件下能使酶免受热的失活作用。 38 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线）工艺路线 39 （七）（七）L-天门冬酰胺酶天门冬酰胺酶（L-asparaginase） 1、组成（结构

28、）、性质、组成（结构）、性质 L-天门冬酰胺酶天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶酰胺基水解酶，是从大肠杆菌大肠杆菌 菌体中提取分离的酶类药物，用于治疗白血病。 性状呈白色粉末状，微有湿性，溶于水溶于水，不溶于 丙酮丙酮、氯仿氯仿、乙醚及甲醇乙醚及甲醇。最适最适pH8.5，最适温度最适温度 37。 L-天门冬酰胺酶的产生菌是霉菌和细菌霉菌和细菌，故可作 制造酶的原料。 40 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： 41 （八）激肽释放酶（八）激肽释放酶（Kallikrein） 激肽释放酶激肽释放酶是一种蛋白酶蛋白酶。哺乳动物的激肽释放 酶有两大类：血液激肽释放酶血液激肽释放酶和组织激肽释放

29、酶组织激肽释放酶。药 用激肽释放酶又称血管舒缓素血管舒缓素，主要来自颌下腺或胰颌下腺或胰 腺。腺。 42 猪胰激肽释放酶是一种糖蛋白糖蛋白，含有唾液酸含有唾液酸，在腺 体中以酶原形式酶原形式存在。唾液酸的除去并不影响酶的唾液酸的除去并不影响酶的 活性活性 。 （1）专一性）专一性 激肽释放酶是一种内切蛋白水解酶内切蛋白水解酶 ， 当它作用于蛋白质底物激肽原激肽原后释放出激肽激肽。激肽释 放酶只作用于天然激肽原天然激肽原 。 （2）稳定性）稳定性一般说，激肽释放酶的纯度越高纯度越高，稳稳 定性越差定性越差。在水溶液中不稳定，但在在水溶液中不稳定，但在pH8.0的水或缓的水或缓 冲液中，可在冷冻状

30、态下保存相当长时间不失活。冲液中，可在冷冻状态下保存相当长时间不失活。 43 2、生产工艺、生产工艺 （1）工艺路线：）工艺路线： （2）工艺过程：）工艺过程： 冷丙酮 33 、70，用丙酮、乙醚脱脂、脱水脱脂、脱水 。 40%、60%冷丙酮 分级沉淀。 弱酸性阳树脂Amberlite CG50（钠型） 44 （九）超氧化物歧化酶（九）超氧化物歧化酶（SuperoxidedismutaseSOD） 超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂自由基清除剂，作 为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国有产品，此酶 属金属酶金属酶，它催化的化学反应是： 由于SOD能专一清除超氧阴离子自由基（超氧阴离子自由基

31、（O2-）； 故引起国内外生化界和医药界的极大关注。目前SOD 临床应用集中在自身免疫性疾病上如类风湿关节炎、 红斑性狼疮、皮肌炎、肺气肿等；也用抗辐射，抗肿 瘤、治疗氧中毒、心肌缺氧与缺血再灌注综合征以及 某些心血管疾病。 45 1、组成（结构）、性质、组成（结构）、性质 (1)SOD属金属酶属金属酶，其性质不仅取决于蛋白质部分，其性质不仅取决于蛋白质部分， 还取决于活性中心金属离子的存在还取决于活性中心金属离子的存在。按金属离子种 类不同，SOD有Cu，Zn-SOD、Mn-SOD和和Fe-SOD。 三种酶都催化同一反应，但其性质有所不同，其中 Cu，Zn-SOD与其它两种SOD差别较大，而Mn-SOD 与Fe-SOD之间差别较小。 （2）SOD的活性中心和构象比较特殊，金属辅基金属辅基Cu 和和Zn与必需基团与必需基团His等形成咪唑桥等形成咪唑桥 。 （3）SOD的理化性质的理化性质 SOD是一种金属蛋白，因此它因此它 对热、对对热、对pH及在某些性质上表现出异常的稳定性及在某些性质上表现出异常的稳定性。 46 对热稳定性对热稳定性 SOD对热稳定。但SOD对热稳定性与 溶液的离子强度离子强