实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验[高教课堂]

1、 1教学运用 Thalassemia 地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一 全球有全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%） 中国南方不同高发地中国南方不同高发地 区人群携带率区人群携带率 3 24% 2教学运用 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； ； 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担 和难以估量的精神负担；和难以估量的精神负担； 3教学运用 4教学运用 中国南方人群地贫基因携带率 地区地区 携带率携带率(%)(%) 地贫

2、地贫地贫地贫合计合计 广西广西 17.66.424.0 广东广东 8.52.511.0 海南海南 12.72.715.4 云南云南 9.8 7.317.1 贵州贵州4.25.19.3 重庆重庆5.22.07.2 5教学运用 每每4人就有人就有1个地贫缺陷基因携带者个地贫缺陷基因携带者 每每55个家庭就有个家庭就有1个有重型地贫出个有重型地贫出 生风险生风险 每每230个胎儿就有个胎儿就有1个重型地贫患个重型地贫患 儿儿 广西 每每10人就有人就有1个地贫缺陷基因携带个地贫缺陷基因携带 者者 每每250个家庭就有个家庭就有1个有重型地贫个有重型地贫 出生风险出生风险 每每850个胎儿就有个胎儿就

3、有1个重型地贫患个重型地贫患 儿儿 6教学运用 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）：碍性贫血）： 由于由于（突变、缺失（突变、缺失 等）引起的等）引起的 ，导致，导致 ，同时，同时 的一种的一种 。 7教学运用 由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少 或不能合成，导致或不能合成，导致的的组成成分组成成分改改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为表现为。 8教学运用 9教学运用 10教学运用 重型重型地贫地贫 （

4、HbBarts胎儿水肿综合征胎儿水肿综合征） 4个个基因都缺失了基因都缺失了(-/-) ， 在孕后期或出生后即死亡。在孕后期或出生后即死亡。 11教学运用 12教学运用 13教学运用 14教学运用 15教学运用 16教学运用 骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等 17教学运用 18教学运用 19教学运用 20教学运用 21教学运用 22教学运用 23教学运用 24教学运用 1.广西人群地贫基因携带率很高。 。 2. 。 3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。 4. ，但。

5、 5.是未来发展的方向。 25教学运用 26教学运用 27教学运用 28教学运用 -靶型靶型RBC 29教学运用 红细胞脆性实验红细胞脆性实验 Erythrocyte fragility testErythrocyte fragility test 地贫患者地贫患者 正常人正常人 30教学运用 血红蛋白电泳血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisHemoglobin electrophoresis 31教学运用 32教学运用 chain disappear (0-thal major) chain disappear (HbBarts hydrop fetalis) 1

6、2341234 肽链分析肽链分析Peptide chain analyses 33教学运用 单管多重单管多重PCR 34教学运用 PCR-ASO 35教学运用 诊断诊断(Diagnosis)(Diagnosis) 临床特点实验室检查父母调查阳性临床特点实验室检查父母调查阳性 （基因分析）（基因分析） 36教学运用 MCV 80fl 和和/ 或或MCH 27pg ,则高度怀则高度怀 疑为地贫疑为地贫; HbA2 3. 5 % ,则为则为地贫基因携带者地贫基因携带者 37教学运用 地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验 地贫地贫诊断基因芯片诊断基因芯片(Thalachip); 地贫地贫基因诊断条膜基

7、因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多一管法多 重重PCR ASO寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交 DNA测序测序 38教学运用 鉴别诊断鉴别诊断(Differential (Differential diagnosis)diagnosis) 缺铁性贫血缺铁性贫血 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症 传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化 39教学运用 40教学运用 【检验原理】【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。 测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是可筛查是否贫血，

8、特别是 41教学运用 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成；母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。 42教学运用 新鲜抗凝全血新鲜抗凝全血（、EDTA-Na、ACD）， 置28保存。已发生溶血或有血凝块的 标本为不合格样品。标本采集后，测试应在 三日内完成。 43教学运用 1、取试管一只，加入，放。 2、加入，立刻混匀，继续放在 。 3、，加入。混匀， 。 4、将（ ），于（以纯化水 作空白对照）。 5、，混匀，（透 明红色）后，。 6、 。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。 44教学运用 溶血率 65为正常溶血率；55为溶血率降低；（注