医学免疫学（理论）：11B细胞及其介导的体液免疫应答(1)

1、1 B细胞及其介导的体液免疫应答（细胞及其介导的体液免疫应答（1） 免疫系统免疫系统 固有免疫固有免疫 （树突状细胞，巨噬细胞等）（树突状细胞，巨噬细胞等） 适应性免疫适应性免疫 （T, B淋巴细胞）淋巴细胞） 细胞性免疫细胞性免疫 体液免疫体液免疫( (抗体产生抗体产生) ) 3 N Engl J Med, 2008, 358:929-939. AgAb Ag 4 一、B细胞的分化发育 二、B细胞活化的调控机制 1. B 细胞的抗原识别系统 lBCR 复合物 lB 细胞活化共受体复合物（coreceptor complex） l其他辅助分子 2. B 细胞抗原识别后的信号转导 3. B 细胞

2、激活后信号转导的负性调控机制 4. B 细胞活化异常与免疫疾病 主要内容主要内容 掌握掌握 5 掌握掌握BCR特点、细胞表面主要膜分子及其作用特点、细胞表面主要膜分子及其作用 掌握掌握B细胞亚群及其生物学功能细胞亚群及其生物学功能 掌握初次体液免疫应答和再次体液免疫应答的规律掌握初次体液免疫应答和再次体液免疫应答的规律 熟悉熟悉B细胞分化发育过程细胞分化发育过程 要求要求 6 B Lymphocyte F得名于鸟类得名于鸟类法氏囊法氏囊（Bursa of Fabricius）和哺乳）和哺乳 动物动物骨髓骨髓（Bone Marrow）。）。 F人的人的B祖细胞最早出现在妊娠第祖细胞最早出现在妊娠

3、第8周的周的胚肝胚肝中。中。 F妊娠中期以后，妊娠中期以后，B祖细胞在祖细胞在骨髓骨髓中完成其发育。中完成其发育。 简称B细胞。 来自哺乳动物骨髓（bone marrow）淋巴样前体细胞。 成熟B细胞定居于淋巴结和脾脏淋巴小结内。 在外周血中，B细胞约占1015。 产生抗体(免疫球蛋白) ，执行体液免疫功能。 具有抗原递呈功能。 8 Martin Raff and Cooper collaborated to identify precursor (pre)-B cells in murine fetal liver and marrow. Early production of intrac

4、ellular IgM by B-lymphocyte precursors in mouse. Nature. 1976;259:224-226. Immunofluorescent studies of the development of pre-B cells, B lymphocytes and immunoglobulin isotype diversity in humans. Eur J Immunol. 1977;7:804-810. Martin RaffMax Cooper 9 B-cell development in mice and humans has been

5、extensively studied, and the functional rearrangement of the Ig loci is a sine qua non. This occurs via an error-prone process involving the combinatorial rearrangement of the V, D, and J gene segments in the H chain locus and the V and J gene segments in the L chain loci. Susumu Tonegawa was awarde

6、d the Nobel Prize in Physiology or Medicine in 1987 for this discovery. Susumu Tonegawa （利根川進） Nobel Prize winner in 1987 Cell. 1978;15:1-14. 组合多样性 链接多样性 受体编辑 体细胞高频突变 10 11 The discovery of the recombination activating genes 1/2 (RAG-1/2) in the late 1980s by David Baltimore and colleagues provided

7、the mechanistic explanation for the initial steps of DNA strand breakage in both Ig and T-cell receptor rearrangement. Cell. 1989;59:1035-1048. Science. 1990;248:1517-1523. David Baltimore 1975 Recipient of Nobel Prize in Physiology or Medicine for their discoveries concerning the interaction betwee

8、n tumour viruses and the genetic material of the cell BCR and TCR Heavy Chain Gene Family Introns separate exons coding for H chain domains Heavy chain genes， on ; Vn=65, Dn=27 P L V1 P LVn P L V2 D2 D3D1 Dn C C C 3C 2 C C 1C 1C 4C J2J3J5J1J4 E CH1 CH2CH3 CH4 ， C 2 3 J6 V65-D30-J6-C9 Light Chain Gen

