临床检验仪器学考试复习资料重点 (2)

1、 仪器学第一章 概论1.临检仪器特点：涉及的技术领域广，结构复杂，技术先进，精度高，对使用环境要求高。2.临检仪器分类：分离分析检验仪器，光谱分析检验仪器，目视检验仪器，细胞及分子生物学检验仪器，临床检验常规检验仪器，其他临床检验仪器。3.临床检验仪器的常用性能指标：灵敏度，误差，噪声，最小检测量，精确度，可靠性，重复性，分辨率，测量范围和示值范围，线性范围，响应时间，频率响应范围。第二章 离心机1.离心技术：应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术。（离心现象：指物体在离心力场中表现的沉降运动现象）。2.离心机工作原理：离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或悬浮密度的差异进行分离、浓缩

2、和提纯生物样品的一种方法。悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心作用，使悬浮的微小颗粒以一定的速度沉降，从而使溶液得以分离，颗粒的沉降速度取决于离心机的转速、颗粒的质量、大小和密度。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态密度、重力场的强度及液体的黏度有关。4.离心机按转速分可分为：低速，高速，超高速。5.离心机主要参数:最大转速、最大离心力、最大容量（离心机一次可分离样品的最大体积，通常表示为 mn,一次可容纳最多离心管一个离心管容纳样品最大体积，单位是 ml。）、调速范围、温度控制范围、工作电压、电源功率。第三章 显微镜1.光学显微镜的工作原理：利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成

3、像，供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。由两组会聚透镜组成光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组成为物镜；焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大，得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足，是通过仪器的机械调焦系统来实现的。2.光学显微镜的基本结构：包括光学系统（是显微镜的主体部分，包括物镜、目镜、聚光镜及反光镜）和机械系统（包括聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等

4、支持部件）3.显微镜的性能参数：物镜放大倍数和数值孔径、镜筒长度和盖玻片厚度、目镜放大倍数和最小视场宽度等。4.光学显微镜照明设置部件：光源、滤光器、聚光镜、玻片。第四章 紫外-可见分光光度计1.紫外-可见分光光度计工作原理：光照射到物质可发生折射、反射和透射，一部分光会被吸收，其能量以热释放出来。利用测量物质对某些波长光的吸收来了解物质特性。不同物质会吸收不同波长的光。改变入射光波长，并记录物质对不同波长光的吸收程度，得该物质吸收光谱，可根据物质吸收光谱分析物质结构、含量和浓度。光的吸收定律：即郎伯-比尔定律，是比色分析的基本原理。当一束单色光透过溶液后，由于光吸收了一部分光能，光的强度就会

5、减弱。设入射光强度 i ，当透过浓度为 c、液层厚度为 b 的溶液后，透射光强度为 i，透射光强度与入射光强度的比值为透光度，也叫透射率，用 t 表示。t=i/i 。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。a=-lg i/i =lg i /i=lg 1/t=kbc002.紫外-可见分光光度计的基本结构：光源（提供入射光，常用光源：钨灯或卤钨灯、氢1 灯或氘灯、汞灯等）、单色器（将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束）、吸收池（又称比色皿、比色杯、样品池或液槽，在可见光范围内，常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区，需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石制作。）、检测器

6、（将光信号转换为电信号）、信号显示系统（把放大的信号以适当的方式显示或记录下来）。第五章 血细胞分析仪1.血细胞分析仪（bca）:又称血细胞自动计数仪（abcc）、血液自动分析仪（aha）等，是对一定体积全血内血细胞数量和异质性进行自动分析的常规检验仪器。其主要功能是血细胞计数、白细胞分类、血红蛋白测定、先关参数计算等。2.电阻抗型血细胞分析仪的计数原理：血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体，其电解质比稀溶液大。当血细胞通过检测器微孔的孔径感受区时，其内外电极之间的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律，在恒电

7、流电路上，电压变化与电阻变化成正比，电阻值又同细胞体积成正比，血细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道，经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出 wbc、rbc、plt。（该原理称库尔特血细胞检测原理）2.联合检测型血细胞分析仪的细胞计数原理:联合检测型 bca 主要体现在白细胞分类部分的改进，实质是选用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸性、嗜碱性粒细胞检出，完成较准确的白细胞五分类并发现异常血细胞，克服了电阻抗法的不足，联合分类技术是以流式技术为基础在联合使用流式、激光、射频、电导、电阻

