硕士论文-一碳单位代谢酶基因多态性、环境暴露与结直肠癌关系的分子流行病学研究

1、浙江大学硕士学位论文一碳单位代谢酶基因多态性、环境暴露与结直肠癌关系的分子流行病学研究姓名：宋亮申请学位级别：硕士专业：流行病与卫生统计学指导教师：陈坤20060501浙江大学硕士研究生毕业论文本研究应用以队列人群为基础的病例对照研究，了解一碳单位代谢酶基因多态性在自然人群中的分布频率及其在群体水平上与结直肠癌易感性的关系，并在此基础上，分析一碳单位代谢酶基因一基因交互作用，以及基因多态性与相关环境暴鼯因素以及一碳单位代谢相关营养素之间的交互作用与结直肠癌易感性的关系。材料与方法以浙江嘉善县个乡镇参加过结直肠癌普查的人的随访队列为研究人群。从中选取年月至年月该队列发生的例结直肠癌存活病例（结肠

2、癌例，直肠癌例）组成病例组。按照该队列人群的年龄、性别分布，采用分层抽样方法抽取人组成对照组，实际调查人，其中调查问卷和血样都齐备的有人。采用单纯随机抽样方法从这人中抽取倍于病例组样本量的对照，即人作为本研究数据分析的对照样本。通过流行学问卷调查获得现场资料。调查内容包括：一般状况，生活方式与习惯，饮食习惯与种类以及既往疾病史等。通过询问各类食物的单次摄入量和摄入频率获得常见食物摄入量信息，并使用统一制作的食物模型辅助调查。每位研究对象同时抽取外周血。实验室检测采用改良盐析法抽提外周血白细胞：、认、和多态位点检测采用聚合酶链限制性片断长度多态性（）方法。多态位点检测采用方法扩增目的片段后直接经

3、琼脂糖凝胶电泳分析。全部调查表格经统一编码后，用软件双遍输入，校对无误后进行统计分析。分类变量在病例组和对照组的分布特征采用，检验；研究因素与结直肠癌值估计采用非条件鲥回归模型拟台，采用卡方趋势检验判断是否存在剂量一反殃关系，基因一基因和基因一环境交互作用的值用似然比检验计算。各种食物能量和营养素含量参考中国食物成分表和中国食物成分表。全部统计分析均在和软件中进行。结果相关环境暴露因素与结直肠癌一般情况中，结肠癌在年龄大于岁以上的人群中多见，月值分别为（）和（五）。高中及以上文化程度者患结肠癌的风险呈现有统计浙江大学硕士研究生毕业论文基因携带者结肠癌风险显著下降，幢值为（一）。多态与饮酒年限之

4、间，窒互为（童肠癌），饮酒年限三年并等位基因携带者直肠癌风险显著增高，吸值为（一）。多态与饮酒年限之间，空互分别为（结肠癌）和，（直肠癌），不饮酒并等位基因携带者结肠癌风险显著下降，值为（）。与摄入与摄入之闻女为（结肠癌），低摄入组和中等摄入组中等位基因携带者结肠癌的风险升高，值为，（，）和（五年）。与毋摄入西与摄入女为（直肠癌），高摄入组中等位基因携带者直肠癌风险下降，值为（）。与摄入之间尸女为（直肠癌），低摄入并等位基因携带者直肠癌显著增高，虎值为（）。与叶酸摄入与叶酸摄入量之闯分别为（结肠癌）和，（直肠癌），低叶酸摄入并等位基因结肠癌风险升高，值为（）。与蛋氨酸摄入与蛋氨酸摄入之间为（结

5、肠癌），低蛋氨酸摄入并等位基因携带者结肠癌风险显著增高，尺值分别为（，）。多态与蛋氨酸摄入之间空互分别为（结肠癌）和（直肠癌），蛋氨酸中等摄入组中等位基因携带者和高摄入组中基因型者结肠癌风险下降，胄值分别为（）和（）。结论本合物。免疫法需要特异性的抗体，因此寻找合适的多克隆抗体是免疫法的关键所在。自从年等创建了酶联免疫吸附测定法（），并报道铸造工人外周白细胞加合物与接触的相关性后，免疫法不断发展。目前，已发展有竞争性法、超敏酶促放射免疫测定（）、免疫组织化学法（）、流式细胞检测塑垩查堂堡主塑壅兰生些堡苎一、饮食摄入和、饮食摄入和、饮食叶酸摄入和嗍、饮食叶酸摄入和认、饮食叶酸摄入和麟、饮食叶酸摄

