第三代液基制片技术——Eprep液基制片系统

1、sammys works 第三代液基细胞学制片术第三代液基细胞学制片术 韩国派氏e-prep液基产品 细胞学检测发展史细胞学检测发展史 n1917年巴氏细胞学的始祖papanicolaou发表。 n1928年papanicolaou首次发表了用阴道抹片诊断子宫癌的 文章。 n1943年， papanicolaou与traut合著阴道涂片诊断子宫癌 瘤一书，从此应用阴道脱落细胞筛查宫颈癌的方法受到 推广。 npapanicolaou的巴氏五级分类法，在一段相当长的时间内 作为一种诊断报告方式。 巴氏i级：完全正常. 巴氏ii级：多见于绝经后或育龄伴有宫颈炎症者,指个别细胞核 异质明显,但不支持恶

2、性. 巴氏iii级：可疑癌,需马上做进一步确诊,大约有10%的几率向 癌症发展. 巴氏iv级：重度可疑癌,全面检查. 巴氏v级：确定癌. 巴氏巴氏5级分类法主观因素较多级分类法主观因素较多,各级之间无严格的客观标准各级之间无严格的客观标准 巴氏涂片（巴氏涂片（pap smear） 宫颈脱落细胞涂片 ，是指从子宫颈部取少量的细胞样品，放在玻璃片上， 然后在显微镜下研究是否异常。bethesda由美国国家癌症研究所在地 bethesda召开会议定制的宫颈和引导细胞病理学诊断报告方法，其中包括 涂片满意度的标准和诊断名称的定义。 自60多年前问世以来，巴氏涂片使当时宫颈癌病发率在世界范围 内下降了7

3、0% 90%。 巴氏涂片弊端巴氏涂片弊端 采集细胞数量不够，有效细胞比例更少 转移到玻片上细胞不具代表性 细胞堆积重叠，影响视线 粘液、杂质、血细胞未除去，制片质量差 人工操作，漏检率高 传统巴氏涂片有高达传统巴氏涂片有高达55%假阴性假阴性 tbs（the bethesda system）诊断系统是一种描述性诊断， 1988年美国由50位病理学家在华盛顿马里兰州bethesda 城开会讨论宫颈/阴道细胞学诊断报告方式。 tbs诊断系统诊断系统 反映了当代对子宫颈癌及前驱病变的最新认 识，提出了统一的诊断术语，旨在代替应用 半个多世纪的巴氏5级报告系统； 是统一的，可重复的，并且富有灵活性的命

4、 名系统； 有利于病理细胞检验医生与临床医生的沟通。 反映了当代对子宫颈癌及前驱病变的最新认识， 提出了统一的诊断术语，旨在代替应用半个多 世纪的巴氏5级报告系统； 是统一的，可重复的，并且富有灵活性的命名 系统； 有利于病理细胞检验医生与临床医生的沟通。 该诊断系统是目前宫颈细胞学最新分类和最权威该诊断系统是目前宫颈细胞学最新分类和最权威 的诊断标准。的诊断标准。 评估并报告细胞学标本的满意度。（满意和不满意两大类） 诊断术语标准化，不再采用巴氏分级系统。引用术语：非 典型鳞状细胞（asc）、鳞状上皮内病变（sil）和非典型 腺细胞（agc）。 提出适当的建议，以利对病变进一步评价。 宫颈癌

5、前病变，细胞学和组织学中使用的不同专业术语宫颈癌前病变，细胞学和组织学中使用的不同专业术语 细胞学分类 （用于筛查） 组织学分类 （用于诊断） 巴氏分类法tbscinwho 描述性分类 1级正常正常正常 2级asc-us asc-h 非典型非典型 3级lsilcin 1包括扁平疣凹空细胞 3级hsilcin 2中度非典型增生 3级hsilcin 3重度非典型增生 4级hsilcin 3原位癌 5级浸润癌浸润癌浸润癌 cin：宫颈上皮瘤变，lsil：低度鳞状上皮内病变，hsil：高度鳞状上皮内病变， asc-us：意义未明确的非典型鳞状上皮细胞，asc-h：非典型鳞状上皮细胞，不排 除高度鳞状上

