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文档简介

1、血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液1 血红蛋白与核黄素的凝胶层 析分离电液 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液2 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液3 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液4 吸附层析分配层析 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液5 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液6 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液7 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液8 商品名为Sephadex，是最传统的凝胶介质，由葡 萄糖与3-氯-1,2环氧丙烷（交联剂)相互交联而成， 交联度由环氧氯丙烷的百分比控制。由于交联度不 同，Sephadex颗粒孔隙大小不同。交联度可用“吸 水量”表示。即每克干凝胶所吸收的水

2、分质量。商 品凝胶的型号采用“吸水量”的10倍数字来表示。 例如每克凝胶吸水量为2.5g即定为G-25型。常用的 葡萄糖凝胶有G-25,G-50,G-100,G-150和G-200几种 型号。葡萄糖凝胶最大的缺点是机械强度不高，凝 胶颗粒易变形，分辨率不高。但葡萄糖凝胶的价格 最低。 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液9 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液10 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液11 实验操作 l（1）凝胶处理。将sephadex g-25凝胶干粉放入过量水中 浸泡24h或沸水水浴2h。浸泡后，搅动凝胶再静置，待凝 胶沉积后，倾去上层细粒悬液，如此反复多次。 l（2）层析柱的预

3、备。用清洗剂将层析柱仔细清洗干净。 清洗过程中不能使用毛刷，以免擦伤层析柱子内壁，影响 层析分离效果。固定好层析柱各处的接口，用水检查层析 柱各处的接口密封性。将清洗后的层析柱垂直固定在铁架 台上。自柱底端出口的聚乙烯管内注入溶液以除去柱管内 和尼龙网底部的气泡，待气泡排出后，使溶液在底部留至 35cm高既可关闭出水口。 l（3）装柱。 将处理好的凝胶在烧杯内用1倍提及的洗脱 液搅拌成悬浮液，自柱顶部沿管内壁缓缓加入柱中。待底 部凝胶沉积至5cm左右时，缓缓打开低端出口管，随之继 续缓慢添加凝胶悬浮液直至凝胶体积沉积至25cm高度为 止。操作中注意防止气泡与节痕产生。 血红蛋白与核黄素的凝胶层

4、析分离电液12 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液13 v（5）加样与洗脱。 打开平衡好的层析柱低端出口， 使柱内溶液流向与床表面相切时关闭出口。将吸有 0.5ml样品的加样滴灌在床表面上1mm处沿管内壁 轻轻转动加样，加完后，打开底端出口使样品流至 床表面，关闭出口，用少量洗脱液同样小心清洗管 内壁12次，使样品流至床表面，然后加洗脱液加 至距床表面23cm高，接上高位贮液瓶并调好流速 即开始洗脱。注意在加样和洗脱过程中应缓慢加入 液体，防止冲坏床表面，影响分辨率。 v（6）收集与测定。 收集时可使用自动部分收集器 或手工操作，每管接洗脱液3ml.直至第二个洗脱峰 降至基线附近。收集后用721E型分光光度计在 451nm波长处以洗脱液为空白，对每管

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