全国大型医疗设备考试--生化分析仪知识要点

1、全国医用设备资格考试全自动生化分析仪技师专业考试大纲（2008年版）中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部人 才 交 流 服 务 中 心说 明为更好地贯彻落实大型医用设备管理办法（卫规财发2004474号文）精神，中华医学会和卫生部人才交流服务中心自2004年开始分别组织对全国医用设备使用人员进行培训和专业技术知识统一考试。为使应试者了解考试范围，卫生部人才交流服务中心组织有关专家编写了全国医用设备资格考试大纲，作为应试者备考的依据。全国医用设备资格考试全自动生化分析仪技师专业考试大纲第一单元 全自动生化分析仪的相关基本概念1.1 全自动生化分析仪就是把生化分析中的取样，加试剂，去干扰物，混合

2、，保温反应，检测，结果计算，显示，清洗等步骤自动化的仪器。1.2变异系数变异系数又称“标准差率”，是衡量资料中各观测值变异程度的另一个统计量。当进行两个或多个资料变异程度的比较时，如果度量单位与平均数相同，可以直接利用标准差来比较。如果单位和（或）平均数不同时，比较其变异程度就不能采用标准差，而需采用标准差与平均数的比值（相对值）来比较。 标准差与平均数的比值称为变异系数，记为c.v。变异系数可以消除单位和（或）平均数不同对两个或多个资料变异程度比较的影响。1.3系数k值称为吸收系数或消光系数，它与多种因数有关，包括入射光波长，温度，溶剂性质，吸收物质的性质等朗伯-比耳定律：当用一束单色光照射

3、吸收物质的溶液时，其吸光度与溶液浓度和透光液层厚度的乘积成正比。a=kbc a为吸光度（透光度的负对数，透过光强度与入射光强度之比为透光度） c为溶液浓度，b为厚度1.4 摩尔消光系数（e）摩尔消光系数也称摩尔吸光系数(molarextinctioncoefficient),是指溶液浓度为1摩尔/升时透光层厚度为1cm的吸光系数,表示。1.5 准确度单次测量值与真值的接近程度，用不准确度恒量，受正确度和精密度影响1.6正确度（真实度）多次测量结果的均值和真值的接近程度，表示测量结果中系统误差大小的程度，用不正确度（偏倚表示）1.7 精密度在一定测量条件下，对某一量的多次测量中各观测值间的接近程

4、度。（偶然误差）1.8 测量不确定度表示测量结果的分散性（离散趋势），包括标准不确定度（标准差），扩展不确定度（置信区间）1.9偏倚均值与真值的差。称为误差1.10 结果比对不同的检测系统检测同一项目的检测结果按统计学原理进行比较比对程序：样本数量，样本种类，浓度范围要高低有，测定方式 比对方法参考nccl-s ep -9a进行，采用40个病人，每天8份，共做5天每天做8份血清，共40份，样本浓度随机分布，应高中低浓度都要，1-2-3-4-5-6-7-8，8-7-6-5-4-3-2-1测定 选用一个系统作为参考，其它向它靠拢1.11 溯源性我们的检验结果能通过一条不间断的比较链,使测量结果或测

5、量标准的值能够与规定的参考标准,通常是与国家测量标准或国际测量标准联系起来的特性，比较链中的每一个环节有给定的不确定度不能溯源的情况：有约定的测量程序（但不是一级参考测量程序）有标准物，如糖化血红蛋白有约定的测量程序但无标准物，如高密度胆固醇无测量程序但有标准物，如激素，肿瘤标志物无程序无标准物，如肿瘤标志物检验医学溯源性联合委员会jctlm1.12标准品(参考物质)一类充分均匀，并有一个或多个确定值的物质，用以校准仪器，评价测量方法 分为一级标准品，二级标准品，校准品。前两级是国家认可，有证书1.13一级标准品（一级参考物质）由一级参考方法（选定性方法）进行定值，用来校准二级参考方法的标准物

