实验六植物抗氧化酶活性的测定

1、POD、SOD、CAT （AOX） （PPO） 抗氧化酶与植物抗逆性关系抗氧化酶与植物抗逆性关系 Journal of Experimental Botany, 2009，60（2）：377390 H2O2 H2O2 POD activity (mol.g-1 FW .min-1) 0 2 4 6 8 10 12 Soluble POD CWB-POD POD activity of tobacco callus suspension cells 李忠光，2009.10 POD 一、实验原理一、实验原理 Peroxidase, POD （ROS,H2O2） PPO Polyphennol ox

2、idase, PPO 抗氧化酶动力学曲线抗氧化酶动力学曲线 Wavelength 400 420 440 460 480 500 520 540 560 Absorbance 00.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 Reaction time (min) 05101520253035 Absorbance 00.0 0.2 0.4 0.6 0.8 01.0 525nm 410nm AB 植物抗氧化酶提取和测定参考文献 二、实验方法二、实验方法 1、提取：分别取、提取：分别取0.5 g实验材料实验材料加入少许石英砂和加入少许石英砂和3 ml 提取液（提取液（50mmol

3、/L PBS, pH5.8,内含内含0.mmol/ LEDTA, 1%PVP） 充分研磨充分研磨转入离心管中转入离心管中用用2 ml提取液提取液 洗研钵洗研钵 5000 rpm离心离心10 min 上清液定容至上清液定容至5 ml 用用 于测定于测定POD和和PPO酶活性或分装后转至酶活性或分装后转至-20或或-80保存。保存。 2、POD测定测定：取取POD反应混合液（反应混合液（10mmol/L愈创木酚，愈创木酚， 5 mmol/L H2O2, ,用用PBSPBS溶解）溶解）2.90 ml2.90 ml，25 水浴水浴5 min， 加入酶液加入酶液100 l（空白调零用提取液取代），立即记

4、时，（空白调零用提取液取代），立即记时， 摇匀，读出反应摇匀，读出反应30 s和和3 min时的时的A A470 470。用 。用计算计算PODPOD活性。活性。 3、PPO测定：取测定：取PPO反应混合液（反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，邻苯二酚， 用用PBS溶解）溶解）2.8 ml， 25 水浴水浴5 min，加入酶液，加入酶液0.2 ml （空白调零用（空白调零用提取液提取液取代），立即记时，摇匀，取代），立即记时，摇匀，读出反应读出反应 30 s和和2 min时的时的A410。以以每分钟每分钟A A值变化值变化0.010.01所需要的酶所需要的酶 液的量为一个活力单位（液的量

5、为一个活力单位（U U），则：则： 2 1470 V V V tW A T POD activities = (mol.g-1FWmin-1) 2 1410 01. 0V V tW A PPO activities = (U.g-1FW) 4、计算、计算 5、思考题、思考题 5.1 简述植物POD和PPO的生理 意义。 5.2在论述呼吸代谢多途径及其 生理意义。 POD、SOD、CAT （AOX） （PPO） （ROS,H2O2） 二、实验方法二、实验方法 1、提取：分别取、提取：分别取0.5 g实验材料实验材料加入少许石英砂和加入少许石英砂和3 ml 提取液（提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含内含0.mmol/ LEDTA, 1%PVP） 充分研磨充分研磨转入离心管中转入离心管中用用2 ml提取液提取液 洗研钵洗研钵 500