6、入和，多态、饮食蛋氨酸摄入和、饮食蛋氨酸摄入和，多态之间存在交互作用，共同改变个体结、直肠癌风险。【关键词】结直肠癌；环境暴露；一碳单位代谢；基因多态性：营养素；亚甲基四氢叶酸还原酶：蛋氨酸合酶：蛋氨酸合酶还原酶；胸苷酸合酶浙江大学硕士研究生毕业论文一，；，（，），）丹，），（，），（，），（），（，），（，），（。）（，。），）面（，）何）浙扛大学硕士研究生毕业论文，也（）（，）（，），（五），（，）（，）、，（，）（，、也（，）一，（）（，）（，。）（），（）（）塑垩查兰堡主堕塞皇望兰竺丝奎：，；。；浙江大学硕士研究生毕业论文一碳单位代谢酶基因多态性、环境暴露与结直肠癌关系的分子流行病学研

7、究浙江大学医学院流行病学与卫生统计学级硕士研究生宋亮导师陈坤教授前言结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。世界范围内，男性结直肠癌发病率在所有恶性肿瘤中居第四位，女性中居第三位，患病率在恶性肿瘤中排第二位。年估计全球新增结直肠癌病人万例，死亡万人；我国新发病例约为例，死亡例，分别居常见恶性肿瘤发病率和死亡率的第五和第六位，而其五年现患病例数居恶性肿瘤第三位【。近年来，随着食物结构、生活方式的改变，人均期望寿命明显延长我国结直肠癌的发生率和死亡率均呈逐年上升趋势。世界范围内结直肠癌发病差别很大，高发区和低发区的最大差异可达倍吼北美、澳大利亚新西兰、西欧和日本（限于日本男性）等国

8、家或地区属结直肠癌高发区，亚洲、非洲和南美南部地区属于低发区纠。结直肠癌发病巨大的地域差异，大部分可归结于不同人群环境暴露因素不同。流行病学研究认为，环境暴露因素约占结直肠癌归因危险度的。与结直肠癌易感性相关的常见的环境暴露因素】：饮食方面主要为高脂肪低纤维素饮食，煎炸熏烤肉、鱼类食物，少食蔬菜及水果等食物；生活方式方面包括吸烟饮酒，饮用不洁水和体力活动较少或静坐时间过长等：此外，肠息肉史、粘液血便史等既往疾病史也与结直肠癌发病有显著关联。除环境暴露因素外肿瘤遗传易感性也影响着不同人群（个体）结直肠癌易感性。群体中，许多人都接触相同的环境因素，但只有少数人最终发展成为肠癌病人，个体对环境暴露因

9、素的反应不完全相同，肿瘤遗传易感性在结直肠癌发生发展中也起着十分重要的作用。与致癌物活化失活代谢密切相关的代谢酶（如细胞色素、谷胱甘肽转移酶和乙酰基转移酶等）和与损伤修复密切相关的修复酶基因多态性（如、）（、等修复基因）与结直肠癌易感性的关系已经得到了广泛的研究。浙江大学硕士研究生毕业论文圈一碳单位代谢基本过程近十多年来，一碳单位代谢与恶性肿瘤的关系日益受到关注。其与体内其他代谢有广泛联系，如参与甲基化和合成，代谢障碍可引起甲基化和合成异常，从而参与肿瘤的发生和发展。如图口所示，一碳单位代谢主要包括两条途径：核苷酸生物合成和甲基化反应。叶酸、蛋氨酸、毋和是参与一碳单位代谢过程的最重要的几种营养

