从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)

1、-WORD格式-可编辑-从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测 的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。四、试剂及仪器设备4.1试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐 磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD ）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（

2、 YS）、 三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU ）、沙门氏菌属诊断血清、 志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管 4.2仪器设备 恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法5.1标本应为新鲜的或转移至 Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭 子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不 是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。5.2粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓 血样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混 入尿液、水和其他物质。5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采 用肛

3、拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处儿 童约2-3cm）,同一方向轻轻旋转2-3周。以目测能见到粪便为准。插 入Cary-Blair运送培养基。5.4标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h; 如不能立即送检，应放入 Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小 时内送检。六、检验程序七、操作步骤7.1分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管 9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培 养液）。7.2用1个无菌拭子取少量标本（不要使拭子粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在 XLD平板的第一区，接着把拭子

4、 放入SBG增菌液。再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种。 如果是Cary-Blair运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增 菌液与平板。7.3所有培养基均放入36C士 1C培养，SBG的最佳增菌时间是 1618h（建议每天下午45时接种标本，第二天早上810时用增菌 液划平板）。7.4观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。7.4.1 XLD平板可疑菌落观察：志贺菌在 XLD平板上为粉红或无 色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径 1-2mm，而大部 分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规 则，直径2-3mm。大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色

5、的透明、光 滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。（图2）7.4. 2 YS平板可疑菌落观察：74 3麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至 浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落，直径 2-3mm;大多数沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒沙 门菌为无色菌落；而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、混浊、 凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径 3-4mm。7.4.4 SBG肉汤增菌：SBG增菌1618小时后，划线接种 XLE 平板或沙门显色平板，放入 36C士 1C培养1824h。沙门显色平板 可疑菌落观察：典型的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落， 直径 2-

6、3mm。7.4.4建议的初步筛查方案（初步生化特征见表1）:表1 沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征大部分 沙门菌伤寒 沙门菌志贺 氏菌大肠 杆菌枸橼酸杆菌变形 杆菌TSI（斜面）K （红色）K （红色）K （红色）A （黄色）A （黄色）K （红色）TSI（底面）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）A （黄色）TSI(H2S)+ （黑色）小部分-+ （黑色）+ （黑色）TSI（产气）+ （气泡）-+ （气泡）+ （气泡）+ （气泡）MIU（动力）+ （弥漫+ （弥漫-（沿接种+ （弥漫+ （弥漫+ （弥漫生长）生长）线生长）生长）生长）生长）MIU（

7、吲哚）-（黄色-（黄色:-（黄色+ （加试剂+ （加试剂-（黄色圆环）圆环）圆环）变红色）变红色）圆环）MIU（尿素）-（黄色）-（黄色）-（黄色）-（黄色）-（黄色）+ （红色）A :粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD分离一接种TSI和MIUB :粪便（或肛拭子）-SBG或SF增菌一YS分离接种TSI和MIUC:粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌 一-XLD和麦康凯分离接种TSI和MIUD :粪便（或肛拭子）一 SBG或SF增菌一 YS和沙门显色分离一接种TSI和MIUE:粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌 XLD和沙门显色分离接种TSI和MIU7.5生化初步鉴定每个平板挑取35个分离较好的

8、单个可疑菌落，分别接种到三糖 铁（TSI）和动力-吲哚-尿素培养基（MIU ）, 36C 士 1C培养1824h。 沙门菌和志贺菌的生化特征见表 2。7.6系统生化试验沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单，取单个菌落 进行系统生化鉴定（可以使用APE20E或全自动生化鉴定系统进行）。7.7血清学试验7.7.1志贺菌血清学试验7.7.1.1挑取生化反应实筛符合志贺菌的营养琼脂斜面，首先用四种多价血清做玻片凝集反应（4种多价包括：A群1、2型；B群和 D群）。凝集者则用B群多价、D群和A1、A2、血清分别凝集。7.7.1.2若多价血清不凝集，可能为C群或A群的312型，应进 行C群的四种多

9、价和A群另三种多价血清做玻片凝集。7.7.2沙门菌血清学试验7.7.2.1挑取生化反应实筛符合沙门菌的营养琼脂斜面，首先用A-F群O多价血清做玻片凝集反应。7.7.2.2若凝集可按常见O因子检出频率，按照04-010-09-07 08019 02 O11 顺序凝集。7.723 H抗原凝集7.7.3所有凝集阳性的菌落，都要同时用生理盐水做凝集试验，只 有不出现自凝时，才可以报告阳性结果。8结果报告8.1在初步生化鉴定符合后，可以先将可疑菌落进行革兰氏染色， 最后综合生化及血清学结果，可以报告检出（或未检出）沙门菌（或 志贺菌）。8.2对于从业人员体检结果已经纳入检验软件管理的单位，可以直 接在检验软件中录入相应结果。8.3其他单位可以设计专门的报告格式反馈给送检单位或送检科室，检验报告中应至少包括姓名，性别，年龄，体检编号，检测结果。8.4检测结果为阴性，可以报告为未检出肠道沙门菌和志贺菌； 检测结果为阳性，根