[医学]第10章甾体激素类药物的分析

1、第十章第十章 甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析 第一节第一节 甾体激素药物的分类、甾体激素药物的分类、 化学结构及理化性质化学结构及理化性质 第二节第二节 鉴别试验与特殊杂质检查鉴别试验与特殊杂质检查 第三节第三节 含量测定含量测定 基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲 c20 c21 ab cd 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 基本骨架基本骨架 分类：分类： 甾体激素甾体激素 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 性激素性激素 雄性激素及蛋白雄性激素及蛋白 同化激素同化激素 孕激素孕激素 雌激素雌激素 一、结构与性质

2、一、结构与性质 1. 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 4 4 3 3 酮酮uvuv、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 c c17 17 醇酮基醇酮基还还 原原 性性 o ho oh och2oh h hh 氢化可的松氢化可的松 o o h hh h o ch3 2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 4 3 4 3 酮酮uvuv、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 c17 c17 羟基羟基可成酯可成酯 丙酸睾酮丙酸睾酮 3. 3. 孕激素孕激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 4 3 4 3 酮酮uvu

3、v、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 c17 c17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应与亚硝基铁氰化钠反应 c o hh h ch3 o 黄体酮黄体酮 4. 4. 雌激素雌激素 主要活性基团主要活性基团性性 质质 a a环为环为3oh 3oh 苯环苯环uvuv、与重氮苯磺酸盐反应、与重氮苯磺酸盐反应 c17 c17 乙炔基乙炔基与与agno3agno3反应反应 c17 c17 羟基羟基可成酯可成酯 c ho hh h oh ch 炔雌醇炔雌醇 第二节第二节 鉴别试验及特殊杂质检查鉴别试验及特殊杂质检查 1. 1. 呈色反应呈色反应 甾体激素类药物甾体激素类药物呈色呈色 h2so4 h3po4 h

4、clo4 hcl 一、鉴别试验一、鉴别试验 （1 1）与强酸的呈色反应）与强酸的呈色反应 甾酮类激素药物甾酮类激素药物 呈色呈色 羰基试剂羰基试剂 c c3 3酮基和酮基和c c20 20 酮基酮基 常用的羰基试剂：常用的羰基试剂： 2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼 （2 2） 官能团的反应官能团的反应 肾上腺皮质肾上腺皮质 激素药物激素药物 呈色呈色 四氮唑盐四氮唑盐 ohoh c c17 17 醇酮基醇酮基 还原还原 性性 具有甲酮基或具有甲酮基或 活泼亚甲基的活泼亚甲基的 甾体激素类药甾体激素类药 物物 呈色呈色 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 间二

5、硝基酚间二硝基酚 芳香醛芳香醛 甲酮基甲酮基 黄体酮黄体酮 蓝紫色蓝紫色 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 其他甾体其他甾体 淡橙色淡橙色 不显色不显色 有机氟有机氟 ff 有机破坏有机破坏 有机氯有机氯 clcl 有机卤素有机卤素 茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈 硝酸硝酸硝酸银硝酸银 agclagcl 呈色呈色 肾上腺肾上腺 皮质激皮质激 素药物素药物 cucu2 2oo橙红色 橙红色 碱性碱性 酒石酸铜酒石酸铜 2. 2. 沉淀反应沉淀反应 agag黑色 黑色 氨制硝酸银氨制硝酸银 含炔基的甾体激素含炔基的甾体激素银盐沉淀银盐沉淀 硝酸银硝酸银 rcch agno3 rccag 3. 3.

6、 制备衍生物测定制备衍生物测定m.p.m.p. 4. 4. 水解产物的反应水解产物的反应 -3- -3-酮酮 240nm240nm 苯环苯环 280nm280nm occc cccccc 5. uv5. uv法法 6. ir6. ir法法 7. tlc7. tlc法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 8. hplc8. hplc法法 1.1.游离磷酸盐游离磷酸盐 地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠 氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠 倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠 氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠 对照品法对照品法 二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查 方法：方法： 对照液