10、素。叶酸是一种水溶性的族维生素，以四氢叶酸（）的聚谷氨酰基形式存在的叶酸通过丝氨酸羟甲基转移酶作用丝氨酸和甘氨酸相互转化的同时，被转变为。一亚甲基四氢叶酸（，）。，一掰是嘧啶合成反应中的辅酶，在脱氧尿营酸（，）经胸苷酸合酶（血，）催化生成脱氧胸苷酸（心）的反应中提供一碳基团。在细胞周期内，该限速反应能保证的复制继续进行。，口还可在四氢叶酸合成酶作用下生成甲酰基四氢叶酸（），后者在嘌呤合成的两步反应中将甲酰基提供给嘌呤环的和，参与鸟嘌呤和腺嘌呤的生物合成。一碳单位代谢的另一个重要功能是参与甲基化反应，经过亚甲基四氯叶酸还原酶（血仃，）的催化，转变为一甲基四氢叶酸（一盯）。后者参与同型半胱氨酸复甲

11、基化形成蛋氨酸，该反应需要蛋氨酸合酶（，）的催化，脱下的甲基首先转移到钴胺素（）。形成甲基钴胺素，通过甲基钴胺素转化为钴胺素，再将甲基转移至同型半胱氨酸。钴胺素是一种强还原剂，很容易被氧化为非活性形式，需要在蛋氨酸合酶还原酶（，汛）的作用浙江大学硕士研究生毕业论文下重新生成其活性形式才能继续发挥作用。蛋氨酸是腺苷蛋氨酸（）的前体物质，后者是体内多个生理反应通用甲基供体，包括、和膜磷脂的甲基化反应。在所有细胞中，通过多种甲基转移酶的作用，被转变为一腺苷同型半胱氨酸（），经一腺苷同型半跳氨酸水解酶水解为同型半胱氮酸和腺苷。同型半胱氮酸可以与丝氨酸在依赖的胱硫醚肛台酶催化下形成胱硫醚，经转硫反应生成

12、半胱氨酸。主要功能是作为辅酶黄素单核苷酸（硝，）和黄素腺嘌呤二核苷酸（，）以及共价结合黄素的前体物质，这些辅酶参与叶酸和的代谢，是的共作用因子；缺乏时，转化为其辅酶衍生物的过程可能受到损伤。维持核苷酸生物合成和甲基化反应之间的平衡对一碳单位代谢相关恶性肿瘤发生发展具有十分重要的意义。参与一碳单位代谢的营养素（叶酸、蛋氨酸、和）和代谢酶（、和）水平或活性改变都可能影响一碳单位代谢过程，改变核苷酸生物合成和甲基化反应之间的平衡，与恶性肿瘤的发生发展有关。常见的一碳单位代谢基因多态包括：、唧、职、重复片段多态（其基因非翻译区（打，）存在一个长的重复片段多态，在大多数人中，该片段重复次或次（等位基因为

13、和）和一（等位基因为和），这些基因多态性可能影响其蛋白产物的表达或功能水平，从而影响叶酸的代谢过程。纵观目前有关一碳单位代谢酶基因多态性、相关营养素摄入与结直肠癌易感性的研究：营养素方面，主要集中在与叶酸关系的探索，而与其他营养素关系的报道很少：一碳单位代谓酶基因多态性方面，除基因多态外，、碌、和多态与结直肠癌的关系报道不多。多数一碳单位代谢相关代谢酶基因多态性与结直肠癌关系的分子流行病学研究还局限与单个基因多态或联合基因型的作用，少有基因一基因交互作用的报道；基因一环境暴露交互作用方面多只涉及与饮酒和叶酸摄入之间的联系，丽与其他一碳单位代酣相关营养素的关系少有研究。目前肿瘤易感性的研究越来越

14、重视基因一基因和基因一环境因素的综合作用。一碳单位代谢涉及多种营养素和代谢酶，它们之间的关系比较复杂，单独的基因多态或营养素水平可能不会改变个体结直肠癌易感性，但多个基因多态或基因多态与环境暴露因素之间的综合作用对于个体遗传易感性的影响可能更大。综合分析一碳单位代谢酶基因多态性、相关营养素摄入水平以及基因、基因之间和基因、环境因浙江大学硕士研究生毕业论文素之间的交互作用，将能更透彻的了解一碳单位代谢在结直肠癌发病中的作用以及与个体遗传易感性的关系。本研究选择我国结直肠癌高发区】一浙江省嘉善县为研究地点，进行一碳单位代谢酶基因多态、相关营养素摄入水平与结直肠癌易感性关系的分子流行病学研究。材料与