8、抗、细胞化学染色等多项技术进行细胞分析，并综合分析监测数据，从而得出较为准确的“五分类”结果。其共有特点是均使用了流式细胞技术，形成流体动力聚焦的流式通道，使单细胞流在鞘液的包裹下通过流式通道，将重叠限制到最低限度。（容量、电导、光散射联合检测原理）、（多角度激光散射、电阻抗联合技术原理）、（光散射与细胞化学联合计数原理）、（电阻抗、射频与细胞化学联合计数原理）。容量、电导、光散射联合检测原理（vcs）：体 积 v 表示应用电阻抗测定的细胞体积大小，电导性 c 可粗略了解细胞质和细胞核中的颗粒大小和密度，光散射 s 表示对细胞颗粒的构型和颗粒质量的鉴别能力。采用高频电磁探针测量单个细胞的电导性

9、，可以确定细胞内核浆比例，质粒的大小和密度，从而区别体积完全相同而性质不同的两个细胞。多角度激光散射、电阻抗联和计数原理：是将同一白细胞用多个角度的激光照射，测定不同角度下的散射光强度，从而对白细胞进行分类；再用电阻抗计数红细胞、血小板或某一类白细胞。光散射与细胞化学联合计数原理：应用激光散射与细胞化学染色技术对白细胞进行分类计数。其白细胞分类原理是利用细胞大小不同，其散射光强度也就有差异，再结合五种白细胞结合化学染料的差异，计算机综合分析同一白细胞在不同角度下的散射光强度和染色差异，得到较准确的白细胞分类结果。电阻抗、射频与细胞化学联合计数原理：是利用电阻抗、射频这一成熟细胞计数技术结合细胞

10、化学技术，通过 4 个不同的检测系统对白细胞、幼稚细胞进行分类和计数。3.网织红细胞计数分析基本原理：采用激光流式细胞分析技术与细胞化学荧光染色技术联合对网织红进行分析，利用网织红中残存的嗜碱性物质rna，在活体状态下与特殊荧光染料（新亚甲蓝等）结合，激光激发产生荧光，荧光强度与rna 含量成正比；用流式细胞技术检测单个的网织红的大小和细胞内 rna 含量及 hb 含量。由计算机处理，得出网织红技术及其他参数。4.血细胞分析仪测定血红蛋白（hb）的原理：除干式离心分层型、无创型外，各种 bca对 hb 测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后，rbc 溶解释放出 hb，后者与溶血剂中有

11、关成分形成 hb 衍生物，进入 hb 测试系统。在特定波长（多为530550nm）下进2 行光电比色，吸光度值与所含 hb 含量成正比。与不同型号 bca 配套的溶血剂不同，形成 hb衍生物也不同，吸收光谱也有差异，但最大吸收峰都接近 540nm，因为国际血液学标准化委员会（icsh）推荐的氰化高铁（hicn）法的最大吸收峰在 540nm，仪器 hb 的校正必须以 hicn值为标准。5.血液凝固分析仪 aca：是采用一定分析技术，对血栓与止血有关成分进行自动检测的临床常规仪器。6.血凝仪检测原理:血凝仪使用的主要检测技术方法有凝固法、底物显色法、免疫学法，干化学法等。凝固法是血栓/止血实验中最

12、基本、最常用的方法。半自动血凝仪以凝固法检测为主，全自动血凝仪还可使用底物显色发和免疫学法等。7.凝固法：是通过检测血浆在凝血激活剂作用下一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，再由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果的方法，故也称生物物理法。按测量原理可分为电流法、超声分析法、光学法、磁珠。第六章 临床血液流变学检验仪器1.血液粘度计分类：（1）.按工作原理：分为毛细管粘度计和旋转式粘度计。前者按结构分为奥氏粘度计和乌氏粘度计，后者按结构分为筒-筒式、锥-板式、锥-锥式、棱-球式等。（3.红细胞沉降率：是指红细胞在一定条件下沉降的速度，简称血沉。是应用于临床诊断和观察某些疾病活动情

13、况的一项重要参数。在血液流变学测定中常作为红细胞聚集、红细胞表面电荷、红细胞电泳的通用指标，其结果对许多疾病的活动、复发、发展有监测作用。4.自动血沉仪工作原理：所以自动血沉仪的原理和方法都是建立在魏氏法的基础上，利用光学阻挡原理进行测量；也有采用红外线障碍法或激光光源扫描微量全血进行检测。5.红细胞沉降曲线：是表示血沉管内血液高度 h(mm)与时间 t(min)关系的曲线。分为红细胞不下沉的悬浮期、红细胞缗线状形成的聚集期、红细胞等快速下降的快速沉降期、红细胞开始积压的缓慢沉降期。6.影响红细胞（rbc)沉降的因素：红细胞的形态和大小、红细胞的变形性、红细胞的聚集性、红细胞间的相互作用、血细

