血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定

1、血清乳酸脱氢酶 DGKCt荐方法测定1. 实验原理德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法3。LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH, NADH的生成速率 与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。L-孚L 酸 + NAD +丙酮酸 + NADH + H +LDH2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。3. 标本存放：3天内的活性损失：28 C保存：8%; 1525 C保存：2%。4. 标本运输：常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6. 实验材料6.1 试剂 申能LDH测定试剂盒(141 3207170 1试剂1

2、( 6 X 64ml),试剂2 ( 6 X 16ml )6.1.1 试剂组成试剂1 ( R1):N-甲基-右旋糖酐缓冲液325mmol/LL-乳酸50mmol/L试剂2 ( R2):+NAD10mmol/L6.1.2 试剂准备 试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28 C，若无污染，可稳定至失效期。 试剂不可冰冻。6.1.4 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液 体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5 注意事项 试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2 校准品 使用Dia

3、Sys 公司提供的TruCal U 校准品对自动分析仪进行 校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目 基本参数： 参见 AU680 生 化分 析仪项 目测定 参数 .SOP 文件8.2仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质 量 控 制 ：在 每 一 批 标 本 中 都 应 把 非 定 值 血 清 水 平 I 与 II 质 控 做 为 未 知 标本进行分析， 以 2S 为质控 警告限 ，3S 为 失控限，绘制

4、质控图 ，判断是否 在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U复合校准品LDH校准值校准仪器后，在病人结果 可报告范围内 ，仪器直接报告可靠的检测结果。年龄、 饮食 和地域的不同 而有 所差别 。 根据 好的 实验室不使用校准品进行LDH活力检测，可以直接使用 A/mi n均值乘以计算 因子得到结果， 但是这样所得结果的可靠性不如使用 校准品。 计算 LDH 活力 的计算因子见下表： A/min x因子：= LDH活力U/L底物起始的反应(37 C )样品 起 始的 反应340 nm100808095334 nm102758250365 nm18765

5、1500012. 参 考值 范 围 1 U/L女性男性成人：135 215135 225儿童：130天145 765125 73531天1年190 420170 45013岁165 395155 3454 6 岁135 345155 3457 9 岁140 280145 30010 12 岁120 260120 32513 15 岁100 275120 29016 18 岁105 230105 235参考值因性别、(37 C )经验， 每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2:乳酸脱氢酶（LDH）由五种不同的同工酶组成，催化L-乳 酸与丙酮酸的相互转换。 LDH 存在于人体所有组织

6、的细胞质中， 在肝、心和 骨骼肌中含量较高， 在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。 在多种病理情况 下出现LDH活力的升高，如心肌梗死、癌症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾 病。由于LDH缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作LDH同工酶和 其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移 酶。14. 操作性能14.1 线性范围：5-1200U/L。14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内精密 度小于3%,总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS的规则。批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度

7、n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)样品11782.001.12样品11701.620.95样品21872.121.14样品21762.481.41样品35662.270.40样品35663.610.6414.3 方法学比较：本公司的试剂盒（y）与IFCC参考方法（x），同时对79个样品进行LDH检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.97x+5.9U/L； r =0.997。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。14.5 病人结果可报告范围：5-1200U/L。15. 超出范围结果处理 本法对LDH活力检测的最大 A/min 在340、334nm 为0.15 ,在

8、365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯 化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。16. 病危报警值的处理17. 方法局限性17.1 本法对 LDH活力检测的最大厶A/min 在 340、334nm 为0.15 ,在 365nm 为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀 释，重新测定，结果乘以10。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L ,胆红素浓度 684 Jmol/L ,甘油三酯浓度乞22.6mmol/L 时没有观察到干扰。血红蛋白浓度 -0.5g/L 会影响检测结果。18. 补救措施：当仪器发生故障时，

9、迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1. Thomas L, editor.Cli nicallaboratorydiag no sties.1st ed. Fran kfurt:TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.89-94.2. Moss DW, Hen ders on AR. Digestive en zymes of pan creatic origi n. In:3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemie. (German Society for Clinical Chemistry). Recommendation for the determination of the catal