15、方法一、研究人群的确定以年月目年月日期间在浙江省嘉善县建立的结直肠癌筛检队列为研究人群。该队列成员为嘉善县下属的个乡镇（魏塘镇、杨庙乡、下甸庙乡、汾玉乡、天凝乡、惠民乡、枫南乡、陶庄乡、洪溪乡、大通乡）所有岁以上人群共人。实际参加结直肠癌筛检共人，应答率为。二、病例的选择嘉善县肿瘤防治研究所建立了比较完善的肿瘤登记系统，对结直肠癌采取专门的肠癌保卡制度，通过三级防癌网，对每年新发结直肠癌病例的基本情况、诊断情况和死亡情况进行详细登记。本次研究病例来源于嘉善县肿瘤防治研究所的肠癌报卡病人，选取在年月日至年月发生的，且曾经参加过年结直肠癌普查的原发性结直肠癌存活病例（按、标准分类），排除拒访、失访

16、，共例（结肠癌例，直肠癌例）组成病例组。以上的病例在年以后确诊，年龄岁，的病例通过病理、手术或内窥镜诊断。直肠类癌、转移性结直肠癌或年筛查时检出的结直肠癌病例，不在本次研究之内。三、对照的选择对队列中每一个观察对象进行编号（普查号），根据整个队列的年龄（以岁、岁，岁、岁和岁以上年龄段分层）、性别构成，通过分层抽样的方法抽取对照。按普查号从低到高的顺序对队列成员进行排序，用随机抽样工具，抽取一定数量的对照。为防止调查过程中由于死亡、搬迁等原因造成的样本量损伤，每个对照均选择个候补对照。具体做法为在年的普查册中，根据普查号找到相应的研究对象，再依次往下寻找个同性别，年龄士岁，同村的人组成候补组，并

17、依次编码为候补、候补、候补、候补、候补。如对照失访，则调查候补，如候补失访，则调查候补，依次类推。如果对照和位候补均未能调查，就视为失访。年抽取了该队列的一个代表性样本，计划抽取人，实际共调查人应答】浙江大学硕士研究生毕业论文率为。年为进一步扩大样本量，从该队列中再抽取人组成对照组，实际调查人，应答率为。总计对照人，其中人缺少血样，份血样抽提失败，共名对照既有调查问卷又有样品。在这名对照中，通过单纯随机抽样的方法，抽取倍于病例组样本量即名对照作为本研究数据分析的对照样本。四、现场资料收集调查内容在研究对象知情同意并签署知情同意书后，采用入户调查的方法，询问研究对象的一般情况（姓名、性别、婚姻状

18、况、职业、文化程度、体重、身高等），生活条件、方式与习惯（包括年前后的经济收入状况、小时活动安排、饮水类型、烟酒嗜好、饮茶史等），饮食习惯与种类（饮食习惯主要有是否喜食腌制品、肥肉，是否喜欢辣食、甜食、咸食、硬食等；食物种类有肉类、鱼贝类、蛋类、豆类、蔬菜类及水果类等共余种食品），既往疾病史（肠息肉、结直肠炎、血吸虫病等疾病史）、家族疾病史、家族恶性肿瘤史，月经生育史（女性），心理因素，被调查者知情同意和调查员后记等调查项目。通过询问调查对象各种食物的单次食用量、频率了解其各种食物的摄入量，一些食物还作了季节性调整。调查方法采用统一编制并经过预调查的调查表，由经过培训考核合格的调查员直接询问调

19、查对象本人后填写。为了帮助调查对象回忆以提高饮食调查的准确性，本次调查中凡涉及膳食的部分均出示食物模型（包括代表肉类食品的肉块、代表鱼类食品的鱼块、代表蔬菜类和水果类食品的袋装四季豆、碗及杯等五种模型）。另外，要求病例回答结直肠癌确诊前年的膳食摄入情况，对照则根据其近五年内饮食习惯有无改变决定，如无改变，则询问近一年内的饮食习惯，如有改变，则询问改变前一年的饮食习惯。五、基因多态实验室检测分型征得同意后，每位调查对象现场抽取静脉血，其中装入带有枸橼酸钠的真空小试管（浙江康氏医疗器械有限公司），装入无抗凝剂的真空试管（浙江康氏医疗器械有限公司），现场登记姓名和编号，当天送回肿瘤所。试管直接放入（

