Digitoxin作业指导书

1、文件编号：LAB OP- MY020第1页，共1页版本：A/0生效日期：2008-02-011. 分析原理竞争原理。总测定时间：18分钟第一次孵育：15g L标本和一份生物素抗洋地黄毒苷特异性单克隆抗体一起孵育，反应形成复合体，复合体量取决于标本中反应物浓度。第二次孵育：添加钉复合体a标记洋地黄毒苷和链酶亲和素包被的微粒后，生物素抗体空闲位点结合抗原，反应生成一 “抗体-半抗原”样复合体，并在生物素和链酶亲和素的相互作用下形成固相。.将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光

2、的强度。.通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2点定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。2. 标本要求洋地黄毒苷检测的样本须在用药后 8 24个小时内收集。只有按如下方法收集的标本才适合用本试剂盒检测。血清必须用标准试管收集。内有分离胶的试管不适用于治疗药物监测。请注意厂商提供的数据。肝素锂、肝素钠、肝素胺、K3-EDTA柠檬酸钠血浆。（原则：回收率 90110%;斜率0.9 1.1 ;相关系数0.95 ; 2X分析敏感度（LDL,最低检测水平）+相关因子0.95 ）.稳定性：2毛。（可保存一周；在-20 可保存6月，只可冻溶一次14。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材

3、料采用罗氏原装配套试剂。试剂：Elecsys Digitoxin 试剂盒，产品目录号03002659 T00测试。M链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶 6.5ml。链酶亲和素包被的微粒，0.72mg/ml ;结合力：470ng生物素/mg微粒； 微粒经过防腐处理。R1生物素化洋地黄毒苷特异性抗体（灰色瓶盖）每瓶 9ml。生物素化单克隆抗洋地黄毒苷抗体（绵羊）：0.5 mg/L;磷酸盐缓 冲液：100 mmol/L，PH值6.8 ;经过防腐处理。R2钉复合物标记的洋地黄毒苷（黑色瓶盖）每瓶9ml。钉复合物标记的洋地黄毒苷:4.0 gg/L ;磷酸盐缓冲液：100 mmol/L， PH值6.8

4、;经过防腐处理。校准品：Cal 1阴性定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶，人血清基质Cal 2阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶,人血清基质质控品：Elecsys PreciControl Cardiac，货号 03530477文件编号：LAB OP- MY020 第2页，共2页版本：A/0生效日期：2008-02-01PC CARD:2 瓶，2X2.0ml 质控血清PC CARD:2 瓶，2 2.0ml 质控血清其他所需材料：Elecsys通用稀释液货号11732277Elecsys1010 或2010分析仪Elecsys 系统缓冲液（ProCell ）货号 11662988Elec

5、sys 测量池清洗液（CleanCell ）货号 11662970Elecsys 添加剂液（SysWash 货号 11930346Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号 112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产 Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批Digitoxin试剂盒必须用新鲜试剂和 Digitoxin Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010 : 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范

6、围时；根据规定进行多次标定。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在 Application Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK建）或两点定标（TWGPOINT键）、跨距定标（SPAN建）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最 后点SAVE将定标物放入在 Calibration Calibrator 中定义好的位置，点 Start，再点Start

7、，仪器开始定标。在Calibration Status菜单中看定标结果，点 Calibration Result键看定标结果，点 Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2样本检测程序：单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequenee No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点 SAVE建，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection ，在Sequenee No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点REPEAT输入该批标本的最后一个标本

8、号，点0K即可。进样分析，将标本按在 Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内，按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点 START键，仪器自动开始推架检测标本。 文件编号：LAB OP- MY020 第3页，共3页版本：A/0生效日期：2008-02-016. 质量控制用Elecsys Digitox in质控品1和2 （PreciCo ntrol Cardiac ）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法分析仪自动计

9、算得出每份标本的测定浓度（单位可为nmol/L或ng/mL）.换算公式 nmol/L x 0.76 = ng/mLn g/mL x 1.31= nmol/L8. 参考范围文献中洋地黄毒苷治疗血清浓度为13-39nmol/L或10-30ng/mL3。由于治疗和中毒血清浓度范围存在重叠，因此必须考虑糖苷浓度监测和临床发现以判断洋地黄中毒可能。参见“干扰因素”章节。每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性， 必要时根据具体情况制订自己的参考范围。9. 分析性能10. 干扰因素下列情况不影响测定结果：黄疸（胆红素浓度小于 633umol/l或37 mg/dL ），溶血（血红蛋白小于0.683mm