14、胞比容、血浆介质及沉降管的倾斜度等。7.自动血沉仪基本结构：光源：采用红外光源自动血沉分析仪的质量控制中标本的采集与抗凝：静脉采血：要求在 30 秒内完成 1ml 左右的采血，且不能淤血和溶血。第七章 临床尿液检验仪器1.尿液分析：是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液的物理学检查和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料对肾和尿路疾患的诊断、鉴别诊断以及疾病的严重程度和预后的判断，都有极重要的意义。2.尿液分析仪的检测原

15、理：尿液分析仪的试剂带结构：单项试剂带以滤纸为载体，将各种试剂成分浸渍后干燥，作为试剂层，再在其表面覆盖一层纤维素膜作为反射层。一般把这样一条上面附有试剂块的塑料条叫做试剂带。尿液侵入试剂带后，与试剂发生反应，可产生颜色变化。试剂带的反应原理：ph 测定：ph 指示剂原理尿蛋白质测定：ph 指示剂蛋白质误差的远离尿葡萄糖测定：一种是基于葡萄糖氧化酶法原理，另一种是基于铜还原法的原理尿酮体测定：采用亚硝基铁氰化钠反应测量酮体尿隐血测定：血红素具有过氧化物酶样作用，能催化过氧化氢释放出新生态氧，使色原氧化而显色，其颜色深浅与血红蛋白含量有关尿胆红素测定：采用重氮反应法原理尿胆原测定：采用 ehrl

16、ich 醛反应原理或重氮反应原理尿亚硝酸盐测定：尿亚硝酸盐试验尿白细胞测定尿比重测定 11 尿维生素 c 测定 12 尿液颜色 13 测定尿浊度测定3 试剂带的应用：不同型号的尿液分析仪一般使用自己配套的专用试剂带。试剂块要比测试项目多一个空白块，有些仪器还多一个位置参考块。各试剂块与尿液中被测定成分反应而呈现不同颜色。空白块是为了消除尿液本身的颜色及试剂块分布的状态不均等产生出测试误差，提高测量准确度而设置的。2).尿液分析仪的检测原理：把试剂带浸入尿液中后，除了空白块外，其余的试剂块都因和尿液发生了化学反应而产生了颜色的变化。试剂块的颜色深浅与光的吸收和反射程度有关，颜色越深，相应某种成分

17、浓度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率也越小；反之，反射率越大。因为颜色的深浅与光的反射率成比例关系，而颜色和深浅又与尿液中各种成分的浓度成比例关系，所以只要测得光的反射率即可以求得尿液中各种成分的浓度。尿液分析仪一般采用双波长法测定试剂块的颜色变化。3.尿液分析仪的质量控制：检测前的质量控制、检测中的质量控制、检测后的质量控制。尿液分析仪的使用注意事项：1.保持仪器的清洁，才能维持良好的运行。2.保证使用干净的取样杯，使用新鲜的混合尿液，标本留取后，一般应在超过 2小时内进行检验。3.不同类型的尿液分析仪使用不同的尿试带，在试剂带从冷藏温度变成室温时，不要打开盛装试剂带的瓶盖。每次

18、取用后应立即盖上瓶盖，防止试剂带受潮变质。4.试剂带浸入尿样的时间为2秒，过多的尿液标本应用滤纸吸走，所有试剂块包括空白块在内都要全部浸入尿液中。 5.仪器使用最佳温度应在 2025，尿液标本和试剂带最好也维持在这个温度范围内。 6在报告检测结果时，由于各类尿液分析仪设计的结果档次差异较大，不能单独以符合代码结果来解释，要结合半定量值进行分析，以免因定性结果的报告方式不够妥当，给临床解释带来混乱。尿液分析仪的质量控制：1.检测前的质量控制:包括正确的尿液收集方法、有效的标本标记与识别、适宜的防腐剂或冷藏装置、在规定时间内完成检测等，同时了解患者可能影响尿化学检测的进食及药物的使用情况等。2.检

19、测中的质量控制：包括严格、规范、正确的实验操作和合理的应用尿液指控物来监控、判断尿液分析仪是否处于最佳或正常的工作状态。3.检测后的质量控制：主要体现在检验报告单的审核和发放。除了注意检验报告的文字书写或计算机录入有无错误外，更应分析检测结果间的关联性，即尿液分析仪的结果与显微镜镜检结果的相互关系。另外还要注意维生素 c含量对其他检测结果的影响。4.流式全自动尿有形成分分析仪工作原理：流式全自动尿有形成分分析仪的测定是应用流式细胞术和电阻抗的原理进行的。一个尿液标本被稀释并经染色液染色后，靠液压作用通过鞘液流动池。反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以