20、箱试管离心约，然后吸取上层血清，置入的管，编号，登记。血凝块仍置于试管中，统一放入冰箱保存。抽提采用改良盐析法抽提外周血白细胞，具体方法如下：在离心管中，加入枸橼酸钠抗凝血，并加入溶血试剂（，蔗糖、（）、浙扛大学硕士研究生毕业论文，度保存）至，混匀后静置，于离心（），弃上清（用滴管小心吸取），再加溶血试剂至，用滴管吹散沉淀，静置，离心（），弃上清，相同条件重复清洗遍。至沉淀颜色发白为至，弃上清（可以考虑倒上清），加核悬浮液（、（衅），保存），蛋白酶（），混匀并轻轻吹散沉淀，于水浴后，加入饱和溶液混匀，置，于离心（），收集上清液于管中，再加入倍体积的冰冷无水乙酵，轻轻摇动，至絮状析出为至，于离心

21、（），弃上清，再用和乙醇各洗遍。移去乙醇后，室温下干燥至糊状，加入（）、（）溶解天（），定量，（冰箱保存。（以上所用试剂均购自上海生工，）一碳单位代谢酶基因多态性检测、和多态位点检测采用聚合酶链限制性片断长度多态性（）方法。多态位点检测采用方法扩增目的片段后直接经琼脂糖凝胶电泳分析。（）、多态检测、多态检测的引物序列分别为为、一和一、广。反应体系总体积含模板，各引物、聚合酶（）及其反应缓冲液。反应条件为预变性后，于、和进行个循环，最后延伸。产物长度分别为和，并分别与限制性内切酶（）和（）：温浴。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析。酶切结果为：等位基因可被识别，产生和两个片段，等位基因只有一个片段。酶

22、切结果为：等位基因有四个酶切位点，产生、和五个片段，等位基因失去一个酶切位点，产生、和四个片段。（）多态检测多态检测采用的引物序列，和，。反应体系总体积，含模板、各引物、聚厶（）反应浙江大学硕士研究生毕业论文缓冲液。反应条件为（预变性后，于、和进行个循环最后延伸。产物长度为，与限制性内切酶（温浴，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析，等位基因可被识别，产生和两个片段，等位基因只产生一个片段。（）多态检测多态检测的引物序列为，和。反应体系总体积。含模板、各引物、聚合酶（）及反应缓冲液。热循环条件为预变性后。于（、。和进行个循环，最后延伸。产物长度为，与限制性内切酶（）于温浴后，经琼脂糖凝胶电泳分析，等位

23、基因被酶切，产生和两个片段，等位基因不被酶切，只产生一个片段。（）一和多态位点检测多态检测的引物序列为和。反应体系总体积，含（）、和聚合酶（）及反应缓冲液，热循环条件为预变性，于，和进行个循环，最后延伸。产物经的琼脂糖凝胶电泳分析，等位基因产物为，等位基因产物为。多态检测的引物序列为和。反应体系总体积，含和聚合酶（）及反应缓冲液，热循环条件为预变性，于，和。进行个循环，最后延伸。产物与限制性内切酶（）子温浴后经琼脂糖凝胶电泳分析，等位基因只有一个片段，等位基因产生和两个片段。六、质量控制现场调查的质量控制调查开始前，对所有调查员进行培训，统一对调查表的理解和填表的标准：每位调查员在现场调查时均

24、备有专门的调查员手册，作为统一的标准备考。设有专门的质控人员，负责对当天回收的调查表进行逻辑检查，如发现错误则发还调查员重新调查。在调查结束后，从病例与对照组中随机选取的调查表进行电话复访，以检验本次调查资料的可信度。】浙江大学硕士研究生毕业论文实验室检测质量控制采用盲法检测一碳单位代谢酶基因多态性，即检测人员不知道样品属于病例组和对照组。每一种一碳单位代谢酶基因多态性实验室检测工作完成后，再随机抽取的样品重复检测，以检查基因多态分型结果的可靠性。七、资料分析调查表经统一编码后，由两组人员用软件双遍输入，用命令进行校对，无误后建立数据库。分析前进行必要的变量代换及编码。分类变量（年龄、性别、婚

