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1、MTS或CCK8细胞增殖及毒性试验一、所需试剂1、 CellTiter 96? AQueousOneSolution Cell ProliferationAssay试剂盒（-20 C避光保存，4C保存6周，黄色）（1）MTS新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞 数在一定范围内呈高度相关。（2）PES吩嗪硫酸乙酯，一种电子偶联剂，具有增强的化学稳定性， 这使它可与MTS混合形成稳定的溶液2、Cell Counting Kit-8 （简称CCK-8）（保存条件同上，紫色）（1） WST-8 2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-

2、3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐（2）1-Methoxy PMS： 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯3、药物或毒素（药物IC50等用到）4、96孔板二、实验步骤1、种板（96孔板）（个/孔），先配总管再加样（多算5孔的量来配 总管，以免不够用）细胞种类DU145PC3LNCaP22RV1RWPE1种板数1000150020004000每种处理设置3个副孔（空白组可1个），加入100卩I培养基：（1）细胞增殖实验：设置NC组，处理组，空白组，6天时间，平均 每孔 1000-2000 个细胞（2）毒性或药物或放疗IC50 :设置梯度给药组（包括不给药组）， 空白

3、组，平均每孔 5000-8000 个细胞2、在37 C, 5% CO2的环境下培养（1） 增殖：8h或24h（细胞贴壁时间），也可种板后直接测第一次， 作为基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS每孔加20 卩 I , CCK8加 10 卩 I ）（2）毒性和药物：培养24h后加入药物培养48小时及以上3、增殖实验每天测量一次，以 100全培养基：20MTS比例配制总管（CCK眇 100:10 ）4、 吸掉96孔板内待测孔内培养基，每孔加入 120（11稀释后的MTS试剂（CCK8加入 1101 I）4、在37 C, 5% CO2的环境下孵育1-4个小时（一般选2h）5、选取波长，MTS选492nm CCK8选450nm,读取吸光度值，记录结 果，以时间为横坐标，每日吸光值 / 基准值为纵坐标绘制细胞生长曲 线。三、注意事项1、CCK8原理WST-8在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为 具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（ Formazan dye ） 。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比2、整个过程不可产生气泡，以免对测光产生影响3、如果需要以后检测每孔加入 25ul 10%SDS终止反应，避光保存 于 室温的湿盒中最多可保存 18 小时4、可在待测孔四周加入PBS防止外围的待测孔液体挥发影响结果。（更新于 20

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