生化分析仪的校准

1、生化分析仪的校准重庆医科大学附一院 陈 宏 础一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、 准确性及可比性所决定的， 一般必需从下 面几方面着手。一 选好测定方法；二 购买质量过硬的试剂盒；三 要有质优的测试仪器；四 必需进行正确的校准；五 还要规范化操作；六 搞好过硬的室内质量控制；七 积极参加室间质评活动；八 还要有一支素质高的队伍。现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。一、校准的重要性和必要性首先必须明确生化分析仪不论如何先进， 它还是一个比较器， 它测试出来的标本结果是 随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的 “临床实验室（定量 测定） 室内质控工作指南 ”中明确指

2、出 “对测定标本的仪器一定要求进行校准， 校准时要选择 合适的（配套的）标准品 /校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或 /和参考物质； 对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。 ”这说明校准仪器是室内质控的重要 部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。二、确立测定系统的概念对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、 试剂、仪器、校准品中任何一个不 同，都可能得到不同的测定结果。因此，测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要 素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果， 而该结果又具有与国际、 国内其他实验室的可 比性，应该自己建立一个标准测定系统。

3、在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品， 即日立7170使用宝灵曼的试剂和校准品（c.fas）,在贝克曼 CX-7生化分析仪上使用贝克 曼的试剂和校准品等。 各仪器厂家均有自己的标准测定系统。 对于校准品不能乱用， 如绝对 不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化 仪。三、校准品和质控品校准品(Calibration materials)含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。质控品(Control mater

4、ials )只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。前者是校准其值而后者是控制误差用的。四、校准前准备1 了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；2. 检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；3. 用清洁剂泡洗管道4. 测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？五、定值质控血清是否可以校准仪器？我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立 7170A上进行测定(用常规试剂)，详见质控血清对部份常规测定项目(如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、N

5、a、Cl、AST、ALT )结果与靶值比较：表不同厂家定值质控对 TP、ALB、AST、ALP结果与靶值比较TPALBUREAASTALPT偏差%T偏差%T偏差%T偏差%T偏差%汽巴康宁1574.392905.04.543-10.5964.2汽巴康宁2464.89242.0819.3-5.76184-11.72650.2宝灵曼1502.034.8-5.178.960.4558.3-11.2-2422.7宝灵曼248.62.8833.7-5.0424-6.77140-12.33842.7RANDOX159.76.3640.83.887.674.362-17.7214-16.1RANDOX2398

6、.3326.95.9821.6-5.67144-12.7394-17.1Huma n1724.1846.7-4.183.785.1633.5-7.5168-2.2Huma n229.8-2.6829.8-2.7625.1-5.08151-11.7287-9.1Bio-Red1630391.287.1024-14.62522Bio-Red2421.7927018.0-4.44201-14.32980.84*从总蛋白结果来看 RANBOX与Bio-Red相差为6.45%，而宝灵曼与 Bio-Red较为接近；*从白蛋白结果分析，宝灵曼与Bio-Red相对相差5.75% ,与总蛋白结果明显不同。Bio

7、-Red则与汽巴康宁比较接近。* UREA结果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能与我们采用试剂盒的质量有关，所以试剂盒的线性范围理应成为选择试剂盒的重要依据之一。但从低值结果分析，也有5%的偏差（Bio-Red 与 Human）* AST与ALT测定值均低于靶值，这就涉及我们选用什么K值问题。* ALP测定中RANDOX （ -16.6%）与宝灵曼（2.7%）靶值之间竟相差 19.3%，这可能涉及 试剂盒选用缓冲液种类，PH值以及所用&值等有关。通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我们决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。六、校准方法例如日立（Hita

8、chi）系列您必须购买宝灵曼（Boehringer）的试剂及其校准的说明书设置参数，用c.fas.校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测定。此时得到的 K值即为准确的校准 K值，然后测定待测的 10至20份新鲜血清三次取其 平均值，应该说此结果是用Hitachi-Boehringer检测系统所获的测定值。然后用此血清值校准其它测定系统。表 日立7170、BM试剂连续四个月每天进行校正（n=81）K值的变化TPALBALTASTCreaUreaUATGCholGluCaCKGGTMea n

9、301769430232274147562673154312721449174459238642603SD866.696349.7144850.216.116.917.418.456.861.1167.9CV%2.81.02.11.79.81.91.11.41.21.09.61.66.9七、关于酶活性测定校准问题有的主张不进行校准而采用固定K值，有的作者以为应该进行校准。酶活力计算公式如下: 酶活力(u/l) = A/min x Vx 106/( x v x 1) 令 k=V X106/ ( x)v则酶活力(u/l) = A/min X常用K值有以下几种：a）理论K值：根据理论摩尔消光系数（）

10、来计算，如 NADH为6.22 X03b）实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测&值来设定K值c）厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供 6.3 X03）d）校准K值：通过校准物直接校准得到的K值在日立7170A全自动生化分析仪上，可以得到几种不同的酶K值，见下表表 日立7170A全自动生化分析仪上用不同方法得到几种酶的K值指示物波长理论K值实测K值校准K值ALTNADH340nm24442642 (8.1%)3026( 23.8%)ASTNADH340mm24442642 (8.1%)2775( 13.5%)CKNADPH340mm38783878 (8

11、.1%)3886 ( 8.3%)GGT4NA405mm14181539 (8.5%)1612( 13.7%)GGT4NB405mm14751739( 17.9%)ALP4NA (PH10)405mm757825 (8.9%)注：1校准物为宝灵曼c.f.a.s,试剂也用宝灵曼的配套试剂。2括号内数字是该 K值与理论K值相比的变化率以上摘自张克坚文章中*从上述K值中不难发现实测 K值大于理论K值，这说明生化分析仪的测光系统还存在着 一定误差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；*校准K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试 剂及校准品造成的；*

12、作者认为最好使用校准 K值，但必须由两个先决条件：1必须使用配套的试剂；2必须使用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性。关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（ NIST ）均发表了 人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。八、必须拟订校准计划（文件） 校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照 “临床实验室质 量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：1建立校准方法选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；确定校准的频度。至少每六个月进行一次校准；如有下列情况发生时，必须进行校准* 改变试剂的种类， 或