食用菌制种基本条件

1、第三章食用菌菌种生产第三章食用菌菌种生产 本章重点：食用菌制种条件，制种工具的使本章重点：食用菌制种条件，制种工具的使 用。用。 教学目的：熟练使用制种用品、用具、设备、教学目的：熟练使用制种用品、用具、设备、 设施进行制种生产。设施进行制种生产。 第一节食用菌菌种的概念第一节食用菌菌种的概念 一、菌种的概念一、菌种的概念 原意是指孢子（相当于植物的种子），但原意是指孢子（相当于植物的种子），但 在实际生产中，常将经过人工培养的纯菌在实际生产中，常将经过人工培养的纯菌 丝体连同培养基质一同叫做菌种。丝体连同培养基质一同叫做菌种。 菌种 担孢子或子囊孢子野生 扩大繁殖后的纯次生菌丝体栽培 来历

2、野生菌驯化 原菌株改良 生物技术创新 优良 菌株 扩大 繁殖 用于 生产 实行纯培养 不含任何杂菌 基本 要求 二、菌种类型 一级菌种 二级菌种 三级菌种 级别 按 保藏用种 实验用种 生产用种 目的 状态：固体菌种、液体菌种 返回本节 （一）级别不同的菌种 1.一级种（母种） 用分离法首次得到的 纯次生菌丝体 概念 概况 培养环境 试管、斜面培养基 用途 再生母种 扩大原种 保藏用种 菌丝弱而少、不可直接栽培特点 返回本节 2.二级种（原种） 将母种扩大至粗放培养基上 形成的菌种 概念 概况 培养环境 菌丝较多而壮、适应性较强特点 用途 扩大栽培种 大口瓶、较粗放的 液体或固体培养基 3.三

3、级种（栽培种） 将原种扩大至粗放培养基上 形成的菌种 概念 概况 培养环境 菌丝多而壮、适应性强特点 用途栽培生产 菌种袋、较粗放的 液体或固体培养基 （二）状态不同的菌种 用固体基质培养的菌种 1.固体 菌种 概念 特点 设备、工艺简单 菌龄长而不一 发酵率较低 用液体基质培养的菌种 2.液体 菌种 概念 特点 设备、工艺较复杂 菌龄短而一致 发酵率高 易老化和自溶 第二节食用菌制种条件第二节食用菌制种条件 一、食用菌制种程序一、食用菌制种程序 种菇 试管培养基 培养 母种 固体培养基 原种 固体培养基 栽培种 培养 培养料灭菌 培养基灭菌 培养料灭菌 培养 一、制种设施一、制种设施 晒料场

4、晒料场 培养料摊晒和处理培养料摊晒和处理 原料库原料库 存放原材料存放原材料 装料库装料库 培养料混合、分装培养料混合、分装 灭菌室灭菌室 培养基灭菌培养基灭菌 冷却室冷却室 培养基冷却培养基冷却 接种室接种室 各级菌种分级各级菌种分级 培养室培养室 菌种培养菌种培养 冷藏室冷藏室 成种菌种短期存放成种菌种短期存放 菌种保藏定义菌种保藏定义 . 二、生产设备二、生产设备 1 接种设备： 用于分离和扩大各级菌种的专业设备 包括接种室、接种箱、超净工作台、 接种 工具 接种室 要求：内外两间，面积适宜，容易搞清 洁，能进行灭菌 内间为接种工作间：56平方米，门窗紧 密，尽量减少灰尘积累，内置工作台

5、 外间为缓冲间：23平方米，用于进接种 间前换衣、帽、鞋，同时为内间提供与 外界相隔环境 内外间均为拉门，位置相互错开 体积应尽量小，利于彻底灭菌 装过滤空气的通风设施 内外间墙、地板、天花板、室内用具应 尽量光滑易擦洗 接种室设计接种室设计 接种箱 缩小的接种室 双人、单人操作型 易消毒、规模受限制 接种箱接种箱 超净工作台 局部净化设备 空气过滤除菌 无论接种箱还是净化工作台，均应放在 较干净、空气中尘埃少的环境中，最好 置于接种室内 超净工作台超净工作台 接种工具 接种针 接种环 接种刀 接种铲 镊子 接种器等 酒精灯和接种工具酒精灯和接种工具 2 菌种培养设备 放置接种后各级菌种，并提

6、供适宜温度 和通气条件，使菌丝生长良好的专用设 备 培养室 培养架：以操作方便为宜,宽0.71.2米， 层间40cm 调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、 抽风机 测温：干湿球温度计 照明：避免使用蓝光 灭菌：紫外灯 三、培养设备三、培养设备 菌种培养室菌种培养室 培养箱（恒温箱） 根据需要使温度恒定在一定范围内,一般 用于培养斜面试管和少部分原种 恒温培养箱恒温培养箱 3、培养基加工设备 木材切片机 木片粉碎机 搅拌机 装瓶装袋机 4.灭菌设备： 灭菌：将环境中的所有微生物杀死。 一般采用热力灭菌设备 干热灭菌设备 原理:利用干燥热空气进行灭菌 灼烧灭菌：酒精灯 电热恒温干燥箱：160 12小

