大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价

1、大鼠乙酸型胃溃疡模型的建立与评价 建立胃溃疡动物模型是研究胃溃疡发生机制和评价抗溃疡 药物的有效方法之一。大鼠形体适中，繁殖快，成本较低，可用 于大样本实验，因此常选用大鼠（ Wistar或SD建立胃溃疡模 型。其造模方式较多，主要有水浸应激性大鼠胃溃疡模型 1 、 幽门结扎型大鼠胃溃疡模型 2 、乙醇致大鼠胃溃疡模型 3 、非 甾体抗炎药所致胃溃疡模型 4-6 、乙酸致慢性胃溃疡模型 7 。 其中乙酸致慢性胃溃疡模型的建立简单， 模型成功率较高， 不易 恢复等特点。目前大鼠胃溃疡模型中以冰乙酸性模型在实验研究 中应用较广 8 ，研究表明此模型方法可靠，重复性好，溃疡深 而大，与人类的慢性胃溃

2、疡极为相似， 其自然愈合需要 60d 左右 9 。建立慢性胃溃疡动物模型有以下 3种：乙酸注射法、乙酸 滤纸贴敷法、 乙酸直接灼烧法 10 。其中因乙酸注射法造模型的 操作部位比较麻烦， 不易造模型； 乙酸滤纸贴敷法造模要精准直 径的大小和滤纸贴敷的时间的长短不同而模型的程度不同； 乙酸 直接灼烧法造模时乙酸的量越多， 造成的损伤最越重， 有的引起 肌层及浆膜层的损伤， 甚至有坏死组织等。 以上 3 种模型都有各 自的不足点。 应此目前还是没有建立乙酸型动物模型的标准和评 价指标。本试验将建立 3种乙酸型大鼠胃溃疡模型并进行评价。 1 仪器与材料 11实验动物清洁级 Wistar大鼠，体重（2

3、00土 2） g，雄性， 购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物许可证号 GB14922-2001。 12 仪器紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任 公司）；酶标仪（帝肯上海贸易 XX公司）；TG16-WS高速台式 离心机（长沙湘仪离心机仪器 XX公司）；HH-W6 0（数显三用恒 温水箱（江苏省金坛市荣华仪器制造 XX公司）。 13材料冰乙酸（天津市天力化学试剂 XX公司）；甲醛（天 津市天力化学试剂 XX公司）；水合氯醛（批号 20150330,天津 市东丽区新中村科技园区）； JP+2MDA （批号：20160114）、SOD（批号：20160112）、 NO （批号：20

4、160115）和EGF（批号：20160231）试剂盒，南京 建成生物工程研究所。 JP 2 方法 21 建立 3 种乙酸型模型将 Wistar 大鼠 72 只雄性，体重为 （20020）g，将大鼠随机分为正常组、乙酸注射模型组、乙酸 滤纸贴敷模型组和乙酸直接灼烧模型组，每组 12 只。正常组自 由饮食进水， 14d 后取材。利用乙酸注射、乙酸滤纸贴敷和乙酸 直接灼烧法分别制备乙酸型胃溃疡大鼠模型：大鼠禁食不禁水 24h，用10%水合氯醛（35mL/kg）腹腔注射麻醉，剑突下 05cm 纵向切开腹壁约2cm,找出胃，轻移出腹腔。乙酸注射法，用 微量注射器在胃前壁胃窦部浆膜下近肌层处注入一定剂量

5、 （ 005、 003、001mL的冰乙酸。乙酸滤纸贴敷法，用直径为5mm的圆 滤纸片浸适量的冰乙酸后，在胃窦部浆膜层贴敷30SX2次。 乙酸直接灼烧法，将内径 5mm长30mmfi勺玻璃管垂直置于胃体 浆膜层，管内加入冰乙酸 02mL， 15min 后用棉签蘸出冰乙酸。以 上操作完毕，将胃轻轻送回腹腔，后覆盖网膜，缝合腹膜，腹壁 各层组织。 14d后，大鼠禁食1h后经腹腔注射10%水合氯醛1mL深度 麻醉，剖腹，腹主动脉取血 35mL水浴3637C保温30min 后，3500r/min，离心10min，取上清液备用，结扎幽门和贲门， 从幽门处注入4%勺甲醛溶液10mL取胃，置甲醛溶液中固定

6、15min 后，切开胃，擦去胃内容物，观察溃疡点状，比较各组大 鼠胃溃疡指数及溃疡抑制率， 用数码相机在固定光源和固定位置 拍摄，制成图像，采用图像分析软件 image 计算其溃疡面积。 22 一般情况的观察实验过程中每天观察各组大鼠的精神状 态、活动、饮食、皮毛、爽便、体重等情况并予以记录。 23 测定指标取血清严格按照试剂盒的说明用硫代巴比妥酸 法测定丙二醛（MDA;用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶 （SOD ；用硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO。 24统计学处理采用SAS 612软件，数据以（xs）表示， 进行数据分析组间比较进行， P 与正常组比较乙酸注射组 的溃疡面积不明显， 而乙酸

7、滤纸贴敷组和乙酸直接灼烧组的溃疡 面积明显， 而且乙酸滤纸贴敷法导致的胃溃疡模型让大鼠的脏器 出现粘连， 造成的脾脏创伤比较大， 乙酸直接灼烧组发生的溃疡 呈圆形或椭圆形，中心凹陷，表面粗糙，粘膜缺损，周边充血水 肿。乙酸直接灼烧组发生的溃疡深而大，是理想的动物模型。 胃溃疡是攻击因子与防御因子失衡所致， 因此抗溃疡药物的 评价通常检测 MDA SOD NO这些指标涵盖了组织，分子及基 因水平。MDA是攻击因子，它的含量放映组织受自由基攻击的损 伤程度，SOD NO和EGF是保护因子，其活力反应机体清除氧自 由基的能力。乙酸直接灼烧组的 MDA含量比较其高，并其SOD舌 力低，模型组NO含量和EGF的浓度普遍高于正常组，其原因待 进一步探讨。 综上所述，乙酸直接灼烧导致的胃