7、对照液 供试液供试液 对对 样样还原还原钼酸铵钼酸铵 a a nm 740740 2. 2. 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 （灵敏度法）（灵敏度法） 甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限= 3.1ng= 3.1ng 丙酮丙酮 5.0%5.0% 内标法内标法 + + 校正因子校正因子 gc法法 3. 3. 雌酮雌酮 原理原理 zimmermann反应反应 碱性碱性kohkoh乙醇乙醇 o cch2 高纯度高纯度 o ho no2 no2 紫红色紫红色 间二硝基苯间二硝基苯 4. 4. 硒硒 来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(seo(seo2 2) )脱氢脱氢 剧毒剧毒 方法方法 + +4

8、4+ +6 6 sese 盐酸羟胺盐酸羟胺氧瓶燃烧氧瓶燃烧 5. 5. 其他甾体其他甾体 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为与标示药物结构不同的甾体化合物都称为 “其他甾体其他甾体” 方法方法 （具有一定分离能力）（具有一定分离能力） （1 1）tlctlc法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法： 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色 （2 2）hplchplc法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法） 判定方法：判定方法： 规定杂质峰数目规定杂质峰数目 规定杂质峰面积规定杂质峰面积 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类 c c17 17

9、 - -醇酮基有醇酮基有强还原性强还原性 1. 1. 原理原理 一、四氮唑比色法一、四氮唑比色法 第三节第三节 含量测定含量测定 oh - 还原还原 有色甲瓒有色甲瓒 四氮唑盐四氮唑盐 醇酮基醇酮基 a a 1717 c 2. 2. 方法方法 对照品法对照品法 4045 暗暗 2525 氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵 对照液对照液 供试液供试液 a ttc 3. 3. 讨论讨论 （1 1）基团对反应速度的影响）基团对反应速度的影响 c c11 11= o = o c c11 11 ohoh c c21 21 ohoh c c21 21- -酯 酯 c c16 16无论何种取代基反应速度 无论何种

10、取代基反应速度 （2 2） 溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响 含水量含水量5%5% 含水含水10%10%a10%a10% 含水含水30%30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 aa 无水乙醇无水乙醇 （3 3） o o2 2与光线的影响与光线的影响 反应过程反应过程 反应产物反应产物 怕光怕光避光、快速避光、快速 o o2 2影响颜色强度影响颜色强度 和稳定性和稳定性 隔绝空气、隔绝空气、 快速、充快速、充n n2 2 （4 4）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（反应应在强碱性（phph13.75）条件下进行）条件下进行 以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结

11、果最佳的结果最佳 加入顺序：加入顺序： 碱试液碱试液四氮唑盐四氮唑盐皮质激素溶液皮质激素溶液 （5 5） 温度与时间温度与时间 t甲瓒分解甲瓒分解% chp 25 4045 bp 30 1h c c3 3酮基酮基 肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白 同化激素、孕激素同化激素、孕激素 1. 1. 原理原理 二、异烟肼比色法二、异烟肼比色法 hcl （缩合）（缩合） 异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基 异烟肼异烟肼 3 3 c conhn oh n 异烟腙（黄色异烟腙（黄色） 2. 2. 方法方法 对照品法对照品法 3 3 chcl 暗暗45 55 55 异烟肼异烟肼挥去乙

12、醇挥去乙醇 对照液对照液 供试液供试液 a 3. 3. 讨论讨论 （1 1）反应速度反应速度 c c3 3= o = o c c17 17= o = o 、 c c20 20= o = o c c11 11= o = o 不反应不反应 反应专属性反应专属性 c c3 3酮基酮基 （2 2）溶剂的选择）溶剂的选择 异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇 无水甲醇无水甲醇 无水乙醇无水乙醇 （3 3）水分、）水分、o o2 2与光线的影响与光线的影响 含水量含水量腙水解腙水解a% 不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 o2与光线无影响与光线无影响 （4 4） 酸、异烟肼的量酸、异烟肼的量 盐酸盐酸 : : 异烟肼异烟肼 = 2 : 1= 2 : 1 样品样品 : : 异烟肼异烟肼 = 1 : 8 = 1 : 8 酸度酸度 异烟肼盐异烟肼盐 酸度酸度 aa 1. 1. 原理原理 三、三、koberkober反应比色法反应比色法 max=465 max=515 桃红桃