9、e Families J 1C 1 E J 2C 2 E J 3C 3 E J 4C 4 E P LV 1 P LV n P LV 2 Lambda light chain genes, on ; n=30 V70100-(J-C)4 P LV 1 P LV n P LV 2J 2J 3J 5C E J 1J 4 Kappa light chain genes, on ; n=40 V85-J5-C 2、免疫球蛋白基因重排 （gene rearrangement） 可变区基因重组的机制 重组信号序列重组信号序列 (recombination signal sequence, RSS) 在在VH

10、和和VL基因基因3端、端、J基因基因5端和端和D基因两端有高度保守的基因两端有高度保守的 核苷酸序列，包括一个核苷酸序列，包括一个7核苷酸组成的核苷酸组成的七聚体七聚体(heptamer)和和 一个一个9核苷酸组成的核苷酸组成的九聚体九聚体(nonamer)，两者间隔，两者间隔12 1或或 23 1个核苷酸，称为个核苷酸，称为RSS 只有间隔只有间隔12个碱基对和间隔个碱基对和间隔23个碱基对的个碱基对的RSS之间发生重之间发生重 组，而间隔长度相等的组，而间隔长度相等的RSS之间不发生重组，这就是之间不发生重组，这就是12/23 碱基对规律碱基对规律(12/23 base pair rule

11、)，也叫做，也叫做1+2圈规律圈规律(1+2 turn rule) u 等位排斥（等位排斥（allelic exclusion）：）： 是指是指B细胞中位于一对染色体上的轻链或重链基因，细胞中位于一对染色体上的轻链或重链基因， 其中只有一条染色体上的基因得到表达，先重排成功的重其中只有一条染色体上的基因得到表达，先重排成功的重 链抑制另一条染色体上重链基因的重排。链抑制另一条染色体上重链基因的重排。 这样对遗传上是杂合子的个体来说，也同样保证了一这样对遗传上是杂合子的个体来说，也同样保证了一 个个B细胞只表达一种轻链和一种重链，也即只表达一种特异细胞只表达一种轻链和一种重链，也即只表达一种特异

12、 抗原受体。抗原受体。 u 同种型排斥（同种型排斥（isotype exclusion）：）： 是指两种轻链是指两种轻链(和和链链)之间的排斥，之间的排斥， 链基因表达链基因表达 成功即抑制成功即抑制链基因的表达。链基因的表达。 等位排斥和同种异型排斥等位排斥和同种异型排斥 组合多样性（combinatorial diversity） 连接多样性（junctional diversity） 受体编辑 （receptor editing） 体细胞高频突变（somatic hypermutation） 抗体多样性产生机制 （1）胚系细胞所携带的遗传信息）胚系细胞所携带的遗传信息 包括多副本的包括多

13、副本的V基因、基因、D基因、基因、J基因及轻链重链基因及轻链重链 等随机配对所形成的多样性等随机配对所形成的多样性 以以IgH 为例，按为例，按50个个VH基因、基因、30个个D基因、基因、6个个 JH基因、基因、40个个V 基因、基因、5个个J 基因计算，固有多基因计算，固有多 样性可达：样性可达：503064051.8106 （2）接头处的变化所产生的多样性）接头处的变化所产生的多样性 （junctional diversity） 这种变化不依赖于抗原，发生在这种变化不依赖于抗原，发生在CDR3，包括重组时编，包括重组时编 码端核苷酸的删除、添加、码端核苷酸的删除、添加、P核苷酸和核苷酸和

14、N区的形成等区的形成等 有些是有些是在原有遗传信息基础上的变化在原有遗传信息基础上的变化，如接头处不准，如接头处不准 确连接所造成的编码框架的变化、确连接所造成的编码框架的变化、D段阅读框架的变化、段阅读框架的变化、 P核苷酸的形成等核苷酸的形成等 有些有些与基因与基因DNA中携带的信息无关中携带的信息无关，如，如N区的形成区的形成 估计估计CDR3的多样性可达的多样性可达1014 （3）受体编辑 （receptor editing） 一些完成基因重排并成功表达BCR（mIgM）的B细 胞识别自身抗原后未被克隆清除，而是发生RAG基 因重新活化，导致轻链VJ再次重排，合成新的轻链 ，替代自身反