20、单个纵列的形成通过流动池的中心（竖直）轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的荧光强度，从染色尿液细胞发出的荧光，主要反映细胞的定量特性（如细胞膜、核膜、线粒体和核酸）、前向散射光强度，它成比例地反映细胞的大小和电阻抗的大小（电阻抗电信号与细胞的体积成正比）。仪器将这种荧光、散射光等光信号转变成电信号，并对各种信号进行分析，最后得到每个尿液标本产生出的直方图和散射图、通过分析这些图形，即可区分每个细胞并得出有关细胞的形态。5,。流式全自动尿有形成分分析仪仪器结构：包括光学检测系统(将光信号转化为电信号，输送到微处理器）、液流系统（射出鞘液）、电路系统（吸收能量，发出光电子

21、）和自动进样装置。第八章 临床自动生化分析仪1.自动生化分析仪器及特点：自动生化分析仪器是将生物化学分析过程中的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反应、自动检测、结果计算、数据处理和打印报告，以及实验后的清洗等步骤自动化的仪器。这类仪器一般都具有灵敏、准确、快速、节约和标准化等优点，4 不仅工作效率高，而且减少了主观误差，稳定了检验质量。2. .根据其自动化程度的不同，可分为全自动化和半自动化 2.根据可同时测定项目的数量，可分为单通道（每次只能检测一个项目）和多通道（可同时检测多个项目）3.根据仪器的功能和复杂程度，可分为小型、中型、大型及超大型 4.根据仪器反应装置结构的不同，可分为连续流动

22、式，离心式、分立式和干化学式。3.分立式自动生化分析仪的工作原理：按手工操作的方式编排程序，并以有序的机械操作代替手工操作，用加样探针将样品加入各自的反应杯中，试剂探针按一定时间自动定量加入试剂，经搅拌器充分混匀后，在一定条件下反应。反应杯同时作为比色杯进行比色测定。各环节用传送带连接，按顺序依次操作，故称为“顺序式”分析。除常用的反应杯转盘式或轨道式分立式自动生化分析仪外，还有一种袋式分立式自动生化分析仪，其试剂袋在均匀透明的塑料夹中形成特殊的测试管，一袋一检测。测试袋被连续传送系统送到分析区，在混合器处经机械敲击，样品和试剂充分混合反应，在比色计处经特殊装置的作用，测试袋形成光经 1cm的

23、比色杯，监测后的废测试袋被排出。该类仪器污染少、灵活、准确，分析项目可达 60项。但测试袋是一次性的。4.干化学式自动生化分析仪的工作原理：将待测液体样品直接加到已固化于特殊结构的试剂载体上，以样品中的水将固化与载体上的试剂溶解，再与样品中的待测成分发生化学反应，是集光学、化学、酶工程学、化学计量学及计算机技术于一体的新型生化检测仪器。5、自动生化分析仪的基本结构：样品处理系统、检测系统（1.光源（多采用氙灯）2.分光装置（ 目前多用光栅。使用后分光技术，可以在同一体系中测定多种成分。如果比色池中有多种吸收特征不同的组成物质，当复色光通过后，各物质分别对各自的特征性光波产生吸收，之后再分成光谱

24、对不同的波长进行测定，可以在同一体系中同时得到多组分结果，无需移动仪器的任何部分，稳定性好，速度快，噪声低，分析精确度和准确度高，故障少。光栅使用寿命长，无需任何保养。）、计算机系统。6.自动生化分析仪的相关参数：基本分析参数（1）终点分析法：又称平衡法，是通过测定反应开始至反应达到平衡时的产物或底物浓度的总变化量来求出待测物浓度或活性的方法。可分为：一点法：指样品和试剂混合后，反应一定时间到达终点时，通过吸光度的检测计算待测物浓度。该法简便，但易受样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。单试剂型的生化检测项目需选用一点法，如钙、磷、镁的测定两点法：常应用于具有双试剂的检测项目。加入样品后分别

25、读取试剂 i、ii吸光度值，即样品空白值和实际呈色反应值，计算待测物浓度。该法可在一定程度上消除样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。目前大多数生化检测项目都可使用双试剂，如血清总蛋白、白蛋白、总胆红素、结合胆红素、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的测定。（2）连续监测法：又称速率法，是通过连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的吸光度，根据吸光度随时间的变化求出待测物浓度或活性的方法。可分为两点速率法和多点速率法。（3）免疫投射比浊法：用于测定产生抗原抗体特异性浊度的项目，在光源的光路方向测量投射强度来测定物质浓度，常采用终点法。7、反应温度 通常设有 25、30、37等温度。一般选用 37