6、ifcc 原级参考方法1.14二级标准品（二级参考物质）由二级参考方法定值，用来校准常规标准方法(厂家的方法)的标准物arml 次级参考方法1.15决定性方法（一级参考方法）1.16参考方法（二级参考方法）1.17实验室常规方法应有实用性（微量快速，便于操作，应用安全，费用少）和可靠性（精密度和准确度，较大检测能力）两方面要求是厂家方法和实验室常规方法1.18校准物校准物由常规标准方法定值（厂家方法），用于用户常规实验校准，此物必须跟踪国家或国际标准品，必须有溯源性校准：在一定条件下的操作以确定检测仪器和系统的测定值和相应标准所认识量之间的关系。校准后应用校准品回测做校准验证。1.19质控物人

7、血清基质，分布均匀；无传染性；添加剂和抑菌剂少；瓶间变异少；冻干品复溶后稳定时间长；效期长1.20最佳条件下的变异（ocv）在最佳条件下，反复测定同一质控物得出的变异，是最佳精密度1.21常规条件下的变异（rcv）常规条件下测定质控物的变异，用于室内质量控制1.22质量控制（qc）室内质控和室间质评两个内容1.23室内质量控制（iqc）监测试验过程和评价检验结果是否可靠，主要目的是检测和控制常规工作的精密度适用于得出检验结果的全过程：临床需求，标本收集，检测，结果报告做好质控的准备：1。培训人员，2。建立标准操作程序（sop）3。仪器的检定和校准4。质控品的选择5。质控品的正确使用和保存质控的

8、要求：随机误差-方法的不精密度；系统误差-偏倚质量控制的性能：用功效函数预测在不同质控规则和不同质控个数时的误差检出概率和假失控概率 误差检出概率ped95% 假失控概率pfr5%质控的测定频次：用户规定的分析批长度（udrl） udrl不应超过厂家推荐的批长度 批长度是时间，或样本数量，厂家推荐的批长度mrrl是厂家声明的测定系统的精密度和准确度的稳定区间质控规则：均值的正负3倍标准差，失控规则13s，22s失控情况处理和原因分析：分析原始数据和初步估计失控原因，对检测过程回顾性分析，通过选择性复查进一步判断和处理1.24室间质量评价（eqa）由第三方评价检测结果的准确性和与其它实验室间的可

9、比性卫生部临床检验中心的全国性评价和省市的地方性评价国际性的eqa有：cap，rcpaqap，ukneqas厂家组织室间评价：roche，qap（beckman-coulter）, randox1.25延迟时间试剂与样本混合后到开始读数前的时间，用于连续监测法1.26 双波长由主波长和副波长构成，主波长是测定波长，副波长消除干扰同一光源发出的光分成不同波长的两个单色光照射同一个试样池（其中一个波长为吸收物质的最大波长，另一个波长为吸收物质不吸收的波长），这两个单色光的吸光度差与被测组分浓度成正比。这个吸光度差是为了消除非特征吸收影响（或称扣除了背景吸收）1.27反应杯空白特定波长光通过反应杯的

10、a1.28试剂空白特定波长光通过试剂加蒸馏水（替代样品）的a1.29样品空白特定波长光通过试剂加样品的初始a1.30后分光复合光-样品杯-光栅分光1.31终点分析法反应到平衡时测反应产物的a一点法：使用一种或两种试剂，检测反应达到终点时的吸光度：tp，alb ，god二点法：固定时间法 苦味酸测肌酐从另一个角度分：一步法：试剂酶反应的底物就是所测物质二步法：酶偶联反应1.32连续监测法连续测定反应过程中某一产物（变化）或底物（消耗）随时间变化的数据连续监测多用于酶活性测定1.33比浊法测定的是浊度，可以是终点法和动态分析化学比浊免疫比浊：生化分析仪多用免疫透射比浊，是终点法，载脂蛋白，免疫蛋白

11、1.33实验室认可能力验证pt，就是做室间质评变异指数得分vis80为优秀；vis200为结果中有不允许的误差；vis=400严重误差检验医学联合委员会jctlm 国家院-参考实验室（iso17025，15195）-常规实验室iso15189，参加室间质评，参考实验室提供靶值1.34实验室认证1.35线性范围1.36可报告范围 1.37方法学性能验证看这个方法的筛出，诊断，治疗，预后，监测1.38检验前程序1.39检验后程序结果确认审核，报告发出，标本保存，咨询服务，抱怨处理，临床沟通第二单元 全自动生化分析仪的分类2.1根据反应装置的结构分类2.1.1连续流动式样品盘，比例泵，混合器，透析器