15、应性轻链，从而使BCR获得新的特异 性。 若受体编辑不成功，则该细胞凋亡。 （4）体细胞高频突变）体细胞高频突变 （somatic hypermutation） 亲和力成熟过程中的体细胞突变仅发生于重组后的亲和力成熟过程中的体细胞突变仅发生于重组后的 可变区基因及其可变区基因及其3端和端和5端端300个左右碱基以内，而个左右碱基以内，而 不见于恒定区，主要是不见于恒定区，主要是点突变点突变，也可能有插入和缺，也可能有插入和缺 失，相当于失，相当于“微调微调” 突变率比细胞中正常基因高突变率比细胞中正常基因高105倍倍 发生在发生在生发中心生发中心（germinal center） H V(D)

16、J基因片段的组合 V D J 组合多样性 65 27 6 11000 40 0 5 200 30 0 4 120 重链/轻链11000(200+120)3.5106 不准确连接多样性增加100倍 核苷酸插入多样性增加300倍 多样性预期10101011 IGH基因超突变突变频率是其它基因的百万倍以上 抗体分子的多样性 一、一、B细胞的分化发育细胞的分化发育 25 B细胞在中枢免疫器官中的分化发育过程中发生的主要事件：细胞在中枢免疫器官中的分化发育过程中发生的主要事件： 1、功能性B细胞（抗原）受体（B cell receptor，BCR）的 表达； 2、自身免疫耐受的形成。 26 B细胞中枢免

17、疫耐受的形成： 在骨髓中发育的未成熟的B细胞通过克隆清除、 受体编辑和失能等机制形成了对自身抗原的中 枢免疫耐受。 骨髓造血微环境骨髓造血微环境 骨髓基质中的细胞因子骨髓基质中的细胞因子 骨髓基质中的粘附分子骨髓基质中的粘附分子 是是B细胞发育的必要条件细胞发育的必要条件 28 B淋巴淋巴细胞的发育细胞的发育 表达CD79a/CD79b 29 记忆细胞记忆细胞 (Ig基因成熟基因成熟) 浆细胞浆细胞 造血干细胞造血干细胞 前前B细胞细胞 成熟成熟B细胞细胞 B母细胞母细胞 Ig基因处于基因处于 种系状态种系状态 Ig重链基重链基 因重组因重组 膜表面膜表面 Ig阳性阳性 Ig基因趋基因趋 于成

18、熟于成熟 分泌分泌Ig 骨髓骨髓骨髓骨髓骨髓、粘膜骨髓、粘膜外周淋外周淋 巴细胞巴细胞 生发中心生发中心 抗原非依赖期 抗原依赖期 30 B-cell development CLP:common lymphoid progenitor Surrogate L chains (SLCs) is a heterodimer consisting of 5 and VpreB. SLCs with the H chain to form the so-called pre-BCR in murine and human pre-B cells. 体细胞高频突变 抗体类别转换 31 一、B细胞的分化

19、发育 二、B细胞活化的调控机制 1. B 细胞的抗原识别系统 lBCR 复合物 lB 细胞活化共受体复合物（coreceptor complex） l其他辅助分子 2. B 细胞抗原识别后的信号转导 3. B 细胞激活后信号转导的负性调控机制 4. B 细胞活化异常与免疫疾病 主要内容主要内容 掌握掌握 32 二、二、B 细胞的抗原识别系统 （B细胞表面分子）细胞表面分子） 1.BCR 2.Ig(CD79a)/Ig(CD79b) 3.B细胞共受体 4.协同刺激受体 5.其他表面分子 33 CR1 ICAM-1 LFA-1 FcR B B淋巴细胞淋巴细胞 CD45 BCR FcR CR MHC-

20、II CD40 有丝分裂原受体有丝分裂原受体 34 Thomas F. TedderTuckerW. LeBien A graduate student (T.F.T.) with Max Cooper A postdoctoral fellow (T.W.L.) with John Kersey. Charting the B-cell surface 35 Blood, 2008, 112:1570-1580 36 Importantly, ritixumab is a chimeric CD20 mAb, which was the first mAb approved by the F

21、ood and Drug Administration (FDA) for clinical use in cancer therapy (eg, follicular lymphoma). 利妥昔单抗利妥昔单抗(Rituximab) 37 B细胞抗原受体（BCR）是嵌入细胞膜类脂分子中的膜表面免疫 球蛋白(mIg)，乃B细胞的特征性表面标志，也是B细胞特异性识别 不同抗原表位的分子基础。 B细胞抗原受体（BCR）复合物是由识别和结合抗原的膜表面免 疫球蛋白(mIg)和传递抗原刺激信号的Ig(CD79a)/Ig(CD79b)异二 聚体非共价结合组成。通常包括1个mIg分子与 2个Ig/Ig异二

