细菌真菌放线菌培养基配方

1、。一细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基, 肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和nacl。肉膏蛋白胨培养基1.药品比例：牛肉膏3g，蛋白胨10g，nacl5g，琼脂1520g，水1000ml，ph7.47.62.实验器材：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/l naoh、lmol/l hcl、kno3、nacl、k2hpo43h2o、mgso47h2o、feso47h2o、4.5ml无菌水6管，10%酚液，49.5ml无菌水(带玻璃珠)1瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、ph试纸

2、、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台.3.配置方法（1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。（3）调ph：检测培养基的ph，若ph偏酸，可滴加lmol/l naoh，边加边搅拌，并随时用ph试纸检测，直至达到

3、所需ph范围。若偏碱，则用lmol/l hcl进行调节。ph的调节通常放在加琼脂之前。应注意ph值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。（4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般使用的培养基，这步可省略。（5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。（6）加棉塞：试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉

4、塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。（7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以5支或7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。（8）灭菌：将上述培养基于121.3湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应故人冰箱内暂存。（9）摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根

5、长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总长的1/2。（10）无菌检查：将灭菌的培养基放入37温箱中培养2448h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。二.放线菌培养基: 高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基, 培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，kno3作为氮源，k2hp04、mgso4和fes04作为无机盐等高氏合成一号培养基1.药品比例：可溶性淀粉 20gnaci 05gkno3 1gk2 hpo4 3h2 o 05gmgso47 h2 o 05gfeso4 7 h2 o 001g琼脂 1525g水 1000mlph 7.47.62.实验器材：试管，锥形瓶

6、，烧杯，量筒，玻璃棒，培养基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器，ph试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布3.配制方法：（1）、称量和溶化 按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分feso4 7 h2 o可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。 （2）、调ph 用试纸测培养基的原始ph,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/lnaoh,边滴边搅拌，

7、并随时用ph试纸测其ph,直至ph达7.6。反之，用1mol/lhci进行调节。（3）、分装和加塞 将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。（4）、包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。（5）、灭菌 将上述培养基以1210c,20min,0.103mpa高压蒸汽灭菌。（6）、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷却至500c左右，将试管口端搁在玻璃棒上。斜面的斜度要适当，使斜面的长度约为管长 1/3。（7）、无菌检查 将灭菌培养基放入370c的培养箱中培养2428h，以检查灭菌是否彻底。三真菌培养基：

8、 马铃薯糖琼脂培养基（马丁氏培养基）马铃薯糖琼脂培养基1. 药品比例k2hpo4 1g，mgso47h2o 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖l0g，琼脂1520g，水1000ml，自然ph此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液33ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液03ml。（孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的）2.实验器材kh2po4，mgso47h2o，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红，链霉素；试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅3.配制方法（1）称量和溶解

9、：先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需的水中。待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的水溶液，在1000ml培养液中加入以上孟加拉红溶液3.3ml，混匀后，加入琼脂加热融化，方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。（2）分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培养基配制。（3）链霉素的加入：链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化后待温度降至45左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液(配好的链霉素溶液保存于-20)，在100ml培养基中加1%链霉素0.3ml ，使每毫升培养基中合链霉素30g。四灭菌采用高压蒸气灭菌法进行灭菌，步骤如下：1首先将内层锅取出，再

10、向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。2放回内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。3加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。4用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1mpa，12

11、1.5，20min灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。5灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。6将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入37温箱培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。五土壤微生物的分离1取土壤：取表层以下510cm处的土样，放入无

12、菌的袋中备用，或放在4冰箱中暂存。2制备稀释液(要无菌操作)(1)制备土壤悬液：称土样0.5g，迅速倒入带玻璃珠的49.5ml无菌水瓶中(玻璃珠用量以充满瓶底力最好)，振荡510min，使土样充分打散，即成为10-2的土壤悬液。(2)稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5ml，放入4.5ml无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-310-8的稀释液。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。六混菌法测定菌落数的方法(1)细菌：取10-7、10-6两管稀释液各1ml，

13、分别接人相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。然后取冷却至50的牛肉膏琼脂培养基，分别倒入以上培养皿中(装量以铺满皿底高1.52mm为宜)，迅速轻轻摇动平皿，使菌液与培养基充分混匀，但不沾湿皿的边缘，待琼脂凝固即成细菌平板。倒平板时要注意无菌操作。（2）放线菌：取10-5、10-4两管稀释液，在每管中加入10%酚液56滴，摇匀，静置片刻，然后分别从两管中吸出1ml加入相应标号的平皿中，选用高氏1号培养基，用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成放线菌平板。（3）真菌：取10-2、10-3两管稀释各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。在融化的马铃薯培养基中，每100ml加入灭

14、菌的乳酸1ml，轻轻摇匀，然后用与细菌相同的方法倒入平皿中，便可制成真菌的平板。4培养：将接种好的细菌、放线菌、真菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于2830中恒温培养，细菌培养12d，放线菌培养57d，真菌培养35d。观察生长的菌落，用于进一步纯化分离或直接转接斜面。七.（一） 平板制作及划线分离方法。1倒平板：按无菌操作要求，在火焰旁操作。2划线分离：使用接种环，从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种只沾取少量菌样，在相应培养基平板中划线分离，划线的方法多样，目的是获得单个菌落。3培养：方法同“土壤稀释分离”。（二）斜面接种和穿刺接种1斜面接种（1）取新鲜固体斜面培养基，分别做好标记（写上菌名、接种日