12、电脑控制比例泵将样本和试剂注入连续的管道中，在一定温度中混合反应空气分段（防交叉污染）和非分段系统（靠试剂或缓冲液分隔）2.1.2离心式加样系统：样品盘，试剂盘，吸样臂和试剂臂，电子控制分析系统：离心转盘，温控光学检测将样品和试剂置于转盘凹槽，离心进外圈反应，整个反应每一步几乎同时完成，分析快， 2.1.3分立式样本处理系统：仿人工操作，吸入样品加入试剂，混合光学系统：光源，分光装置，比色杯，信号检测（光电倍增管）温控系统：干式恒温，水浴循环，恒温液循环三种恒温方式清洗系统：吸液针，吐液针，擦拭块 吸出反应液，注入清洗液，吸干，注入纯水，吸干，擦干计算机系统：样品试剂识别，加样混合恒温，结果计

13、算打印，数据管理2.1.4干片式仪器类型分为以下几种反射光度法系统：使用试纸条，条带由密码磁带，血浆分离区，反应区三部分构成胶片涂层技术分析系统：膜片分为4个层：分布层，中介层两个，批示层，可单项检测也可几十项连续检测袋式分析仪：试剂在反应袋中，反应后将袋压成反应杯测定干式的特点：将反应固定在固相载体中进行，简单快速，灵敏度和准确度达到湿化学水平，适用于急诊和床旁2.2根据自动化程度分类全自动，半自动2.3根据同时可测定项目分类单通道每次只能测一个项目，多通道一次可测多个项目2.4根据仪器的复杂程度分类大型机器为多通道2.5根据分析系统试剂开放程度分类2.6全自动生化分析仪的性能评价自动化程度

14、分析效率：每小时测定样本数量和项目多少应用范围精度和准确度试剂开放性：试剂开放性越高灵活性越大，但系统的稳定性就要差些第三单元 全自动生化分析仪安装及使用前准备3.1全自动生化分析仪工作环境的要求应保证仪器正常运转，不影响检验结果的有效性，对质量无影响有足够空间，无灰尘，烟雾，震动，温度；电源应稳定，有ups温度和湿度不过分变化水质实验室应记录和控制上述区域3.2全自动生化分析仪实验用水要求3.3操作程序文件的要求sfda批准和注册文件，实验室应建立对仪器和系统的维护和性能验证的程序文件对每个项目有sop文件应有开关机程序3.4操作人员培训的要求检验专业技术职称，相关工作2年，经过仪器相关培训

15、操作人员应会校准，参数设定，试剂准备，试剂样本装载，日常维护，应专人负责3.5检验设备和方法的性能验证仪器性能验证（初步评价），确定是否可接受，内容包括：线性范围，精密度和偏倚，并有记录第四单元 全自动生化分析仪的基本结构及工作原理4.1 样品系统4.2 试剂系统4.3 条形码识读系统4.4 反应系统4.5 清洗系统4.6 管路系统4.7比色系统4.8程序控制系统4.9携带和交叉污染试验及纠正原因 共用试剂针和样本针，测定项目多测定方法多，操作保养不当，仪器老化，清洗剂选用不当，检测项目排列不合理携带和交叉污染的检测：测三次高值血清，再测三次生理盐水；如此反复四次；再测1000倍稀释后的血清五

16、次，总共测了29次盐水的平均值为a，稀释后血清均值为b 交叉污染率=（a/b）*1000，0.3%为正常交叉污染组合：alt和ast试剂中有ldh，对ldh测定有干扰；alp，ck，ckmb，co2，amy含mg，对mg测定有干扰；che，glu（god法），cho，ua，hbdh有磷酸盐缓冲液对p干扰；ck试剂中有glu对其干扰；胆固醇试剂中有胆酸盐，对tba影响；amy有ca，干扰；tb，db钒酸盐法不能在碱性试剂后如alb，alp，ca ，mg，cr（碱性苦味酸）；过氧化物酶反应不要排在一起携带交叉污染的解决： 维护仪器，正确排列项目，增加清洗次数，选用特殊清洗液4.10波长的选择第五单

