蛋白质印迹缓冲液和母液

1、蛋白质印迹缓冲液和母液RIPA缓冲液RIPA缓冲液含有离子去垢剂脱氧胆酸钠作为活性成分，特别适用于破坏核膜提取细胞核内 物质。RIPA缓冲液产生的背景低，但可使激酶变性。它还能破坏蛋白质与蛋白质的相互作 用，因此可能会给免疫沉淀分析和 pull-dow n实验带来一些问题。50 mM Tris HCl ，pH 8.0150 mM NaCI1% NP-400.5%脱氧胆酸钠0.1% SDS10%脱氧胆酸钠母液（5 g脱氧胆酸钠溶于50 mL溶液中）避光保存。NP-40缓冲液20 mM Tris HCl ，pH 8.0137 mM NaCl10%甘油1% NP-402 mM EDTA细胞骨架结合蛋

2、白提取缓冲液10 mM Tris ， pH 7.4100 mM NaCl1 mM EDTA1 mM EGTA1 mM NaF20 mM Na4P=O)2 mM NaVO1% Triton X-10010%甘油0.1% SDS0.5%脱氧胆酸盐可溶蛋白缓冲液20 mM Tris-HCI , pH 7.51 mM EGTA（ CaP+ 螯合剂）制备原钒酸钠所有流程必须在通风橱中进行。1.用双蒸水制备100 mM原钒酸钠溶液2.用HCI将pH调节至9.03.煮沸至无色4.冷却至室温5.再次将pH调节至9.06.再次煮沸至无色7.重复以上循环，直到煮沸并冷却溶液之后的pH保持9.08.用水补至初始体积

3、9.分装之后保存于-20 C10.如果样品变黄，丢弃样品避免煮沸期间体积变化过大，可用盖子稍微盖住容器上方，减少蒸发TBS 10X（浓缩Tris 缓冲盐溶液）1 L溶液：24 g Tris 碱（式量：121.1 g ）88 g NaCl （式量：58.4 g ）溶于900 mL蒸馏水中用12 N HCl 将pH调节至7.6加入蒸馏水至终体积为1 L要制备1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸馏水混合，并再次将pH调节至7.6 o 1X 溶液的最终摩尔浓度为20 mM Tris 和150 mM NaCI 。Tris缓冲液的替代配方同时含有Tris 碱和Tris-HCI 。这可避免大量使用具有潜在危险

4、性的盐酸来中和单独的 Tris 碱。TBS 10X替代配方（浓缩 Tris缓冲盐溶液）1 L溶液：24 g Tris-HCl（式量：157.6 g ）5.6 g Tris 碱（式量：121.1 g ）88 g NaCl （式量：58.4 g ）溶于900 mL蒸馏水中1. 在室温下将溶液pH调节至约7.6。如果溶液过碱，用浓HCI将pH调 节至7.6 ;如果溶液过酸，用浓 NaOH将pH调节至7.6 。2. 加入蒸馏水至终体积为 1 L o3. 要制备1X溶液，将1份10X溶液与9份蒸馏水混合，并再次将pH调节至7.6 o4. 1X 溶液的最终摩尔浓度为 20 mM Tris 和150 mM

5、NaCI 。TBST （Tris 缓冲盐溶液，0.1% Tween 20）1 L溶液：100 mL TBS 10X900 mL蒸馏水1 mL Twee n 20中强膜再生液15 g甘氨酸1 g SDS10 mL Twee n 201. 用超纯水将体积调节至 800 mL o2. 将pH调节至2.2 o3.加蒸馏水至1 L 。高强膜再生液需要在通风橱中进行。100 mL溶液：20 mL SDS 10%12.5 mL Tris HCI ，pH 6.8，0.5 M67.5 mL蒸馏水在通风橱中加入 0.8 mL 3 -巯基乙醇细胞核分离实验方案试剂缓冲液A10 mM HEPES1.5 mM MgCl

6、 210 mM KCl0.5 DTT0.05% NP-40 (或 0.05% Igepal 或 Tergitol ), pH 7.9 要制备250 mL缓冲液A的母液：HEPES 1 M = 238.3 g/L，因止匕 10 mM = 0.59 g/250 mLMgCl2： 1 M = 203.3 g/L，因止匕 1.5 mM = 0.076 g/250 mLKCl: 1 M = 74.5 g/L，因止匕 10 mM = 0.187 g/250 mLDTT: 1 M = 154.2 g/L ，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mL NP-40: 0.05%细胞核分离实验方案试剂缓

7、冲液B5 mM HEPES1.5 mM MgCl20.2 mM EDTA0.5 mM DTT26% 甘油(v/v), pH 7.9HEPES 1 M = 238.3 g/L，因止匕 5 mM = 0.295 g/250 mLMgCI2: 1 M = 203.3 g/L，因此 1.5 mM = 0.076 g/250 mLEDTA 1 M = 372.2 g/L，因此匕 0.2 mM = 0.0186 g/250 mLDTT: 1 M = 154.2 g/L ，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mL26% 甘油(v/v) = 65 mLTBS 0.025% Triton X-100

8、1 L溶液：250 卩 L Triton X -1001 L TBS , pH 7.6 - 7.81.6% H2O2 (过氧化氢)的 TBS溶液400 mL溶液：6.4 mL H 2O (GPR = 30% w/w)393.6 mL TBS , pH 7.6 - 7.8一抗的TBS溶液（含1% BSA）以使用稀释度为1:10的一抗为例。1 mL溶液：100卩L 一抗10 mg BSA900 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8生物素化二抗的TBS 溶液(含 1% BSA)以使用稀释度为1:200的生物素化二抗为例。5卩L生物素化二抗995 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8ABC（抗生物素-生物素复合物）的TBS溶液以每种组分的使用稀释度为 1:100的ABC为例。1 mL溶液：10卩L链霉亲和素10卩L HRP （或AP）-生物素980 卩 L TBS, pH 7.6 - 7.8碳酸氢盐/碳酸盐包被缓冲液（100 mM）3.03 g Na 2CO6.0 g