15、期、接种人等），然后用无菌操作方法，把待接菌种接入以上新鲜培养基斜面上。（2）接种的方法是，用接种环沾取少量待接菌种，然后在新鲜斜面上“之”字形划线，方向是从下部开始，一直划至上部（图34a）。注意划线要轻，不可把培养基划破。（3）接种后30 恒温培养，细菌培养48h，放线菌、霉菌培养至孢子成熟方可取出保存。2穿刺接种（1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨柱状培养基，做好标记（写上菌名）、接种日期，接种人等）。（2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。（3）接种后30恒温培养， 24h后观察，比较两

16、种菌的生长结果。八、注意事项1称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。2调ph时要小心操作，避免回调。3不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。4一般土壤中，细菌最多，放线菌及真菌次之，而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中，故从土壤中分离细菌时，要取较高的稀释度，否则菌落连成一片不能计数。5在土壤稀释分离操作中，每稀释10倍，最好更换一次移液管，使计数准确。6放线菌的培养时间较长，故制平板的培养基用量可适当增多。九实验记录l记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。2检查培养基灭菌是否彻底，记录无菌检查结果3记录土壤稀释分离结果，并计算出每克土壤中的细菌、放线菌和

17、霉菌的数量。计算方法：选择长出菌落数30300之间的培养皿进行计数，按以下公式：总菌数/g=同一稀释度几次重复的菌落平均数稀释倍数4分别记录平板划线、斜面接种的结果，并自我评价。*小贴士：读书技巧有人问我，同样在大学时代，你是怎么读了那么多书籍呢？其实这个问题，虽然有些惭愧，不过我确实有些话要说：有一门学问叫“阅读学”，简单明了，如名字所说，就是教人怎么读书的我也把我自己的一些读书经验加进去，都是些非常实用的东西，希望这篇文章对大学生们有益吧一读书速度：如果你读书时眼睛是一个字一个字盯着看，那是显然读不下去的，只要一小会你的读书欲望就消失得无影无踪。你读书时的速度要快，一眼能看一句话，甚至一行

18、字，乃至所谓的“一目十行”。不用惊讶，一目十行似地看书并不意味着没有效率，相反看书过慢者才是真正的效率低下者。有个美国人出了本建立阅读学的书，叫这种快速浏览“检视阅读”，极力称是很有效的读书方法，我深深认同。我曾经用了四个小时时间读完陆遥的平凡的世界四部，事后与一个看了十几天的同学比较，我记忆的情节和对书的理解远比另一位同学好，而他是所谓非常仔细阅读的那种。当然，检视阅读是必须学会，练会的技巧，但不代表不需要详细阅读。当在读书时遇到特别好的段落或特别必要的段落，可以把速度放到最慢，反复地读，详细地读，甚至如果有必要就把它记忆在头脑之中，对于其他段落采取检视阅读的手段。这里面还有一个问题，在读书

19、中遇到不懂的地方怎么办？答案是你把它略过去不用管它，因为这样的地方通常是学科内比较困难的东西，对于你一个外行来说不是很必要掌握。当然也存在另一种情况，就是你不懂的这个地方很重要，这时你只能放慢整体速度对不懂的部分进行详细阅读了。那么有人还会质疑，这样读书，不是把书糟蹋了吗？其实，一本书中有30%的精华就不错了，或者我说，你能理解30%就可以了，这30%约等于80%。当你快速阅读的时候，你脑子中总会留下一些印象，那些印象性的东西，就是将深刻印在你脑子中的知识。因为，只有你感兴趣的东西，你的思维才会接受，才会理解，而这部分东西也常常就是该书籍的精华。不管你读得怎样快，你脑子中一直存在的疑问，也会在

20、读到某个时候迎刃而解这与速度无关，与书中是否有你需要的东西有关。如果有的话，你读得再快，答案也是跑不掉的，这就是关键所在。其实，我想大家肯定听过有所谓的快速阅读培训班或培训书籍的事，声称3分钟能读一本几百页的书。其实这说法部分是真的，他教你的方法就是快速检视阅读他的方法是让你把一页书当成图形输入进你脑子中，我曾经多次尝试，的确有时候可以做到，不过需要超常规地注意力，很费心神，不太实际应用。但这说法部分是假的，所谓3分钟读完夸大其辞，是有意的虚假宣传。但不管怎么样，有这么个事在，更证实了人的阅读速度是可以很快的，只是平时我们想不到。ps：读得慢，读得“仔细”，很多时候等同于“读不下去”。那么快速

21、读书，即使你理解得少又怎么样呢？你说呢？不过，量变终将引起质变，所以快速阅读习惯的养成，是个必须!二读书顺序：很多同学一明白读书的好处之后，就拿过来大部头的书开始读，结果没过一会就读不下去了。这很正常，如果每个人都能一下子看下去就都成了超人了，这种方法显然不智。那么究竟该如何读书呢？这需要一种策略，简单说就是选好顺序。一般来说，读某一学科书时最好先看这一学科的发展史，了解历史上这个学科是什么样子的。这可是大有好处的，因为每个学科的发展，都是从简单到复杂，从谬误到真理，从一个流派到众多流派，而这个学科的学科史恰恰表现的就是这些。而读史是很轻松的，在舒畅的氛围中读完学科的发展史，就基本上对学科有了理性的认识了。这时根据你的兴趣所在或逻辑顺序，你就可以进入到这个学科中了。读完学科史之后，就要选取理论书籍了，作为一个该学科的初学者，要选取该学科初级理论书籍很多时候你有这个初级水平就可以了，除非你想深入。现在新出的书有很多很人性化的，他在书中穿插了很多故事，一边讲故事一边讲理论，读者很容易接受（本书就想达到这个目的），而且这些讲的理论都是实用性很