26、检测波长 可选择单波长或双波长，自动生化分析仪常用双波长或多波长。8、自动生化分析仪日常维护需注意哪些方面： 仪器工作环境：仪器室要有足够的空间，环境温度应恒定于 15-30度之间，相对湿度应控制在 40%-85%之间，防尘防腐蚀，防振防电磁干扰。流动比色池：必须每天清洗。如长时间未开机，开机后要用去离子水浸泡 24小时后再用清洗液清洗。每测完一个项目，必须彻底清洗。单色器和检测器：注意防潮和绝缘。仪器管道系统：严格遵循操作手册中清洗维护程序，必须注意样品中不能混有纤维蛋白、灰尘等不溶性物质，以免管道阻塞。日常维护与保养：严格按照操作手册，并根据实际使用情况，进行仪器日维护、周维护、月维护、不

27、定期维护等。5 第九章 临床电化学分析仪1.临床电化学分析仪：是利用电化学分析技术设计的。电化学分析法是建立在溶液电化学性质基础上的分析方法。溶液的电化学性质是指电解质溶液通电时，其电位、电流、电导、电量等电化学特性随化学组分和浓度的变化而变化的性质。电化学分析法就是利用这些性质，通过点击变换器，将被测物质的浓度转变为电学参数而进行测量的方法。2.血气分析仪：是利用电极对人体血液中酸碱度、二氧化碳分压（pco）和氧分压（po）22进行测定的仪器。根据所测得的 ph、pco2、po2参数及输入的血红蛋白值，血气分析仪克进行计算而求出血液中的其他参数。3.ph电极和 ph参与电极：血气分析仪使用毛

28、细管 ph玻璃电极和甘汞电极测量溶液的酸碱度。ph玻璃电极毛细管，直径约为 0.5mm，膜厚为 0.1mm左右，由钠玻璃和锂玻璃熔融吹制而成。ph参比电极为甘汞电极，内充 kcl溶液，有的采用饱和型，有的采用非饱和型。pco2电极：是一个气敏电极，其前端有一层半透膜，只允许 co2分子通过，其内部有一玻璃电极和参比电极。po2电极：是一种 clark电极，属于气敏氧电极，也是极谱电极。4、电解质分析仪常见故障：仪器不工作、仪器不能定标、检测不到参比液、检测不到电极、堵塞液体通路、检测不到样品液。第十章 临床微生物检测仪器1.目前微生物鉴定的自动化系统分两类，一类是自动血培养检测和分析系统。主要

29、功能是检测标本中是否有微生物存在，计算机自动扫描进行连续监测，当微生物生长代谢导致某些生长指数超标时，仪器自动报警提示有细菌生长；另一类是自动微生物鉴定及药敏分析系统。主要功能是将分离的微生物进行鉴定，同时进行抗菌药物敏感试验。将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。2.自动血培养系统工作原理：自动血培养系统主要由培养系统和检测系统组成。培养系统包括培养基、恒温装置和振荡培养装置。具有培养基营养丰富，检测灵敏度高，检出的时间短，检出病原菌的种类多，抗干扰能力强、污染明显减少等特点。检测系统由计算机控制，

30、对血培养实施连续、无损伤瓶外监测。其工作原理主要是通过自动检测培养基中的浑浊度、ph值、代谢终产物 co 的浓度、荧光标记底物或代谢产物等变化，定性地检测微生物的存在。23.自动血培养系统的基本结构：培养瓶、培养仪和数据管理系统。4.微生物自动测定及药敏分析系统的工作原理：1.）鉴定原理：采用微生物数码鉴定原理。基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。随着电脑电脑技术的进步，vitek-ams系统，每个用于鉴定的测试卡内有 30项生化反应，从第 1项开始，每 3项生化反应归为一组，共 10组。2.）抗菌药物敏感试验的检测原理：药敏测试板：药敏测试板分为常规测

31、试板和快速荧光测试板。常规测试板原理为比浊法，如vitek系统，在含有抗菌药物的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药；快速荧光测试板原理为荧光法，如 sensititre系统，在每一反应孔内参与荧光底物，若细菌生长，表面特异酶系统水解荧光底物，激发荧光，反之没有荧光。以最低药敏浓度仍无荧光产生的浓度为最低抑菌浓度（mic）。第十一章 临床免疫检验仪器免疫分析是临床免疫学研究的重要工具。1.酶免疫分析技术 eia：临床应用最多，具有高度的特异性和敏感性，成为传染病血清学标志物（如肝炎、艾滋）、肿瘤标志物和内分泌等各种临床免疫指标监测的主导技术。可分为非均相（或异相）酶免疫

