甘油的检测方法汇总

1、甘油的检测方法汇总在发酵行业中，甘油作为底物，是发酵液中生物合成的直接前体，会影响外源蛋白的启 动表达效率，其含量的高低直接影响产物的发酵单位，是决定菌种取舍的重要指标，是提高 工程菌的发酵密度，提高产品生产率的关键。在生物柴油生产中，它是副产物，其含量直接 影响生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油产品品质的重要指标之一。此外，甘油能与水结 合以防止红细胞的冷冻损伤，能延长红细胞的保存期，被普遍用作细胞内冷冻保护剂等。山 于甘油用途很广，因此其含量的测定具有非常重要的意义。目前国内外甘油含量的测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、Cu2+络合比色法、酶比色 法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法

2、、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法 等。下面将对其进行简要概述：、高碘酸法1. 原理：高碘酸氧化法是口就常见用于tr油含量检测的方法，利用高碘酸与甘油发生氧化还 原反应，剩余高碘酸及反应生成的碘酸与碘化钾反应生成碘，再用硫代硫酸钠进行滴定，根 据消耗的硫代硫酸钠的量来计算甘油的含量。2. 操作步骤准确发酵液10ml于lOOmL小烧杯中，加少量水溶解，然后转移至100mL容量瓶中，用水稀释 至标线，摇匀，静置。用移液管准确移取lOmL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸钠溶 液，混合均匀后，于黑暗中避光静置40min,然后加入碘化钾溶液和20%盐酸溶液各15mL, 调节pH值在0.81.

3、0之间，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定，近终点时，加入2mL淀粉指 示剂溶液，继续滴定至溶液蓝色消失。同时做试样空白。3.计算:（Z）xCxJoo10/50x4x1000式中：w样品中甘油的含量，；VI空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；V2试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL：C硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L； M甘油相对分子质量;一、酶比色法1. 原理：它是利用酶的特异性催化反应建立的测定甘油的一种酶学方法，是指甘油在甘油激 酶作用下转化为3-磷酸甘油，后者山磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二轻丙酮和过氧化氢，然 后过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰

4、色、能在500 run 左右有特征吸收峰的覘亚胺，通过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的H：O：,甘油的含量 与生成的乩0成正比，这样用比色法就可以测定甘油的含量。2. 操作步骤波长：oOOnm （480520nm） 反映温度：37C 比色杯光径：lcm取一定量R1 （参看R2瓶签）加入1瓶R2中，溶解后即为工作液，工作液预先保温至测试温 度。空白管校准管样品管工作液1ml1ml1ml蒸馆水0.0100标准品0.01样品000.01分别混合均匀，在反应温度保温10分钟，以试剂空白管校零，记录校准及样品0D值。3. 计算：甘油浓度二A和/A側X校准浓度（mmol/L或mg/dl）二、高效液相色谱

5、法1. 原理：高效液相色谱法（HPLC）的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不 同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，利用 色谱柱对待测混合物先进行分离，然后再进行检测，从而实现对试样的分析，因而其测量的 准确性和精确度较高，目前已成为检测生化分子较常用的一种方法。2. 操作步骤（1）首先用水将发酵液稀释2. 5倍,然后加时0调pH至5. 5,在转速8000r/min温度4C 下离心lOmin,经微孔滤膜过滤用于HPLC分析；（1）将甘油标准系列溶液在最佳色谱条件下进行HPLC分析，以峰面积外标法定量得到甘油标 准曲线；（2）按照样品预处理方法

6、处理后进样5微升，记录峰面积，代入线性方程中，计算其测定值。 将计算值乘以稀释倍数后，即得发酵液中甘油的含量。一、气相色谱法1. 原理：气相色谱分析法是用于分离分析复杂样品中的化合物的一种方法，其原理是一定量 的气体或液体分析物被注入到柱一端的进样口中，在载气带动下通过色谱柱，分析物的分子 会受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的样品具有不同的物理和化学性质，与特定的固定 相有着不同的相互作用，使得每一种类型的分子都有自己的通过速率，因此，分析物中的各 种不同组分就会在不同的时间到达柱的末端，从而得到分离。当化合物从柱的末端流出时， 它们被检测器检测到，产生相应的信号，并被转化为电信号输出，从而

7、确定每一个组分到达 色谱柱末端的时间顺序以及每一个组分的含量。2. 操作步骤（1）标准溶液的配制 在7个25mL容量瓶中分别准确称入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5g甘油（精确至0. lmg）,再分别移入2mL内标贮备液，用混合溶剂定容并摇匀，作为标 准工作溶液。其中甘油质量浓度分别为0、2、4、8、12、20g/L,内标质量浓度均为8g/L。（2）样品的制备 在25mL容量瓶中加入5ml的发酵液样品，移入2mL内标贮备液，用混合 溶剂定容至刻度并摇匀。（3）GC条件色谱柱：HP-5石英毛细管柱，30m （柱长）X0. 32mm （内径）X0.25ym （膜厚）。柱温：初

8、 始温度120C,保留omin,以20 C/min升至290C,保留lOmin。进样口温度：280C,进样 量：0. 2uL,分流比：100： lo检测器（FID）温度：300C,氢气流速：40mL/min,空气流 速：300mL./mino载气：氮气，流速：lmL/min,恒流模式（4）进样，计算二、酶电极法1、检测原理利用生物酶只能催化一种或一类底物的性质，将甘油氧化酶进行固定化处理，样本中的片油 在片油酶膜的作用下被催化生成过氧化氢，根据电化学的原理，过氧化氢的浓度与电压值正 相关，根据标准液、缓冲液的电压值响应值来确定样本中甘油浓度。电压值与浓度的相关性分析Y= 523.51绘圉31ii电压值线性（电压值）0.511.5甘油浓度L2200000000000002 0 8 6