《现代食品微生物学》第二章微生物分离

1、现代食品微生物学第二章微生 物分离 第二章 微生物的分离 从自然界或混有杂菌的培养体中将所需要的 微生物提纯出来。这种获得纯培养的方法称 为微生物的分离与纯化。 微生物的自然分布 土壤 水 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 采集地点 可根据待分离微生物的特点选择，特定 微生物在自然状态下得到富集。 如：筛选产淀粉酶的菌株 筛选降解石油碳氢化合物污染物 现代食品微生物学第二章微生 物分离 样品处理 样品采集后，针对待分离微生物的代谢 特点，设计合理的筛选条件，可以大大 减少分离步骤和筛选工作量。 如：芽孢杆菌的筛选。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 微生

2、物的常规分离 一 工业用微生物的基本要求 （1）菌株为“纯培养” （2）菌种具有稳定的遗传性 （3）菌株生长迅速 （4）产生目的产物时间短 （5）尽可能自我保护 （6）产物单一，易于分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 二 从自然界分离微生物的常规方法 1 在无菌条件下进行 分离：从存在于自然界的混合菌群中分 离出一种微生物，并加以培养。 纯培养： 现代食品微生物学第二章微生 物分离 常用的分离培养基 细菌：肉膏蛋白胨培养基 放线菌：高氏号培养基 真菌：马铃薯培养基 马丁氏培养基 查氏培养基 酵母：麦芽汁培养基 现代食品微生物学第二章微生 物分离 3 从土壤中采样分离 挖土 稀释 接种 培

3、养分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 采样时要注意的问题 气候、水分、空气 来源要广 结合产品的特点 标签：地点、时间、气候等 现代食品微生物学第二章微生 物分离 三、随机筛选法分离纯化微生物 平皿划线分离法 倾注平皿稀释分离法 涂布平板法 液体分离法 厌氧菌的的稀释分离法 单细胞挑取法 现代食品微生物学第二章微生 物分离 1 平皿划线分离法 图 6-2 平皿划线分离法操作步骤(参照Introduction to Microbiologyed. Ingrahams) a:在火焰上灼烧灭菌接种 b:挑取待分离样品 C1、C2、C3、C4分别为第1、2、3、4次平板上划线 d：培养结果 Fi

4、g.6-2 The procedures of streak plate method for isolating pure culture C2： C3： C4： C1:first set of streaks 现代食品微生物学第二章微生 物分离 2 倾注平皿稀释分离法 图 6-1 倾注平皿稀释分离法操作步骤（参照Introduction to Microbiology, .ed. Ingrahams） a:系列稀释 b:倾注平板 c:分离获得的单个菌落 Fig.6-1 The procedures of pour plate method for isolating pure cultur

5、e 现代食品微生物学第二章微生 物分离 3 涂布平板法 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 Each colony was examined microscopically 现代食品微生物学第二章微生 物分离 4 液体分离法 适用于细胞较大的微生物。用液体培养基对菌液 做10倍系列稀释，使试管中只存在一个细胞，由此 繁殖得到的后代必是纯培养。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 5 厌氧菌的的稀释分离法 现代食品微生物学第二章微生 物分离 厌氧罐 anaerobic jar 现代食品微生物学第二章微生 物分离 上述分离技术只能分理出原始样品中数 量较多、较为

6、普遍的微生物的单菌落， 对于数量较少的微生物不容易达到分离 目的。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 6 单细胞挑取法(micromanipulator method) 采用显微分离法从混杂群体中直接分 离单个细胞或单个个体进行培养以获得 纯培养的方法。该方法要在显微镜下进 行。这种方法要求操作人员技术熟练。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 毛细管法：用毛细管提取微生物个体，毛细管法：用毛细管提取微生物个体， 适合于较大微生物。适合于较大微生物。 显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取 单个细胞或孢子以获得纯培养。单个细胞或孢子以获得纯培养。 小液滴法：将经

7、过适当稀释后的样品制小液滴法：将经过适当稀释后的样品制 成小液滴，在显微镜下选取只含一个细成小液滴，在显微镜下选取只含一个细 胞的液滴来进行纯培养物的分离。胞的液滴来进行纯培养物的分离。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 四、选择性分离技术 选择培养分离 富集培养分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 1 1、 选择培养分离选择培养分离 分离特定微生物 抑制大多数微生物的生长或者造成有利 于该菌生长的环境，再通过稀释平板方 法进行纯培养。 通过选择培养进行微生物纯培养分离的 技术称为选择培养分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 2 2、 富集培养分离

8、富集培养分离 创造特定的环境条件（温度、PH、紫外 线、高压、光照、氧气、营养等），使 仅适应于该条件的微生物生长旺盛，从 而使其在群落中的数量大大增加。再通 过稀释平板法分离纯化。 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 五、真菌的分离培养 液体培养 酵母：沉淀、薄膜 霉菌：菌丝球 现代食品微生物学第二章微生 物分离 固体分离 试管斜面 平板分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 有用微生物的筛选 供筛选分离样品（采样）的来源 初筛 用于筛选的几种特异技术 现代食品微生物学第二章微生 物分离 初筛 pH指示剂 碳酸钙 胞外酶 抗生素 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 用于筛选的几种特异技术 1 纸条测定法 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生 物分离 现代食品微生物学第二章微生