25、姻状况、职业和文化程度等）在病例组和对照组的分布特征采用，检验分析。各研究因素与结直肠癌的值估计采用非条件回归模型拟和，求出值、可信区间（，）。剂量一反应关系采用卡方趋势检验分析。该部分统计分析在软件中进行。基因一基因和基因一环境交互作用采用似然比检验分析。如分析变量和的交互作用，在回归模型中，引入和，以及其他调整因素，获得该模型（模型）的（即该模型最大对数似然值的一倍）；于模型中，除引入和以及调整因素，同时引入和的交互项（），获得此模型的。计算模型和模型之差，即似然比检验统计量，该统计量服从卡方分布，分析两变量之间的交互作用时，自由度为。该部分统计分析在软件，中进行。营养素分析每食物中营养素

26、含量（）计算采用以下公式：。为每可食部中某营养素的含量，为该类食物的可食部比例。各类食物的值和碳单位代谢相关营养素及能量（包括、叶酸和蛋氨酸）的值引用中国食物成分表【州和中国食物成分表的报道，并对一些季节性食物作了季节性调整。用软件建立食物成分数据库；每位研究对象各种营养素和能量年摄入量在统计软件中计算。按照研究对象能量和各种营养素量的，和百分位数分为个等级，以摄入量低组为参比组，分别以非条件回归方法校正部分非饮食因子后获得不同营养素摄入水平结肠癌、直肠癌的值及其。通过卡方检验获得趋势检验的，值。该部分统计分析在软件中进行。浙江大学硕士研究生毕业论文结果一般情况分析结肠癌组、直肠癌组的平均年龄

27、分捌为岁和岁，对照组为岁。由表可见，结肠癌在年龄大于岁以上的人群中多见，值分别为（，）和（，），趋势检验显示随着年龄的增长，结肠癌呈高发趋势（）。而年龄因素在对照组、直肠癌组以及性别、婚姻状况因素在对照组与结、直肠癌组闾均衡性较好。文化程度和职业与结肠癌的关系亦有统计学意义，高中及以上文化程度者患结肠癌的风险呈现有统计学意义的升高，值为（，），与从事其他工作的人相比，农民患结肠癌的风险则呈有统计学意义的下降，值为（，）。表人口学状况均衡性检验及其与结直肠癌关系人口学状况磊量结肠癌直肠癌例数，值值值（）例数，值值值（）年龄（岁）趋势检验性别男女婚姻状况已婚其他文化程度文盲小学初中高中及以上趋势检

28、验职业（）（）（）（）（）（）（）（，）（）（。）（）（）农民印（伽）其他（）（）仲）小计注：（结肠癌病例中有一人缺少年龄信息新江大学硕士研究生毕业论文疾病史与结直肠癌的关系控制年龄、性别、职业和文化程度等因素后，用回归估计既往疾病史与结直肠癌易感性的关系，结果见表。既往有肠息肉、结直肠炎和血吸虫病史者结、直肠癌风险均显著增高，值分别为（）和（），（，）和（，），以及（，）和（，）。未发现高血压病史、糖尿病史、胃炎史和胃溃疡病等疾病史等与结、直肠癌有显著关系。表疾病史与结直肠癌关系的值估计（回归）疾病史结肠癌直肠癌，例数值值值（矿例数，值值值（。高血压亢甫糖尿病尢有胃炎尤有胃溃疡甫肠息肉（咒）

29、（）（、（）肿心）：！一！：型！：！兰：型！型坐坚型舢（）（”）竺！竺！竺：！型：！竺！坚翌型）（）！竺咝竺望！：！：！：竺：！：！无（叭（”）有（），（）结直肠炎无舯（）有（）（）血吸虫病无加）（）有（）（）一注：户（：值经性别、年龄、职业和文化程度校正常见环境暴露因素与结直肠癌关系饮酒由表可见，经性别、年龄、职业和文化程度因素校正后，是否饮用烈性酒与结肠癌的关系有统计学意义，饮烈性洒者结肠癌风险显著升高，值为（，）。而是否有饮酒史、饮酒年限和其他饮酒类型与结肠癌、直肠癌的关系来见有统计学意义。塑垩查堂堡主墅塞圭兰些堡壅表饮潘与结直肠癌关系的值估计（回归）对照例数，值值值（矿例数，值，值值（。注：对照组中有人缺少饮酒史信息，结肠癌病例中有人缺乏饮酒史信息尸：值经性别、年龄、职业和文化程度校正吸烟