苜蓿总黄酮分析论文_优秀论文

1、 苜蓿总黄酮分析论文1器材1.1原料现蕾期紫花苜蓿品种为WL323采自于河北省保定市河北农业大学实验基地。将苜蓿洗净, 40下烘干, 用粉碎机在40目下粉碎成粉末。1.2试剂与仪器乙醇、石油醚、芦丁、实验用水为去离子水。VIS-7220型紫外分光光度计, F2102微型植物粉碎机, SHB-IIIA循环水式多用真空泵, KQ2200DE型数控超声波清洗器, 756PC型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）, 索氏提取器等。2方法2.1标准曲线的绘制准确配置100ml浓度为0.168mg/ml的芦丁储备液。准确吸取芦丁储备液0.00, 1.00, 2.00, 4.00, 6.00, 8.0

2、0, 10.00ml放入7个25ml的容量瓶中, 用30%的乙醇定容到刻度, 在266nm下测定吸光度并绘制标准曲线。标准曲线的线性回归方程为Y=0.18222C+0.05853（C:mg/ml）, 线性相关系数r=0.9988。2.2单因素及正交实验设计见表1。表1正交实验因素水平3结果3.1单因素实验结果与分析3.1.1乙醇浓度的确定称取1g苜蓿粉末3份, 分别加入20ml的60%, 70%, 80%的乙醇, 加热回流提取2h, 溶液冷却后离心5min, 再取0.5ml稀释到10ml在266nm下测吸光度。测定吸光度分别为0.220, 0.444, 0.421。随乙醇浓度的增加, 吸光度亦

3、随之增大。当浓度达到70%时, 黄酮类化合物溶解度最大, 吸光度最高。乙醇浓度再增加, 黄酮类化合物溶解度减小, 同时一些醇溶性杂质、色素、亲脂性强的成分溶出量增加, 这些成分与黄酮类化合物竞争同乙醇-水分子结合, 从而导致黄酮化合物提取率下降。因此确定乙醇浓度为70%。3.1.2提取方法的确定称取1g苜蓿粉末3份, 分别加入20ml70%的乙醇, 分别用加热回流萃取、索氏提取器提取、超声萃取的方法提取2h, 然后取部分溶液离心5min, 再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定吸光度为0.443, 0.499, 0.538, 因此确定提取方法为超声提取法。3.1.3提取时间的确定称取1g苜

4、蓿粉末5份, 分别加入20ml70%的乙醇, 用超声萃取的方法分别提取0.5, 1, 1.5, 2, 2.5h, 然后取部分溶液离心5min, 再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果为0.321, 0.385, 0.531, 0.527, 0.520。可以确定提取时间为1.5h。3.1.4料液比的确定称取1g苜蓿粉末4份, 按110, 120, 130, 140（g/ml）的料液比加入70%的乙醇, 用超声提取的方法提取1.5h, 然后取部分溶液离心5min, 再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果0.512, 0.537, 0.602, 0.497。可以确定料液比为130（g

5、/ml）。3.1.5提取次数的确定称取1g苜蓿粉末4份, 分别加入70%的乙醇, 用超声提取法分别提取1, 2, 3, 4次, 1.5h/次, 然后取部分溶液离心5min, 再取0.5ml稀释到10ml, 测吸光度。测定结果0.525, 0.545, 0539, 0.521。可以确定提取次数为两次。3.2正交实验结果与分析在单因素实验基础上, 采用L9（34）正交实验对提取工艺条件进一步优化。结果见表23。由表2和表3知, 在超声提取下, 各因素对提取结果的影响大小依次为BACD, 其中影响因素A、B表现为极显著, 因素C表现为显著, 因素D对结果的影响不显著, 从节省原料的角度考虑选择60%

6、的乙醇。所以最佳组合为A3B2C1D1。表2正交实验设计及结果表3方差分析3.3苜蓿中黄酮的测定准确称取1.00g苜蓿粉末, 加入30ml60%乙醇, 用超声法提取3次, 1h/次。合并提取液定容到250ml。取1ml样液, 放入25ml容量瓶中, 用30%的乙醇稀释至刻度, 试剂为空白参比。根据测得吸光度, 利用标准曲线计算样品中总黄酮含量为3.81%, 3.75%, 3.69%。4结论经正交实验, 确定了超声法提取苜蓿总黄酮的最佳工艺为：60%乙醇, 301的液固比, 提取3次, 1h/次。测量结果表明苜蓿全草中含有总黄酮3.75%, 苜蓿叶子中含有总黄酮4.85%。【参考文献】1宋立人,

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