6、皮病变 n薄层制片细胞学检验（thinprep cytologic test, tct )于 1996年获得美国食品与药品管理局（fda）认证。 n薄层制片细胞学检验技术是通过标本采集、细胞混匀、细 胞的负压过滤膜采集、细胞转移，制成薄层的玻片；然后 凉干或烘干，常规巴氏染色。 n该技术也被定格为膜式技术。具有代表的厂家有美国新柏 式tct 液液基薄层制片术（模式）基薄层制片术（模式） n液基细胞学检验（liquid-based cytologic test,lct ) 于1998年获得美国食品与药品管理局（fda）认 证。 n液基细胞学检验技术，通过标本采集及保存、细 胞混匀、分离提取诊断细

7、胞、全自动制片及染色 等过程制作细胞薄片，全过程均在液体状态下完 成，故称为液基细胞学技术。 n该技术为沉降式原理技术。代表公司有美国bd公 司的lct，国产广州安必平公司的lbp. 液基薄层制片术液基薄层制片术（沉淀式）（沉淀式） 液基细胞学制片术优点液基细胞学制片术优点 相对于巴氏涂片： 将采集的细胞保存至保存液中，可收集全部细胞 转移到切片上的细胞均匀化，具有代表性 细胞平整分布、成薄层，无重叠 保存液有效去除粘液、血液、杂质，染色出制片结果清晰，容易诊断 液基细胞学技术的应用液基细胞学技术的应用 妇科：妇科：宫颈疾病诊断 应用已非常普遍、1999年进入中国已有十几年历史 非非妇科：妇科

8、：胸水、腹水、心包液、浆膜腔冲洗液、尿液、痰液、纤维支气管镜 刷检和组织穿刺 相对于妇科应用，开展相对晚，开展不够成熟 液基细胞学制片技术的妇科应用液基细胞学制片技术的妇科应用 在全球，女性的恶性肿瘤中宫颈癌的发病位居第二，仅次于乳腺 癌，在妇科的恶性肿瘤中发病率最高。 在中国，每年有8万女性死于宫颈癌。 早期发现，可以改变癌症患者的命运。 hpv（人乳头瘤病毒) 感染是导致宫颈癌的罪魁祸首！ -哈拉尔德楚尔豪森这一发现已获得2008年度诺贝尔生理学与医学奖 。 hpv持续感染是宫颈癌的主要致病因素。 99.7%宫颈癌患者存在hpv感染。 子宫颈癌早期治疗的5年生存率接近100%， 晚期治疗5

9、年生存率为20-50%。 进展进展 进展 一过性感染持续感染 hpv 正常宫颈 炎症 癌前病 变 癌 消退消退 感染 数据来源：thomas c. wright, jr., m.d., mark schiffman, m.d. adding a test for human papillomavirus dna to cervical-cancer screening. the new england journal of medicine. 2003, 490. 肉眼观察 子宫颈脱落细胞巴氏涂片 薄层液基细胞学涂片法 hpv dna检测 阴道镜检查 荧光镜检法 组织病理诊断 宫颈癌检测方法宫

10、颈癌检测方法 美国癌症协会（acs）、美国阴道镜和宫颈病理学会（asccp）、美国临床病 理学会（ascp）宫颈癌筛查最新指南 人群人群筛查方法的建议筛查方法的建议说明说明 21岁以下女性岁以下女性无需筛查 21-29岁女性岁女性每3年一次细胞学 30-65岁女性岁女性每5年一次细胞学和hpv联合检测不推荐单独hpv检测 65岁以上女性岁以上女性 每3年一次细胞学 ，此前筛查充分阴性，则无需筛查 既往有cin2、cin3或ais， 应继续常规的该年龄段的 筛查，至少进行20年 全子宫切除术后女全子宫切除术后女 性性 无需筛查 针对没有宫颈，且在既往 20年中无cin2,、cin3、ais 和宫

