水产养殖多菌种混合培养分析

1、摘要研究多菌种功能微生物混合培养的条件优化， 主要采取正交实验方法，从培养基配方、温度、菌种接种等方面，研究各功能菌良好生长的混合培养条件。关键词水产养殖；菌种；混合培养使用微生态制剂整治养殖生存环境， 成本低且没有抗药性以及药物遗留等问题，因此成为 21 世纪养殖业的未来走向。当前，光合细剂。菌、肠球菌等一些单一菌剂和复合菌是我国水产养殖中较为常用的菌但从当前常用到的水产养殖菌剂来说，出现了多菌种菌剂种类少、菌剂耐盐性能不理想等问题。单一菌剂限制了水产养殖水体的生物修复作用， 因此在实践应用过程中采用有一定耐盐性能的多菌种制剂非常具有实践性 1-3 。本文主要研究混合培养的条件与它们之间的生

2、长关系。1 材料方法 11 材料。111试验材料在次试验过程中选取的菌种有英膜红假单胞菌、 地衣芽孢杆菌和假丝酵母菌。112 试剂 204? 1220、 204、4? 720、葡萄糖、3,5- 二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、亚硫酸钠、苯酚；蛋白胨、酵母粉、牛肉膏 39、琼脂粉、蒸馏水；结晶紫液、 95的乙醇、 05 的番红水溶液；引物、常规操作使用试剂和酶均购自公司。113 仪器智能生化培养箱， - 超净工作台， -75 立式电热压力灭菌锅， 211回转式摇床， 5417高速离心机， 5780349扩增仪， -3300 凝胶成像系统，200光学显微镜， 1-32梅里埃微生物全自动鉴定仪， -255

3、0 紫外分光光度仪等。12方法。121三种功能菌的接种时间前后将地衣芽孢杆菌、 假丝酵母菌与荚膜红假单胞菌通过不同的接种时间前后融合到接种于光合细菌基础培养基中，设置30 C、100? -1摇床下培养后利用分析其细胞生长数量筛查出 3 种功能菌混合培养的比较理想的接种时间前后顺序。122 三种功能菌混合培养的培养基优化在光合细菌基础培养基条件下， 分析不同碳源、 氮源和无机盐 对 3 种功能菌混合培养的影响，在此期间利用因素轮换法进行。123三3种功能菌的最佳培养基方案是采用正交实验进行筛查。种功能菌混合培养的条件优化利用正交实验法， 根据最佳培养基方案分析各种温度、溶氧等环境状态下 3 种功

4、能菌混合培养受到的影响，进而提出最优混合培养的理想条件。124 三种功能菌混合培养的生长关系检测 3 种功能菌通过混合培养以及纯培养状态下细胞生 长数量，对其中 2 种培养条件中的细胞对数生长期时的繁殖代数、 生长速率常数与世代时间的区别， 进而建立 3 种功能菌混合培养的生长关系。125生长量测定利用平板菌落计数法。在光合细菌126培养基中对英膜红假单胞菌进行培养， 在营养琼脂培养基中对衣芽孢 杆菌进行培养，假丝酵母菌利用酵母菌培养基进行培养。1、 2 为计算公式繁殖代数 =33222-11；生长速率常数 =2-1 ；世代时间 =1。式中， 1、2 为菌种进人对数生长期初期与末期的培养时间；

5、菌种进人对数生长期初期与末期的细胞数量。2 结果与分析 21各类培养基对功能菌株生长的影响。实验过程中，以光合细菌培养基作为对 3 种功能菌在培养过程中的伊始基， 这也是为了研究由光合细菌为主的复合型微生态制剂。利用测定地衣芽孢杆菌在细菌肉汤培养基和光合细菌基础培养基和假丝酵母菌在酵母菌培养 液和光合细菌基础培养基中的细胞生长量， 进而掌握每个菌种中营养所需的重要区分。实验结果表明，地衣芽孢杆菌以上两种培养基中的生长状态大致相同， 都是以最快的速度生长， 同时到 9 实现最24 后处高生长数量；而假丝酵母菌在各种培养基状态中的生长区别较为明显 处于酵母菌培养基过程中进入到生长过程中非常快，同进