32、测定和均相酶免疫测定两种。均相酶免疫分析法：以激素、药物等小分子抗原或半抗原为主，测定过程中无需分离结合的和游离的酶标记物，实验在液相中进行，可直接用自动生化分析仪进行测定。非均相酶免疫分析法：是在抗原抗体反应达平衡后，将游离的与抗原或抗体结合的酶标记6 物加以分离，再通过底物显色进行测定，可分为固相和液相酶免疫法。固相酶免疫法为 elisa，即酶联免疫吸附测定，是临床上最常用的免疫分析方法，目前临床常用的酶免疫分析仪都是基于 elisa技术。微孔板式 elisa使用的载体为 96孔板。2.酶标仪与普通光电比色计的不同之处在于，酶标仪比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板；以垂直光束通过微孔板

33、中的待测液。现在大部分的酶标仪还加上了判读系统和软件操作分析系统等，可进行资料录入、结果计算、储存信息和质控管理等操作分析，在各类实验室已广为应用。3.酶免疫分析仪性能指标：滤光片波长精度检查及其峰值测定、灵敏度和准确度、通道差与孔间差检测、零点漂移、精密度评价、线性测定、双波长评估。4.发光免疫分析种类：全自动化学发光免疫分析（固抗原相竞争法，双抗体夹心法，双抗原夹心法）、全自动电化学发光免疫分析。5、发光免疫分析法根据示踪物检测的不同分为：荧光免疫测定、化学发光免疫测定和电化学发光免疫测定。化学发光免疫根据标记物的不同分为：化学发光免疫分析、微粒子化学发光免疫分析、电话学发光免疫分析、化学

34、发光酶免疫分析和生物发光免疫分析等。6.时间分辨荧光免疫检测原理：用镧系三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标记抗体、抗原、核酸探针等物质。当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，排除标本中非特异性荧光的干扰，所得信号完全是稀土元素螯合物发射的特异荧光，测定免疫反应最后产物的特异荧光信号。根据荧光强度判断反应体系中分析的浓度，达到定量分析的目的。目前国内已经生产出不同型号的时间分辨荧光免疫强度测定仪，并有相应配药试剂盒可供临床实验室选用。7.时间分辨荧光免疫分析仪特点：特异性强、敏感度高、标记物稳定、荧光信号强。荧光信号强：荧光检测分析中加入一种酸性

35、增强液，稀土离子从免疫复合物中解离，和增强液中的一些成分形成一种稳定的微囊，当微囊被激光激发后，稀土离子发出长寿命的荧光信号，使原来微弱的的荧光强度增强 100万倍，从而使测量的线性范围更宽，重复性更好。8、时间分辨荧光免疫检测动态范围宽，可达 45个数量级；标记物制备简单，稳定性好，有效时间长，多数可达 6个月；标记蛋白时反应条件温和，免疫活性很少受损；测量快速，每秒测一个样品；易于自动化；已开发出性能优良的数据处理软件，以及多标记物的使用等都是其突出的特点。9、目前时间分辨荧光免疫分析仪已广泛用于蛋白质和多肽激素、半抗原、病原体抗原 /抗体、肿瘤标志物、干血斑样品、核酸等的分析，应用于测定

36、天然杀伤细胞的活力。第十二章 临床即时检验仪器1.即时检验 poct：也称床边检验，是检验医学发展的新领域。关于poct有多种解释，指在患者身边，由非检验专业人员利用便携式仪器快速分析患者标本并准确获取结果的分析技术，或者说测试不在主实验室而在一个可以动的系统内进行。它以作为大型自动化仪器的补充，节省分析前，后标本处理步骤，缩短标本检测周期，快速准确报告检验结果，节约综合成本等优势得到人们青睐。目前，国内外均没有一个统一的名称可概括 poct的确切含义，但围绕缩短检验周期这一核心，将 poct译为“即时检验”，更能表达其内涵。2.即时检验的特点:仪器小型化，便于携带；操作简单化一般 34个步骤

37、即可完成检测；缩短检验周期，报告即时；能获得权威机构的质量认证；仪器和配套试剂中应配有质控品，可检测仪器和试剂的工作状态；仪器检验项目具备临床价值和社会学意义；仪器的检测费用合理；仪器试剂的应用不会造成对患者和 工作人员的健康损害和对环境的污染等。3、免疫荧光测定技术相关 poct仪器：基于新的时间分辨荧光免疫测定（trfia）技术的有时间分辨荧光免疫测序仪，该仪器采用镧系元素 （eu）螯合物作为其荧光标记物，专为中小型实验室、急诊室和医生办公室而设计。7 4、“poct”的组成应包括：地点，时间，保健，照料，检验等方面，poct具有更新，更快，更方便，更准确等特点，受到了医院和患者的青睐。5