11、颈癌病史者 接受接受hpv疫苗的女疫苗的女 性性 依照各年龄段的建议（与未接受免 疫的妇女相同） 宫颈宫颈癌筛查人群及方法癌筛查人群及方法 modified from saslow d, solomon d, lawson hw, killackey m, kulasingam sl, cain j, et al. american cancer society, american society for colposcopy and cervical pathology, and american society for clinical pathology screening guidel

12、ines for the prevention and early detection of cervical cancer. ca cancer j clin. 2012;62(3):147- 72. hpv检测较细胞学检查更敏感，但特异性较低。不建议对不建议对1000人份/ 月 500人份/月 200人份/月 无病理科无病理科 方法学方法学 thinprep 泰普 模式 surepath 安必平 沉降式 赛涂 利普 离心涂 片法 方法学各有优劣，不同医生偏好不同。目前沉降式多以全自动制片染色 为主。 收费标准收费标准 目前大部分省份具有收费标准，收费条码为27080004，详见收费标准文件

13、 省份省份收费收费省份省份收费收费 上海150重庆190 浙江120四川208 江苏150湖南170/140 江西140湖北180 福建180海南150 广东200北京150 安徽170天津190 云南150河南150 广西150吉林180 山西150辽宁180 陕西160黑龙江180 贵州？青海180 山东？甘肃180 韩国派氏韩国派氏 e-rep液基细胞处理液基细胞处理系统系统 第三代液基制片系统第三代液基制片系统双层过滤膜双层过滤膜&沉降式制片沉降式制片 韩国派氏公司2010年成立于韩国 2010年获得gmp以及医疗器械生产许可证。 主要生产经营产品为液基产品。 目前在韩国、中国、东南亚

14、、西欧、南非、俄国等有业务销售* 。 该公司为新起的新兴公司，品牌价值不高。 2011年正式进入中国，并于2011年有产品销售至中国市场。 2013年获得仪器和妇科试剂医疗器械注册证。 目前在中国有不到10家终端客户，月销售超10000测试* 非妇科注册估计于2014年年中通过审批 全自动制片机e-prep已研发完毕，正在报证注册 韩国派氏公司介绍韩国派氏公司介绍 派派氏液基细胞学检测系统（氏液基细胞学检测系统（liquid based cytology，lbc） 模式制片：双层过滤膜，模式双层过滤膜，模式+沉降式沉降式 半自动制片 制片速度：每次2片，1小时/120片 孔径20mm 细胞数量

15、：不少于5万个细胞。取决于标本的质量，可通 过机器调节细胞的薄厚、多少。 高25cm 长30cm 宽25cm 派氏液基检测系统组成派氏液基检测系统组成 仪器：仪器：e-prep 1000 细胞保存及输送用液体 乙醇成分 含血液分离剂 保存细胞形态 运输检测体时使用 mif20过滤瓶 直径20mm 过滤式及沉淀式 试剂耗材：保存分解液试剂耗材：保存分解液+过滤瓶过滤瓶 其他耗材其他耗材 tct专用防脱载玻片、盖玻片专用可卸宫颈刷 染色液染色液 巴氏染色巴氏染色液液 苏木素(harris)染液 橘黄g 染液 ea36 染液或ea50 染液 he染色液染色液 苏木素 伊红 其他常规病理科耗材、试剂其

16、他常规病理科耗材、试剂 乙醇、封片液、二甲苯 玻璃器皿、玻片架、镊子 液基细胞学操作步骤液基细胞学操作步骤 1. 采样采样 2. 前处理（妇科震荡即可，非妇科需要消化震荡离心）前处理（妇科震荡即可，非妇科需要消化震荡离心） 3. 上载玻片、过滤瓶、加载样本上载玻片、过滤瓶、加载样本 4. 制片制片 5. 固定、染色固定、染色 6. 阅阅片观察、发布结果片观察、发布结果 手工手工 手工手工 自动自动 1.1.收集收集样样本本 6.6.显显微微镜阅镜阅片片 2.前前处处理（震理（震荡荡） 4. 4. 制片制片 3. 3. 上上载过滤载过滤 瓶瓶、载载玻片、玻片、 加加载样载样本（本（3 3 mlm