7、时 适宜玻璃器皿、金属用具灭菌 湿热灭菌设备 利用潮湿热空气进行灭菌 高压灭菌 手提式高压灭菌锅： 9瓶 立式高压灭菌锅： 45瓶 卧室园形高压灭菌锅 270瓶 卧式方形高压灭菌锅（消毒柜）500瓶 121 20-60分钟 常压灭菌： 砖石 油桶 蒸笼等 105 68小时 5、制种容器和消毒药品 容器 750ml 无色、浅色菌种瓶 聚丙烯菌种袋 消毒药品 甲醛 75%洒精 高锰酸钾 漂白粉、来苏儿 三、菌种厂选建 交通方便、水电充足 地势干燥、环境干净 空气清新、30米内没有畜禽圈舍、饲料 仓库、排废工厂 有堆放、摊晒原料地 菌种厂设计菌种厂设计 第四章第四章 制种基本技术制种基本技术 知识目

8、标知识目标 明确液体菌种制作过程明确液体菌种制作过程 熟悉消毒与灭菌的分类与方法熟悉消毒与灭菌的分类与方法 菌种制作工艺流程及菌种质量鉴定、保藏的方菌种制作工艺流程及菌种质量鉴定、保藏的方 法法 三、菌种生产程序 四大步骤 制培养基 灭菌 培养 接种 第一节第一节 培养基制作技术培养基制作技术 （一）概念及要求 概 念 人工配制的适于菌种生长 的营养基质 要 求 营养种类、比例、水分、ph适宜； 保持无菌状态。 类 型 天然：天然有机物 合成：已知成分的化学药品 半合成：？ 原料 来源 状态 液体：营养液 固体 固体：天然固体原料 固化：加1.5%2%琼脂 表面 形状 斜面培养基 平板培养基

9、（二）培养基的类型 粉状 条状 属天然植物多糖 融点96以上 凝点40 以下 冷水中不溶 透明度好、粘着力强 不被微生物分解利用 特性 二、各级菌种的培养基 （一）母种培养基 1.通用配方 2.配制过程 pda 马铃薯200g、葡萄糖20g 琼脂1520g、水1000m1 煮沸20min，取定量滤液 制马铃 薯滤液 滤液沸时加入，融后加余料 融化琼脂 调解ph 勿污管口，控制装量分装试管 准备灭菌扎捆 10%naoh或hcl （一）营养液制作（一）营养液制作1.1.准备工作准备工作 三、三、制作制作方法方法 2. 2.称量、材料预处理称量、材料预处理 按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、按

10、配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、 挖掉芽眼后称量挖掉芽眼后称量200g200g，切成，切成1cm1cm见方的小块。琼脂见方的小块。琼脂 剪碎后用水浸泡。剪碎后用水浸泡。 3. 3.熬煮熬煮 将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中， 煮至酥而不烂。煮至酥而不烂。 4. 4.过滤、加可溶药物过滤、加可溶药物 用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中 加加 入糖入糖 5. 5.熬琼脂、定容熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全 溶化为止，定容至溶化为止，定容至1000ml1000

11、ml。 （二）营养液分装（二）营养液分装 1.1.用注射器分装用注射器分装 2.2.分装标准分装标准: :分装量为试管长度的分装量为试管长度的1/41/4 1/51/5。注意培养基不能沾污试管口。注意培养基不能沾污试管口。 3.3.塞棉塞塞棉塞 棉塞松紧适度，棉塞松紧适度，1/31/3在管外，在管外，2/32/3在管内。在管内。 4.4.扎捆扎捆 7-107-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直 立放入高压灭菌锅中。立放入高压灭菌锅中。 ( (四四) )摆斜面摆斜面 灭菌结束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报

12、纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/21/2 （三）灭菌处理（三）灭菌处理 在在1.01.5 kg/cm1.01.5 kg/cm2 2压力下维持压力下维持20-30min20-30min。 ( (四四) )摆斜面摆斜面 灭菌结束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/21/2 （二）原种、栽培种培养基 主料棉籽壳87，麦麸10 辅料白糖1，石灰1，过磷酸钙1 配方（%） 棉壳、麦麸干混 余料溶于水后浇入主料 清水翻拌至含水量 配