38、、poct与传统实验室检验的主要区别：6、快速血糖测试仪的检验原理：目前快速检测血糖仪多采用葡萄糖脱氢酶法，根据酶电极的响应电流与被测血样中的葡萄糖浓度呈现线性关系来计算血标本中的葡萄糖浓度值。当被测血样滴在电极的测试区后，由于电极施加有一定的恒定电压，电极上固定的酶与血中的葡萄糖发生酶反应，血糖仪显示葡萄糖浓度值。第十三章 pcr核酸扩增仪1.聚合酶链反应（pcr）:是一种体外核酸扩增技术，其中定时荧光定量 pcr基因扩增仪以其特异性强，灵敏度高，重复性好，定量准确，速度快，全封闭反应等优点日渐成为分子生物学研究中的重要工具。pcr核酸扩增仪的工作原理，分类，结构，性能指标，基本操作，故障排

39、除及临床应用等。2.pcr技术的基本原理类似于 dna的天然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。pcr核酸扩增仪的工作原理:pcr核酸扩增仪是利用 pcr技术对特定基因做体外的大量合成，用于以检测 dna/rna为目的的各种基因分析。其中工作的关键是温度控制，也就是由“变性温度，退火温度，延伸温度”等程控循环升降温度的过程。3.实时荧光定量 pcr核酸扩增仪由 pcr系统和荧光检测系统组成实时荧光定量 pcr技术原理：荧光实时定量 pcr是在 pcr反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，

40、通过检测荧光信号，可以实时监测整个 pcr 反应过程，最好通过标准曲线对未知模板进行定量分析。pcr仪通常由两部分组成。即pcr系统和荧光检测系统。6、pcr核酸扩增仪的性能指标： 温度控制：1.温度的准确性：是指样品孔温度和设定温度的一致性，一般要求显示温度和样品的实际温度精确到 0.1。2.温度的均一性：是指样品孔间的温度差异，一般要求样品基座温差小于 0.5。3.升降温的速度，升降温速度快，能缩短反应进行的时间，提高工作效率，也缩短了可能的非特异性结合反应的时间，提高了 pcr反应特异性4.不同模式下的相同温度特性： 主要是针对梯度 pcr仪而言。现在的 pcr仪已经拥有更强大更灵活的功

41、能，可以进行不同功能模式的转换。带梯度功能的 pcr仪，不仅应考虑梯度模式下不同梯度管排间温度的均一性和准确性，还应考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。5.热盖温度：目前的 pcr仪通常都配备热盖，可使样品管顶部温度达到 105左右控8 制温度范围一般为 30-110，避免蒸发的反应液凝聚于管盖而改变 pcr 反应体积，无需再向反应管内添加石蜡油，减少了后续实验的麻烦。荧光检测：ct 值重复性误差：ct 值:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，每个模板的 ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，ct 值越小，一般要求 cv2.5%（三

42、）其他：软件功能:新型的 pcr 仪都常规使用优质配套软件，此类软件易学易用，还具有实时信息显示，记忆存储多个程序，及自动倒计时，自动断电保护等功能。第十四章 全自动 dna 测序仪和蛋白质自动测序仪1.目前 dna 测序仪的工作原理主要利用 sanger 双脱氧链末端终止法或 maxam-gilbert 化学降解法。目前使用的全自动 dna 测序仪都是通过凝胶电泳技术进行 dna 片段的分离2、多色荧光标记法：多色荧光标记法的荧光染料掺入方式有两种。第一种是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的 5端，称为荧光标记引物法。3、目前使用的全自动 dna 测序仪都是通过凝胶电泳技术进行 dna

43、片段的分离第十五章 流式细胞仪1.流式细胞仪（fcm)的分析原理:将特异荧光染料染色的单细胞悬液放入样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入 fcm 的流动室，沿流动室的轴心向下流动形成样品流。流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕样品流的鞘液流。鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，并转换为电子信号，再经过模数转换器输入计算机。计算机通过相应的软件储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、核酸含量、酶和

44、抗原的性质等信息。如果在压电晶体上加上频率为 30khz 的信号，就会使其产生同频率的机械振动，流动室也随之振动，于是通过测量区的液柱断裂成一连串均匀的液滴。由于各类细胞的特性信息在细胞形成液滴以前在测量区已被测定，并储存在计算机中，因此，当要分选某类细胞时，fcm 就将在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，而不符合分选条件的含细胞液滴和不含细胞的空白液滴不被充电，即不带电荷。带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的，分选出的细胞可以进一步分