17、l） 5. 5. 固定染色固定染色 制片步骤制片步骤 第一第一层过滤层过滤膜膜 第二第二层过滤层过滤膜膜 1 1过滤过滤& & 抽吸抽吸 粘液和粘液和杂质杂质 宫颈细宫颈细胞胞 3. 3. 插插入玻片入玻片 2. 2. 过滤瓶过滤瓶下移下移 4. 4. 过滤瓶过滤瓶上升上升 6. 6. 制片完成制片完成 e-prep 20mm 5. 5. 转转移移细细胞胞 制片制片原理（专利双层过滤膜原理（专利双层过滤膜+沉降式）沉降式） 新柏氏（新柏氏（thin prep 2 000） 韩国佰达因韩国佰达因(cell prep plus) 韩国派氏韩国派氏(e-prep)bd surepath 意大利赛涂（

18、意大利赛涂（cyt oneph） 原理过滤膜式 过滤膜式 （空气压缩技术） 过滤模过滤模+沉降式沉降式 （双层过滤膜）（双层过滤膜）沉降式离心甩片 保存液主成分甲醇乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇 制片孔径面积2220201317 是否需要离心视情况视情况视情况必须必须 每轮制片数量1片1片2片1-48片1-6片？ 制片速度/时30片120片120片40片60片 自动化半自动制片全自动制片半自动制片半自动制片自动制片染色一体半自动制片 所需耗材数量5种3种4种种9种6种 制片质量 配套耗材软件耗材有、tis系统耗材有、软件无耗材有、软件无耗材有、软件无耗材有、软件无 制造商 美国赛迪(豪烙捷收 购) 韩国

19、佰达因medi max pathtch 美国tripath imagin g（bd收购） 意大利hospitek 经销商英硕力达科为？上海复星上海复星直销？ 北京康思润业生物 技术有限公司 比较比较vs进口进口 韩国派氏韩国派氏(e-prep) 泰普泰普(tib 1000/ti b 1800) 泰康（泰康（tct2000/30 00/tky-lcta ） 安必平（安必平（lbp）丽拓丽拓（lts-3000a） 原理 过滤模过滤模+沉降式沉降式 （双层过滤膜）（双层过滤膜） 过滤模式（仿新 柏氏）/沉淀式 （仿bd） 过滤模式（仿新柏 氏）/沉淀式（仿b d） 沉降式沉降式 保存液主成分乙醇乙醇

20、?？ 制片孔径面积20mm13mm20mm/13mm13mm13mm 是否需要离心视情况视情况/必须视情况/必须必须必须 每轮制片数量2片1片/1-24片1片/1-24片1-24片1-8片 制片速度/时120片30片30片50片30片 自动化半自动制片半自动制片 半自动制片/半自 动制片，自动染 色一体 半自动制片/半自 动制片，自动染色 一体 半自动制片、自 动染色 半自动制片、自 动染色 制片质量 配套耗材软件耗材有、软件无耗材有、软件无耗材有、软件无耗材有、软件无耗材有、软件无 制造商pathtch福州泰普湖北泰康医疗达安收购珠海丽拓 比较比较vs国产国产 数据比较解读一：制片原理数据比

21、较解读一：制片原理 过滤膜式过滤膜式沉降式沉降式离心甩片离心甩片过滤过滤&沉降式沉降式 第二代第三代第三代第三代 通过保存液消化裂 解红细胞、粘液。 操作非常方便，快 速 负压抽吸原理，没 有针对性分离细胞， 并且只有细胞，阅 片者需要培训。 通过梯度密度离心去除不需 要血液粘液，富集更多有效 细胞。 操作步骤多，复杂。 重力自然沉降，不改变细胞 形态。 病态细胞沉降快，有效细胞 更多。 制片类似巴氏涂片包括辅助 判断的诊断成分（肿瘤因 子、有机体、细菌、白 细胞）方便阅片 操作步骤 多，复杂。 制片类似 过滤模式 融合过滤模式和 沉降式，制片快 速，制片效果好。 独特双层过滤膜， 即通过第一层膜 除去了粘液杂质 不必要成分，同 时第二层保留了 有效的诊断成分。 甲醇基质保存液甲醇基质保存