22、聚体。 B B细胞抗原受体复合物细胞抗原受体复合物 38 39 能结合特异性能结合特异性Ag，结合位点是，结合位点是VH和和VL的高变区。的高变区。 mIg的胞内段短仅的胞内段短仅3个氨基酸个氨基酸（KVK/赖缬赖赖缬赖），），不能转导不能转导 抗原刺激信号。抗原刺激信号。 其其IgH链分为亲水或疏水性链分为亲水或疏水性COOH-末端，有分泌型和膜末端，有分泌型和膜 结合型；成熟结合型；成熟B细胞的细胞的BCR主要是主要是mIgM和和mIgD。 mIg特点特点 40 41 Ig(CD79a)/Ig(CD79b) 结构特点：结构特点： I型型跨膜蛋白跨膜蛋白 两者以二硫键连接为两者以二硫键连接为

23、异源二聚体异源二聚体 胞内均有胞内均有ITAM 若表达缺陷，也不能诱导若表达缺陷，也不能诱导mIg的表达的表达 功能：功能： 1.转导抗原与转导抗原与BCR结合所产生的信号结合所产生的信号; 2.参与参与Ig从胞内向胞膜的转运。从胞内向胞膜的转运。 42 B细胞共受体复合物由B细胞表面CD19/CD21/CD81非共价相联 形成。主要作用是增强BCR与抗原结合的稳定性并与 CD79a/CD79b共同传递B细胞活化的第一信号。 CD19是所有B细胞共有的表面标志，参与启动信号转导、生发中 心生成和抗体亲和力成熟。 CD21主要表达于成熟B 细胞，为C3d受体；也是B细胞上的EB 病毒受体。 CD

24、81和B淋巴细胞的增殖相关。 B细胞共受体细胞共受体 43 44 CD19作为作为B细胞的标志进行分析和细胞的标志进行分析和B细胞分选细胞分选 45 1.CD40：表达于成熟B细胞,配体为CD40L表达于活化的T细胞。 2. CD80和CD86：静息B细胞不表达或低表达,活化B细胞表达增 强。相应受体是T细胞表面的CD28分子,二者结合相互作用可产 生协同剌激信号(T细胞活化第二信号),使T细胞激活 。 3.其他黏附分子：ICAM-1（CD54）、LFA-1(CD11/CD18)，与 相应配体结合后参与细胞间的接触，具有协调刺激作用。 共刺激分子共刺激分子 其他辅助分子其他辅助分子 l CD4

25、5 CD45磷酸酶通过作用于Src PTK C端调节区505位磷酸化 的酪氨酸残基脱磷酸化，解除Src PTK的抑制状态，调控 Src PTK 活性 l CD40 CD40配体表达于活化T细胞表面,CD40-CD40L相互作用 给予B细胞活化第二信号，对B细胞分化和抗体产生以及 类别转换有重要作用 47 1.CD20：在B细胞的增殖分化中起调节作用。是B细胞特异 性标志，是治疗性单抗识别的靶分子。 2.CD22：特异性表达于B细胞，其胞内段含有ITIM模体，是 B细胞的抑制性受体，能负调节CD19/CD21/CD81共受体。 其他表面分子其他表面分子 48 3.CD32(FcR) ：FcRB亚

26、型能负反馈调节B细胞 活化和抗体分泌。 4.丝裂原的膜结合分子：美洲商陆(PWM)对T细胞和B 细胞均有致有丝分裂作用；脂多糖(LPS)可与B细胞上 的LPS受体结合，刺激B细胞的活化、增殖和分化，是 常用的小鼠B细胞丝裂原。 49 5.补体受体（CR）：多数B细胞表面表达CR1和CR2(即CD35 和CD21)。 6.细胞因子受体：B细胞表面表达IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-5R、 IL-6R、IL-7R及IFN-R等多种细胞因子受体。细胞因子通过与 B细胞表面相应受体结合而参与或调节B细胞活化、增殖和分化。 7. MHC：B细胞可表达MHC-类和MHC-类分子。MHC- 类分子