10、ol/L或1.1 g/dL ），脂血（脂类乳剂小于 1500 mg/dL），和生物素（小于205 nmol/L 或50n g/mL）。标准：回 收率土 10 %初始值。对于因某些疾病需要而接受高剂量生物素治疗的患者（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗 8小时后采集标本。浓度达1500IU/ml的风湿因子对测定无影响。体外对39种常用药物进行试验未发现有药物影响检测结果。乌扎拉可能会导致假性洋地黄毒苷结果偏高。由于存在1.1 %的交叉反应，乌本苷会导致洋地黄毒苷测定结果偏高。某些情况下，糖苷浓度与药物剂量所对应的浓度值不相关。其原因可能是患者 依从性不好，或者是没有考虑以往用药情况。肾衰、肝脏

11、衰竭患者和怀孕晚期妇女血中存在地高辛类似免疫反应物质（DLIS）。研究发现使用商业免疫试剂测定地高辛时，标本中DLIS会使地高辛检测结果偏高。DLIS也会干扰洋地黄毒苷测定。检测中通过添加合适的物质尽量减小检测成分和罕见 血清之间出现的免疫交叉反应的干扰。少数病例中极高浓度的链霉抗生物素蛋白和钉抗体会影响测定结果。必须结合患者病史， 各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。11. 临床意义洋地黄毒苷是一种作用于心脏的糖苷类药物。其确切作用机理仍不完全清楚。洋地黄毒苷使细胞内钙离子浓度升高，钙离子对 心机功能而言极其重要。最后，心脏收缩能力增强，收缩幅度增大，从而使心脏每次搏动输出的血量

12、增加。洋地黄毒苷常用于 治疗心功能不全。其他治疗指征包括老年患者明显动脉高血压治疗，伴有冠状动脉功能不全的高血压患者的外科术前治疗，以 及伴有心脏肥大和心室舒张压有升高趋势的心绞痛患者的治疗。洋地黄毒苷治疗不当患者会引起严重的室性心律不齐和某些特 定类型的心包炎。洋地黄毒苷治疗浓度范围约为13-39nmoll/L（10-30 ng/mL）3。这种情况下，洋地黄毒苷较地高辛有更强的蛋白质结合力。由于洋地黄作用与多种因素有关，故治疗和中毒范围会发生重叠2。因此，血清值必须结合整个临床表现进行解释。洋地黄毒苷半衰期为6-8天，主要在肝脏代谢。文件编号：LAB OP- MY020 第4页，共4页版本：

13、A/0生效日期：2008-02-01在这过程中，产生大约10%给予剂量的地高辛。约30%给予的洋地黄毒苷被真正清除。下列情况需确定其血清浓度：监测患者摄 入剂量，确定患者中毒可能，患者药物动力学改变或术前用药未知，以及ECG (心电图)中未观察洋地黄反应的患者。12 .参考文献1. Oellerich M. Pharmaka (Drug monitoring). In: Thomas L (ed.). Labor und Diagnose, TH-Books, Frankfurt, 5. edition, 1998:1174. Englisch: Clinical Laboratory. 1s

14、t English Edition 1998:1151.2. Jortani SA, Valdes R Jr. Digoxin and Its Related Endogenous Factors Critical Reviews. Clin Lab Sci997;34(3):225-274.3. Valdes R, Jortani SA, Gheorghiade M. Standards of laboratory practice: cardiac drug monitoring. Clin Chem 1998;44(5):1096-1109.4. Smith TW. Pharmacoki

15、netics, Bioavailability and Serum Levels of Cardiac Glycosides. J Am Coll Cardiol 1985;5:43A-50A.5. Doherty JE. Digitalis glycosides. Pharmacokinetics and their clinical implications. Ann Internal Med1973;79:229-238.6. Perrier D, Mayerson M, Marcus FI. Clinical pharmacokinetics of digitoxin. Clin Ph

16、armacokin 1977;2:292-311.7. Beller GA, Smith TW, et al. Digitalis Intoxication: A Prospective Clinical Study with Serum Level Correlations.New Engl J Med 1971;284:989-997.8. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests, 2nd editon, 1997:3-180.9. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical Vari