13、制 1.种类 (1)棉籽壳培养基 主料 麦粒、玉米粒等98.5% 辅料 石膏粉1%,碳酸钙0.5% 调ph 与分装 ph：一般为8.0左右 原种培养基装大口瓶 栽培种培养基装菌种袋 配方（%） 颗粒洗净，1%石灰水泡胀 文火煮沸1520min 晾至无明水后拌入余料 配制 (2)颗粒培养基 栽培种的装袋 第二节第二节 消毒与灭菌技术消毒与灭菌技术 （一）消毒（一）消毒（disinfection） 指杀灭物体中的病原微生物的方法。消指杀灭物体中的病原微生物的方法。消 毒只要求达到消除传染性的目的，而对毒只要求达到消除传染性的目的，而对 非病原微生物及其芽胞、孢子并不严格非病原微生物及其芽胞、孢子并

14、不严格 要求全部杀死。要求全部杀死。 空间消毒法、表面消毒法、基质消毒法、空间消毒法、表面消毒法、基质消毒法、 煮沸消毒法煮沸消毒法 常用的消毒药品常用的消毒药品 酒精、甲醛、硫磺、多菌灵、克霉灵、酒精、甲醛、硫磺、多菌灵、克霉灵、 气雾消毒剂、生石灰、高锰酸钾等、石气雾消毒剂、生石灰、高锰酸钾等、石 碳酸。碳酸。 紫外线灯紫外线灯30w30w （二）灭菌（二）灭菌（sterilization） 指杀灭物体中所有病原微生物和非指杀灭物体中所有病原微生物和非 病原微生物及其芽孢、霉菌孢子的病原微生物及其芽孢、霉菌孢子的 方法。方法。 1.干热灭菌法干热灭菌法 (1)火焰灭菌法火焰灭菌法 :火焰直

15、接烧灼，如接种环火焰直接烧灼，如接种环 。 (2)热空气灭菌法热空气灭菌法 干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质的物品干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质的物品, 如玻璃器皿、瓷器等的灭菌。如玻璃器皿、瓷器等的灭菌。 灭菌温度需灭菌温度需160维持维持2 h 。 2.湿热灭菌法湿热灭菌法 (1)煮沸灭菌煮沸灭菌 : 煮沸煮沸1020 min可杀死所有细菌的繁殖可杀死所有细菌的繁殖 体，体， 芽孢常需煮沸芽孢常需煮沸12 h才被杀死才被杀死 。用于饮水、一般器械。用于饮水、一般器械 如刀剪的消毒。如刀剪的消毒。 (2)巴氏消毒法巴氏消毒法 :以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特以较低温度杀灭液态

16、食品中的病原菌或特 定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 . 1.低温维持巴氏消毒法低温维持巴氏消毒法 6365 30min 2.高温瞬时巴氏消毒法高温瞬时巴氏消毒法 7172 15s 3.超高温巴氏消毒法超高温巴氏消毒法 132 12s （3）流通蒸汽灭菌法）流通蒸汽灭菌法 ：是一种常压蒸汽消毒法，细是一种常压蒸汽消毒法，细 菌繁殖体菌繁殖体15-30分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。 (4) 间歇灭菌法间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽）（反复多次流通蒸汽） 100维持维持30min 温箱过夜温箱

17、过夜 100维持维持30min 温箱过夜温箱过夜 100维持维持30min 温箱过夜温箱过夜 100维维 持持30min。 此法常用于一些不耐高温的培养基，如鸡蛋培养基、此法常用于一些不耐高温的培养基，如鸡蛋培养基、 血清培养基、糖培养基的灭菌血清培养基、糖培养基的灭菌 。 高压蒸汽灭菌器：高压蒸汽灭菌器：15磅磅/平方平方 英寸，英寸，121.3温度下维持温度下维持 1520min，可杀灭包括细，可杀灭包括细 菌芽孢在内的所有微生物菌芽孢在内的所有微生物 。 应用此法灭菌，一定要充分应用此法灭菌，一定要充分 排除灭菌器内原有的冷空气。排除灭菌器内原有的冷空气。 用于普通培养基、生理盐水、用于

18、普通培养基、生理盐水、 耐热药品、手术敷料等。耐热药品、手术敷料等。 手提式高压蒸汽灭菌器手提式高压蒸汽灭菌器 （5）高压蒸汽灭菌法）高压蒸汽灭菌法 3.辐射杀菌法辐射杀菌法 1.紫外线灭菌紫外线灭菌 紫外线的穿透力弱，因此一般紫外线的穿透力弱，因此一般 用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消 毒。紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，应毒。紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，应 注意防护。注意防护。 2.电离辐射电离辐射 常用于一次性塑料制品的消毒。常用于一次性塑料制品的消毒。 3.微波微波 不能穿透金属表面。不能穿透金属表面。 4.滤过除菌法滤过除菌法 滤过除菌法是用物理阻留的方法将液体或空气滤过除菌法是用物理阻留的方法将液体或空气 中的细菌除去，以达到无菌目的。主要应用于中的细菌除去，以达到无菌目的。主要应用于 一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及 空气