27、可与Th细胞表面CD4结合，增强B细胞与Th细胞间的黏 附作用，并参与抗原递呈和淋巴细胞激活。 51 B B细胞活化的双信号细胞活化的双信号 IFN-g , IL-4, IL-5 第第2 2信号信号 Th CD40 CD40L MHC-II/抗原肽抗原肽 / TCR CD4 B 第第1 1信号信号 活性封闭活性封闭 没有没有Th 细胞的帮助细胞的帮助 第第1 1信号信号 B CD40 CD40LCD40 CD40L 52 ICAM-1LFA-1 B7CD28 MHC I类分子TCR CD40gp39 ICAM-1LFA-1 CD4 CD3 Slg Ig Ig 细胞因子 活化信号 活化信号 B细

28、胞活化 抗原加工、提呈 (CD40L) B细胞 T细胞 活化信号 活化信号 Th活化 Iga Igb B细胞通过表面分子与细胞通过表面分子与Th细胞的相互作用细胞的相互作用 MHC II类分子 53 一、B细胞的分化发育 二、B细胞活化的调控机制 1. B 细胞的抗原识别系统 lBCR 复合物 lB 细胞活化共受体复合物（coreceptor complex） l其他辅助分子 2. B 细胞抗原识别后的信号转导 3. B 细胞激活后信号转导的负性调控机制 4. B 细胞活化异常与免疫疾病 主要内容主要内容 掌握掌握 lB 细胞的抗原识别系统细胞的抗原识别系统 lB 细胞抗原识别后的信号转导细胞

29、抗原识别后的信号转导 lB 细胞激活后信号转导的负性调控机制细胞激活后信号转导的负性调控机制 lB 细胞活化异常与免疫疾病细胞活化异常与免疫疾病 三、三、B 细胞活化的调控机制细胞活化的调控机制 Trends in Immunology 31 (2010) 205211 200 to 500 Angstroms TD-Ag TI-Ag 蛋白质抗原蛋白质抗原 多糖、糖脂、核酸抗原多糖、糖脂、核酸抗原 B 细胞激活后的胞内信细胞激活后的胞内信 号转导号转导: 磷脂酰肌醇途磷脂酰肌醇途 径、径、PI3K 激活激活PKC 途途 径以及径以及Ras- MAPK 途途 径径 参与参与B细胞激活后跨膜细胞激

30、活后跨膜 信号转导的信号转导的Src PTK家家 族成员主要包括族成员主要包括LYN、 FYN、BLK、LCK 抗原结合导致受体交抗原结合导致受体交 联成簇，启动联成簇，启动B细胞细胞 的跨膜转导的跨膜转导 B 细胞抗原识别后的信号转导细胞抗原识别后的信号转导 l 抗原结合导致受体交联成簇，启动抗原结合导致受体交联成簇，启动B细胞的跨膜转导细胞的跨膜转导 l 参与参与B细胞激活后跨膜信号转导的细胞激活后跨膜信号转导的Src PTK家族成员家族成员LYN、 FYN、BLK、LCK l B 细胞激活后的胞内信号转导途径细胞激活后的胞内信号转导途径 磷脂酰肌醇途径、磷脂酰肌醇途径、PI3K 激活激活

31、PKC 途径以及途径以及Ras- MAPK 途径途径 l CD22 分子介导的负性调控分子介导的负性调控 l Fc RIIb 受体介导的负性调控受体介导的负性调控 l B 10 B 细胞介导的负性调控细胞介导的负性调控 四、四、B B 细胞激活后信号转导的负性调控机制细胞激活后信号转导的负性调控机制 CD22 胞质区胞质区ITIM，可结合，可结合 带有带有SH2结构域的蛋结构域的蛋 白酪氨酸磷酸酶白酪氨酸磷酸酶SHP- 1；SHP-1能够作用于能够作用于 邻近的信号转导复合邻近的信号转导复合 物上的物上的pY脱磷酸化，脱磷酸化， 是是B细胞活化中的抑细胞活化中的抑 制性受体制性受体 BCR B