6、在于最大生长量141X 09? -1 ,当放到光合细菌基础培养基时，通过12之后菌体渐入到生长过程中，同时48 之后才达到最大生长量47X 107? -1。由此表明，假丝酵母菌和地衣芽孢杆菌相比下，地衣芽孢杆菌更适合在光合细菌基础培养基中生长。223 种功能菌混合培养的微生态关系地衣芽孢杆菌、 假丝酵母菌与荚膜红假单胞菌 3 种菌体间没有拮抗关系。利用 3 种菌混合培养和自身纯种培养的长征特点分析了将 3 种菌混合到一起进行培养，试验结果显示地衣芽孢杆菌和另外两株功能菌之间并不存在共栖关系，假丝酵母菌与荚膜红假单胞菌之间有利于对方生长的作用。这是由于在进行混合培养过程中， 英膜红假单胞菌生长所

7、需要的营养假丝酵母菌为其提供了小分子产物， 反之英膜红假单胞菌代谢也为其提供了生长所需的营养成分。对 3 种功能菌进行混合培养过程中，其细胞10， 3另外两种功能菌生长量不佳,呈现下降趋势。由此可以看出,3 种菌生长数量分别是34,明显低于各纯种培养过程中的接种量 种功能菌的生长量荚膜红假单胞菌生长量接近于纯培养数值,种之间对于一些物体可能有着竞争关系存在, 也不排除是因为培养基的因素所致。23 不同的接种时间前后对三种功能菌混合培养的影响。在此次实验中分别设置 3 个实验组实验 1,在光合细菌的培养基中将 3 种菌株一起放入培养基中；实验 2，在光合细菌基础培养基中先对荚膜红假单胞菌与假丝酵

8、母菌进行培养到 48 时时再放入地衣芽孢杆菌；实验 3，先将荚膜红假单胞菌培养到 24 和 48 时，再将假丝酵母菌以及地衣芽孢杆菌分别连接。在试验过程中实时检测以上 3 种功能菌各个接种顺序下的细胞生长速度， 检测结果如图 1、图 2 、图 3 所示。实验 2的接种前后时间， 3 种功能菌在培养过程中都生长优良，同时培养时间到 60 时都到达到了生长数量 的最高值；但是使用实验 1的接种前后时间， 地衣芽孢杆菌通过混合 培养过程后，还没有到 72 时就已经进到了死亡过程，菌体大面积死 亡；根据接种前后时间，假丝酵母菌在实验 3 中的生长状态不佳。生长曲线由图 3 所示，夹膜红假单胞菌在进行培

9、养之后由于生长速度 几乎处于零，因为致使培养基中的呈快速上升状态直到出现偏碱性， 由于假丝酵母适合在偏酸性状态下生存， 因此阻碍了假丝酵母菌的生长。参考文献 1 谢航水产养殖功能微生物的筛选与多菌种混合 培养条件的研究 福州福州大学 ,20052 尹苗益生性微生物饲料添 加剂的研究 济南山东师范大学 ,20003 张欣宇复合益生菌微生态 添加剂的培养条件优化及功效评价 长春吉林大学 ,2015 作者孙争荣 单位凌海市达莲海珍品养殖有限责任公司PEP 小学英语五年级下册Unit four When is Easter? 教学设计教学内容 : PEP 小学英语五年级下册 Unit four Whe

10、n is Easter？ Part A: Lets spell教材分析 :unit4 的主题是 When is Easter? 主题是东西方节日及个人的生日。主题图通过学生们在教室里谈论母亲节、中秋节和生日的情境，呈现出本单元要学习的核心词汇和句型及其语用环境，拉开了本单元学习的序幕。为学习单元A.B部分的各个板块做好准备。而Let s spell板块为我们呈现了字母组合th在单词中发/ e /和/ e /的规则。通过听音圈词活动，强化记忆 th 的发音规则，巩固学习 th 的音形拼写对应关系。第三部分通过选择单词写句子，帮助学生按照发音规则拼写句子。这些设计符合英语新课程标准的要求，有效的突

