AKTAexplorer标准操作及维护保养规程

1、1 目的 阐明和规范运用 AKTAexplorer 蛋白纯化系统。 2 范围 本操作规程适用于 AKTAexplorer 蛋白纯化系统的操作使用及维护保养。 3 职责 仪器操作人员负责仪器的正确使用，清洁及基本维护。仪器负责人负责监督和培训其他人员对仪器的 正确使用，同时仪器负责人对仪器进行定期维护和保养。 4 引用 4.1 AKTA_Purifier 操作手册 4.2 AKTA_explorer 英文操作手册 5 内容 5.1 准备工作 5.1.1 将预先配置好的缓冲液，用 0.45 微米滤膜过滤，然后进行超声脱气。 5.1.2 将待分离样品用 0.45 微米滤膜进行过滤。 5.1.3 将对

2、应的管路放入对应的缓冲液。 5.2 启动层析系统 5.2.1 连接好电源打开 AKTAexplorer 蛋白纯化系统电源，打开电脑点击操作软件。 5. 2.2 排出缓冲液管路气泡 检查进液管路有无气泡，少量气泡可进行泵洗排气，首先将管路滤头放入超纯水中，点击操作软件 “ system control ”中“ manual”操作菜单，然后在“ pump”中点击“ pump wash explorer ”同时选 择待要排气的管路，选择完成点击“ execute”，泵洗结束点击“ end”。当管路中气泡仍未排除 时，“ manual ”操作菜单中点击“ flowpath ”选择未排尽气泡管路，点击“

3、 execute”，用注射器在 对应的泵头上方阀门处抽出气泡，点击“end”。 5. 2.3 排除样品泵管路气泡 将进样管路放进超纯水中，“ manual”操作菜单中点击“ sample flow ”设定流速 10-20mL/min ， “ flowpath ”中选择管路，“ Alarms ”设定样品泵压力 0.3MPa，点击“ execute”排气结束后点击 “ end”。当管路中气泡仍未排除时，用注射器连接在injection valve V1 的 2 号位抽气。“ direct load ”设定流速样品才过柱子，在“ sample flow ”改变流速样品不过柱子。 5.2.4 管路液体

4、置换 将使用的管路放进纯化水中，“ manual”操作菜单，然后在“ pump”中点击“ pump wash explorer ” 同时选择管路，选择完成点击“ execute”，泵洗结束点击“ end”。将管路放到对应的缓 冲液中，置换成相应的缓冲液。 5.2.5 连接层析柱 连接层析柱若是预装填柱，预先设定一个小的流速1-5mL/min ，“ pump alarm ”设定 0.3MPa，先 接上面不要太紧，再接柱子下端，拧紧柱子接头检查是否漏液 5.3 手动操作纯化样品 5.3.1 平衡层析柱 通常用上样缓冲液平衡 5 个柱体积， Manual 操作菜单中“ pump ”设定流速，“ fl

5、owpath ”设定柱 位、缓冲液进口、缓冲液流向、废液出口F1，“ alarm”设定检测波长、泵压，选择完成点击 “ execute”，平衡结束点击“ end”。 5.3.2 上样 样品环上样 上样量较少时选择样品环上样，样品环接到 injection valve V1 的 2 号位和 6 号位，注射器抽取上样 缓冲液冲洗上样环，冲洗缓冲液从3号位注入，注射器将样品由 3号位注入， Manual 操作菜单中 “ flowpath ”“ Inject valve ”选定“ inject ”，设置好其他参数，选择完成点击“execute” 上样结束 点击“ end”。 样品泵上样 上样量较大时选

6、择样品泵上样， Manual 操作菜单中“ derict load ”设定上样流速、上样量大小， “ alarm”设定样品泵泵压，“ flowpath ”选定进样管路、柱位、流向、废液出口，选择完成点击 “ execute”，上样结束点击“ end”。 5.3.3 方法洗脱及样品收集 5.3.3.1 冲洗未结合样品 用起始缓冲液冲洗未结合到层析柱上的样品，同时将未结合样品收集以备最后结果分析。 5.3.2 样品洗脱和收集 Manual 操作菜单中设定好流速、柱位、流向、waste 出口选择 F2（F2 与收集器相连 ）、缓冲液进口、系 统泵压力（通常 0.3MPa ）、检测波长。在“ pump

7、”中设定“ gradient target B 100% ”的各项参 数。“ Frc”中设定收集器参数，“ Man fraction ”选定“ serpentine 蛇形收集”“ Frc size”设定没 管收集样品量，选择完成点击“ execute”。 5.4 编程操作 柱子平衡、上样、洗脱、收集可采用编程操作，通过运行程序来执行各步骤实验操作。 Method Editor 页面点击 Method wizard ， main selection 中选择填料类别， column 中选择柱子类型， column position 中选择柱位，点击 Next 设置检测波长及缓冲液进口，点击 Nex

8、t 设置 Equilibration 参数， 点击 Next 设置 sample injection 参数通常选择( Manual/Sample direct loading )，点击 Next 设置设置平衡 过程中收集器收集流穿样品参数，点击 Next 设置收集器收集洗脱样品参数，点击 Next 设置洗脱参数。变 成完毕运行方法进行洗脱。具体参照： AKTA explorer 方法编辑标准操作规程 6 维护保养 6.1 实验结束时，应先用水置换出所有管路的缓冲液，再用20% 乙醇置换出所有管路的水。 应尽可能避免保存在装载缓冲液状态过夜。尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚，假如不能避 免应于次日尽早

9、用 System Wash Method 完成以蒸馏水将系统彻底清洗，才予以保存或再 更新使用其它缓冲液再次投入使用进行实验操作。 6.2 任何时间当不使用系统时，不要将 pH 电极留在流动池里。电极可作以下处理：从流动池 卸下 pH 电极。先以蒸馏水冲洗一遍，轻拭水份后，使其末端以其合适溶液泡浸保存。 6.3 若长时间不使用系统，除用蒸馏水彻底清洗系统外。取下柱和 pH 电极通过细管道替 换柱，并安装虚拟 pH 电极(如果使用)。然后用 20%乙醇再冲洗所有使用的管件通道和 所有的流动池一遍，然后并以此将系统保存。 UV 流动池也可以如上所述地用蒸馏水冲 洗然后用 20%乙醇通过流动池。 6.4 每月定期保养处理或当发现假峰等问题出现时，可拆下柱子将所有的缓冲液入口管件 置于 0.5mol NaOH 中，对所有的入口管件通路运行 System Wash Method ，以流速为每分 钟 5 毫升流速，将整个系统充分冲洗若 60 分钟。然后立即用超纯水，将整个系统运行 System Wash Method 加以冲洗 20 分钟。 6.5 当收集器托盘或收集用的管子发生变化时，应及时调整运行程序中的相应参数，以免 造成跳管或收集体积错误情况发生。