32、CR FcRII-B FcRII-B ITIM ITIM 阻断 B 细胞活化信号转导 阻断 B 细胞活化信号转导 抗链抗体和抗原抗体复合物 通过交联BCR和FcRII-B 抑制B细胞增殖 抗 BCR (mIgM) 的IgG 抗体 抗原抗体复合物 抗抗BCR独特型抗体（抗抗体，独特型抗体（抗抗体，IgG）或抗原抗体复合物通过）或抗原抗体复合物通过交联交联BCR 和和Fc RII-B分子抑制分子抑制B细胞增殖；细胞增殖； 产生抗抗体的前提必须是产生抗抗体的前提必须是BCR或相应抗体分子大量出现（超过免疫或相应抗体分子大量出现（超过免疫 系统感知阈值、以特定独特型为表位的自身抗原，产生相应的抗系统感

33、知阈值、以特定独特型为表位的自身抗原，产生相应的抗BCR 抗体），这只能是抗体），这只能是B细胞充分激活的结果细胞充分激活的结果 B细胞表面的细胞表面的Fc RII II-B 62 五、五、B细胞亚群及功能细胞亚群及功能 1.B-1细胞 2.B-2细胞 3.B-1细胞与B-2细胞的异同 4.其它B细胞亚群（自学） 63 分布分布: 分布于胸腔、腹腔和肠壁分布于胸腔、腹腔和肠壁固有层固有层中中 表面标志表面标志: CD5+、mIgM+、 抗原识别谱：抗原识别谱：针对针对TI抗原抗原 应答特点应答特点: 不需要不需要Th细胞辅助，细胞辅助，产生产生IgM类低亲和力类低亲和力 抗体、不发生抗体类别转

34、换、无免疫记忆抗体、不发生抗体类别转换、无免疫记忆 B-1细胞亚群细胞亚群 根据是否表达CD5把B细胞分为B-1和B-2两群细胞 64 分布分布: : 体内出现较晚，定位于淋巴器官体内出现较晚，定位于淋巴器官 表面标志表面标志: : CD5CD5- -、mIgMmIgM+ +、 mIgDmIgD+ + 抗原识别谱：抗原识别谱：广，主要识别广，主要识别TDTD抗原抗原 应答特点应答特点: : 1) 1)直接识别抗原决定基，需要直接识别抗原决定基，需要ThTh的辅助。的辅助。 2)2)可产生可产生高亲和力高亲和力抗体（抗体（IgGIgG、IgAIgA、IgE)IgE) 3) 3)有有抗体类型转换、

35、免疫记忆和再次应答抗体类型转换、免疫记忆和再次应答 B-2细胞亚群细胞亚群 65 TI与与TD抗原抗原 66 67 性质性质B-1细胞细胞B-2细胞细胞 CD5 CD23 产生时间产生时间胎儿期胎儿期出生后出生后 更新方式更新方式自我更新自我更新骨髓产生骨髓产生 自发性自发性Ig产生产生高高低低 分泌的分泌的Ig类型类型IgM为主为主IgG为主为主 体细胞突变频率体细胞突变频率低低/无无高高 T细胞依赖细胞依赖 亲和力成熟亲和力成熟 免疫记忆免疫记忆 少少/无无 有有 B-1细胞与细胞与B-2细胞的异同细胞的异同 68 B淋巴细胞的功能淋巴细胞的功能 产生抗体产生抗体 提呈抗原提呈抗原 免疫调

36、节免疫调节 69 Multifunctional attributes of B cells Blood, 2008, 112:1570-1580. 70 1. 产生抗体介导体液免疫应答 介导特异性体液免疫应答, 中和、调理、ADCC、参与补 体的溶细胞或溶菌作用、参与I型超敏反应。 2. 提呈可溶性抗原 B细胞通过BCR结合可溶性抗原，经加工后以抗原肽- MHC分子复合物形式提呈给T细胞。 3. 免疫调节 B细胞通过与其他细胞接触及产生细胞因子参与免疫调节、 炎症反应及造血过程。 B细胞的主要生物学功能细胞的主要生物学功能 宿主抗金黄色葡萄球菌感染的免疫宿主抗金黄色葡萄球菌感染的免疫 防御机制？防御机制？ （一）中和作用（一）中和作用 中和毒素（细菌外毒素、昆虫和蛇毒素） 中和抗体 中和病原体 高亲和力IgG 与病毒、细菌表面蛋白结合，阻止入侵细胞。 （二）免疫调理作用（