11、出了英语核心素养。学情分析 : 五年级学生学习英语已经有二年半的时间了，对于教材的特点和结构都比较熟悉。此阶段的学生活泼好动、好奇心强、勇于尝试，具有一定的逻辑思维能力和语言表达能力，并有很强的自尊心和求知欲，对于学习英语的兴趣已经逐渐显示出自己独特的个性。设计理念： 根据英语新课程标准的要求以及突出英语核心素养，本节课我设计以情境教学为支撑，以学生小组合作为方法，在合作学习的基础上经过老师的点拨轻松掌握th 的发音规则，并能在不同形式的练习中巩固学习 th 的音形拼写对应关系。发展学生的自主学习能力以及引导学生进行发现式的学习，观察，感知体验并自己归纳，突出以教师为引导，学生为主体的教学理念

12、。教学目标 :1.学生能够掌握字母组合th在单词中发/ e /和/ e /的规则。2. 学生能够根据 th 的发音规则读出生词。3. 学生能够按照 th 的发音规则拼读单词，并进一步提高在单线上抄写句子的能力。4. 引导学会发现、观察、体验学习的学习方法。教学重难点 :重点 ：学生能够掌握字母组合 th 在单词中发 / 9 / 和 / e /的规则。难点： 学生能够根据 th 的发音规则读出生词学习方法： 情境学习法、小组合作法。教具准备 : 多媒体教学课件、单词卡片、评价奖章等。教学过程 :一、 Warm Up1 绕口令游戏。口舌之争。设计意图】拉近师生距离，愉悦学生心情。增进对彼此的认识，

13、以便让课堂顺利开展，同时锻炼学生的齿舌灵活能力。2. GreetingT: Hello, boys and girls.Ss: Hello, teacher.lead-in1. 看情境图，引出三只小猪进考场的故事。学生发现这个故事中的每句话都有什么特点，小组合作读一读说说自己的发现。设计意图】 : 通过情境图的展示，让学生在情境中发现问题，思考问题，引出课题。Presentation1. 出示学习目标，明确本节课的学习任务。th 有几种不同的发音，交流。2. 继续看情境，小组合作读句子，说说你发现了字母组合The first pig is thirteen.He likes maths.The

14、 second pig is three years old.He is thin.The third pig has a birthdayon the fifth of April.3. 老师解疑，出示 th 在单词中的两种正确发音。清辅音：/ 9/舌尖放在上下齿之间，气流由舌尖间的缝隙挤出，声带不振动。浊辅音： /e /舌尖放在上下齿之间，气流由舌尖间的缝隙挤出，声带振动。教师示范，学生模仿。学生以各种形式自由练习发音，展示学习成果。th 的正确发音。设计意图】 : 通过仔细观察发现疑问，提出疑问。带着疑问学习新授，主题突出，学生的学习中心地位明显。由教师直接给出答案，打消疑惑，直奔主题，

15、明确4. 拆音法读单词。师生一起读。设计意图】 : 教给学生明确的学习方法，让学生理解知道单词的拼读规则。5. 小组合作分一分。给单词正确的归类。设计意图】 : 及时了解学情，以便于掌控课堂。同时考察学生对知识的运用能力，突破重点。6. 质疑引导，发现规律。教者做简单的提示，引导学生自主归纳规律。清辅音：/ 9/1. 单词是数词。2. 以 th 开头的单词。3. 以 th 结尾的单词。浊辅音： /e /1.th 后有 er 的单词。2. 单词是代词，冠词的单词。教学反思：设计意图】: 及时总结归纳规律，以便在后面的学习中能举一反三。同时也是对前面知识的巩固，对学情的再次回查，突破难点。四、 Practice1. 继续来到情境图，三只小猪又遇到了问题，家谱图。怎么读呢学生展示。2. 三只小猪想送鲜花给妈妈。师生一起拍手说chant 再次让学生巩固体会 th 的发音。设计意图】 : 通过情境，既可以培养学生口头表达能力，又可以提高学生对单词的熟练掌握程度。朗朗上口的 五、 ProductionChoose ， write and say.设计意图】 : 能够按照 th 的发音规则拼读单词，并进一步提高在单线上抄写句子的能力。通过挑战天气预报员，熟练运用知识在日常生活中。六、 Sum-up 学生自由说说本节