17、元 全自动生化分析仪常用分析技术5.1 光谱分析技术5.1.1吸收光谱分析法5.1.2散射光谱分析法5.2电化学分析技术第六单元 全自动生化分析仪检测的质量控制6.1 校准 实验室使用sfda批准的分析系统（仪器和试剂盒），要按说明书要求 对用于检验，校准，取样的部份都要进行仪器校准如波长，反应温度，加样量，空白吸光度，加贴标识和效期检验项目校准，校准周期不同试剂和厂家是不一样的，如ca的试剂稳定性不好，每天校准项目校准应有记录校准品：multi(贝克曼)，j&j(强生)，cfas(calibrator for automated system 罗氏)，校准验证：至少每6个月做一次校准验证，或

18、换批号，重要部件更换都应做并记录全部数据。6.2 室内质量控制 (iqc) 单一浓度质控物用l-j图，常规条件下x为10天内所测20次的均值，标准差。图上要标明时间，项目，仪器，批号，项目的单位多个浓度质控物用z分数图：y轴为z分数（测定值-均值）/标准差；x轴为次数。显示不同结果超过了几个sd质控物通常选生理水平和病理水平两个每个工作日至少做两次质控每个独立分析批都应做质控品换批号时应新旧批号有一个并行检测，至少应5天内每天做不少于4次的重复检测6.3 室间质量评价 (eqa)第七单元 全自动生化分析仪使用的试剂盒的评价敏感性，特异性第八单元 临床生物化学实验方法的选择与评价8.1实验方法和

19、标准品的选择决定性方法（一级参考方法），参考方法（二级参考方法），常规方法（厂家和常规用户）8.2实验方法选择的要求和步骤ifcc提出实用性和可靠性应有实用性（微量快速，便于操作，应用安全，费用少）和可靠性（精密度和准确度，较大检测能力）两方面要求步骤：8.3实验方法的评价内容：是评价实验的精密度和准确度，强调的是误差，评价实验的过程就是对误差的测定8.4方法评价实验8.5临床生物化学方法学性能验证性能标准又称分析目标，应根据目的（筛选，诊断，治疗，预后，监测）不同使用可信区间判断指标8.6诊断试验的性能评价诊断性试验必须有好的敏感性和特异性灵敏度：（实测阳性/理论阳性）*100%特异度：（实

20、测阴性/全部阴性）*100%阳性似然比=灵敏度/（1-特异度）阴性似然比=（1-灵敏度）/特异度8.7参考值的确定正态分布的按均值+_2sd；对非正态分布的按单侧5%，双侧2.5%的百分位数作为参考区间参考区间每个实验室测120份健康人，如引用试剂说明书应验证20-50例健康人8.9医学决定水平临床采取措施的不同值：待诊值，确诊值，危急值第九单元 全自动生化分析仪常用测定项目的反应原理9.1常用测定反应的基本知识9.1.1常用测定项目的指示反应9.1.2酶及代谢产物的常用分析方法9.2常用测定项目的反应原理9.2.1丙氨酸氨基转移酶（alt）测定：连续监测法9.2.2天门冬氨酸氨基转移酶（as

21、t）测定：连续监测法9.2.3总胆红素（t-bil）测定：重氮法、氧化酶法 钒酸法（化学氧化法）9.2.4直接胆红素（d-bil）测定：重氮法、氧化酶法、钒酸法（化学氧化法）9.2.5碱性磷酸酶（alp）测定：连续监测法9.2.6-谷氨酰转肽酶（ggt）测定：连续监测法9.2.7总胆汁酸（tba）测定：循环酶法9.2.8血清总蛋白（tp）测定：双缩脲法蛋白质的肽键在碱性溶液中与铜离子作用产生紫红色络合物9.2.9血清白蛋白（alb）测定：溴甲酚绿法alb与溴甲酚绿结合后由黄变绿，深浅与alb浓度成正比9.2.10 型胶原（cl-）测定：免疫透射比浊法9.2.11肌酸激酶（ck）测定：连续监测法