45、析、培养和研究。3.流式细胞仪信号检测与分析系统：1）散射光信号 散射光分为前向角散射和侧向角散射，散射光不依赖细胞样品的染色等制备技术，称为细胞的物理参数，也称为固有参数。前向角散射：前向角散射与被测细胞的大小有关，确切地说与细胞直径的平方密切相关。侧向角散射：侧向角散射是指与激光束正交 90方向的散射光信号。侧向散射光对细胞膜、细胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供细胞内精细结构和颗粒性质的信息。2)荧光信号 当激光光束与细胞正交时，一般会产生两种荧光信号。一种是细胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号，称为细胞自发荧光；另一种是标记细胞内的特异荧光素受激发得到的荧光信号，通过对这类荧光信号的

46、检测和定量分析能了解所研究细胞的数量和生物颗粒的情况。荧光信号的面积是对荧光光通量进行积分测量，一般对dna 倍体测量时采用面积，这是因为荧光脉冲的面积比荧光脉冲的高度更能准确反d映na 的含量。荧光信号的宽度常用于区分双联体细胞。第十六章 临床电泳分析仪器1.电泳：指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。2.电泳的基本原理：电泳的方式和方法虽有多种，但其基本原理是相同的。物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电9 性质、颗粒形状和大小

47、不同，它们在一定的电场中移动方向和移动速度也不同，因此可将它们分离。3.影响电泳的外界因素：电场强度、溶液的 ph值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用。4.常用电用泳方法：纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳（用于微量异常蛋白的检测）、凝胶电泳、等电聚焦电泳、等速电泳、双向凝胶电泳（二维电泳）、免疫电泳（该技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度；二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而分开，再与抗体起反应，从而使此方法更为微量化、多样化。其应用范围正在日益扩大。免疫电泳可用于的研究：抗体和抗原的相对应性；测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其他特性，可

48、以确定该复合物中含某种蛋白质；鉴定抗原或抗体的纯度。）5、毛细血管电泳采用内径为 20-100um的毛细管为工具）第十七章 荧光光谱分析仪和原子光谱分析仪第十八章 色谱分析仪器1.色谱法的基本原理：色谱分离中的两相是指系统具有一个有大比表面积的固定相（可以是固体或以某种方式固定了的液体）和一个能携带待分离混合物流过固定相的所谓流动相（可以是气体或液体）。2.色谱仪的分类：目前比较成熟的色谱仪主要是气相色谱仪和高效液相色谱仪两大类。就仪器的组成来说两者也极为相似，其主要部分都是由流动相供给系统、分离系统（色谱柱）、检测系统、数据处理记录系统、温度控制和其他控制系统等组成。2.气相色谱柱和温度控制

49、：气相色谱柱：1固定相（整个气相色谱系统的核心是分析柱）2柱管形状和尺寸。温度控制：在气相色谱仪的使用过程中，必须使用气态样品（如果是液态样品需要经过气化处理），温度对样品在色谱柱上的分离过程、对许多检测器（如热导、电子捕获、示差折光等）的检测结果等都有很大影响。因此，必须对色谱柱箱、检测器和气化室等实行温度控制。其关键在于温度条件的稳定性，它将直接影响色谱柱的分离效率，保留参数的重复性以及检测器的性能。温度对于固定相也非常重要。操作时一定要知道所用固定相温度的极限，把全部操作保持在临界温度以下 1015进行。这将有助于延长柱子的使用寿命和避免检测器与其他装置受固定相“流失”所造成的污染。第二

50、十一章 生物安全柜1.生物安全柜(bsc)是防止操作者和环境暴露于实验过程中产生的生物气溶胶的负压过滤排风柜，是防止实验室获得性感染的主要设备。2.生物安全柜的工作原理：主要是将柜内空气向外抽收，使柜内保持负压状态，安全柜内的气体不能外泄从而保护工作人员。外界空气经高效空气过滤器过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；同时，柜内的空气也需经过高效空气过滤器过滤后再排放到大气中以保护环境。3.生物安全柜的分类：根据气流及隔离屏障设计结构，将生物安全柜分为，级。级生物安全柜 是指用于保护操作人员与环境安全，而不保护样品安全的通风安全柜。级生物安全柜 是指用于保护操作人员，环境，以及样品安全的通风安全柜，也是临床生物防护中应用最广泛的一类生物安全柜。级生物安全柜 是具有完全密闭，不漏气结构的通风安全柜。（安全柜分级不知考否）4.生物安全柜内实验操作注意事项:1.个人防护，在使用安全柜时必须穿防护服，戴防护手套，最好戴口罩和帽子，根据需要戴防护眼罩或面罩。 2.安全柜内物品摆放原则，柜内放置的仪器和材料等物品保持最低数量，按照从清洁区到污染区的原则摆放，所有物品尽可能放在工作台中后部，前玻璃门进气口不能被纸、设备或其他东西