22、9.2.12肌酸激酶同工酶（ck-mb）测定：免疫抑制法（酶活性测定）、单克隆抗体免疫法（酶质量测定）9.2.13乳酸脱氢酶（ld）测定：连续监测法9.2.14肌钙蛋白i（tni）测定：免疫透射比浊法9.2.15超敏c反应蛋白（hs-crp）测定：免疫透射比浊法9.2.16葡萄糖（glu）测定：葡萄糖氧化酶-终点法（god法）、己糖激酶-连续监测法（hk法）glu+o2+h2o 在god下生成h2o2 +4-氨基安替比林-醌亚胺，醌亚胺在560nm处最大吸收，所产生颜色和glu正比 hk法是参考方法 glu+atp hk 6-磷酸萄葡糖脱氢酶+nadnadh，nadh在340nm处有吸收峰与g

23、lu成正比ck对glu有干扰9.2.17糖化血红蛋白a1c（hba1c）测定：亲和层析高效液相法、离子交换高效液相法、免疫透射比浊法9.2.18尿素（urea）测定：尿素酶-连续监测法尿素在尿素酶作用下生成nh4，加nadh-生成nad9.2.19肌酐（cr）测定：碱性苦味酸法；肌氨酸氧化酶法碱性苦味酸+肌酐-红色物在500-520nm处成正比9.2.20尿酸（ua）测定：尿酸酶过氧化物酶偶联-终点法9.2.21胱抑素c（cys-c）测定：免疫透射比浊法9.2.22尿微量白蛋白（malb）测定：免疫透射比浊法9.2.23n-乙酰-d-氨基葡萄糖苷酶（nag）测定：cnp-nag连续监测法9.2

24、.24甘油三酯（tg）测定：磷酸甘油氧化酶-终点法（gpo-pap法）类似glu的hk法tg在酶作用下生成丙酮酸+nadhnad，在340nm处测nadh氧化成nad，吸光度下降同tg浓度成正比备注：nadh是加h还原，去h氧化9.2.25总胆固醇（t-cho）测定：胆固醇氧化酶-终点法（cod-pap法）类似glu的god法tc在酶作用下生成h2o2 +4-氨基安替比林-醌亚胺，500nm处成正比9.2.26高密度脂蛋白胆固醇（hdl-c）测定：选择遮蔽法血清中加入磷钨酸钠-镁沉淀剂，沉淀ldl，vldl，上清液中只有hdl，再用酶法测tc9.2.27低密度脂蛋白胆固醇（ldl-c）测定：选

25、择遮蔽法9.2.28载脂蛋白a1（apoa1）测定：免疫透射比浊法9.2.29载脂蛋白b（apob）测定：免疫透射比浊法9.2.30脂蛋白a（lp(a)）测定：免疫透射比浊法9.2.31钾（k）测定：离子选择电极、酶法9.2.32钠（na）测定：离子选择电极、酶法9.33氯（cl）测定：离子选择电极9.2.34总二氧化碳（co2）测定：电极法、酶法9.2.35钙（ca）测定：甲基麝香草酚蓝比色法、邻甲酚酞络合酮比色法在碱性条件下以上两种都可以和ca络合，颜色深浅和浓度成正比amy测定中有ca可交叉干扰9.2.36磷（p）测定：紫外分光光度法、硫酸亚铁磷钼蓝比色法用钼酸铵测定无机磷，总磷不能测出酸性条件下钼酸铵与无机磷反应，340nm处吸光度增加与无机磷浓度成正比che，glu（god法），cho，ua，hbdh有磷酸盐缓冲液对p干扰9.2.37铁（fe）测定：比色法9.2.38镁（mg）测定：甲基麝香草酚蓝比色法试剂中加有egta先与血清中ca结合，甲基麝香草酚蓝再与mg结合成桃红色物，颜色深浅和mg浓度成正比第十单元 全自动生化分析仪的操作程序10.1 准备工作10.1.1开机前的准备工作10.1.2开机10.1.3开机后的准备工作10.1.4关机10.2 操作流程10.2.1校准操作 校准物和样本要处于相同基质