临床色谱质谱检验技术：色谱技术概论（四）

1、第二章第二章 色谱技术概论色谱技术概论 临床色谱质谱检验技术 气相色谱仪检测器 液相色谱仪构造及检测器 临床色谱质谱检验技术 本章总结及思考 复习 复习：色谱定性保留值 死时间t0 保留时间tR 调整保留时间tR 复习：色谱定量 峰高(h) 峰面积（A） 复习：常用色谱定量方法-外标法和内标法 外标法 内标法 复习：气相色谱仪 气相色谱仪检测器 临床色谱质谱检验技术 热导检测器（thermal conductivity detector, TCD ） 火焰离子化检测器（ flame ionization detector，FID） 电子捕获检测器（electron capture detect

2、or, ECD ) 气相色谱仪检测系统常用检测器 （四）气相色谱仪检测器 热导检测器（TCD） 定义：是根据被测组分与载气 的热导系数不同而响应不同的 检测器。 特点： 浓度型检测器 物理常数检测器 通用型检测器，对无机、有机 物质均有响应 不破坏检测样品组分结构 热导检测器电桥线路示意图 （四）气相色谱仪检测器 热导检测器 工作原理： （四）气相色谱仪检测器 火焰离子化检测器（FID） 定义：是以氢火焰作为电离源，通 过使有机物电离而产生的微电流作 为响应的检测器。 特点： 质量型检测器 准通用型，仅对含碳有机化合物有 响应 对所检测组分具有破坏性 氢火焰离子化检测器电离室 （四）气相色谱仪

3、检测器 火焰离子化检测器 工作原理： 样品燃烧发生电离 正离子负离子和电子 收集极 极化极 微电流 输出信号与组分的质量成正比 电子捕获检测器（ECD） 定义：是以放射源产生的射线电离源，通过使载气分子带电后在阴阳极 产生恒定的基流；当待测物进入时捕获自由电子，使基流下降。 特点： 质量型检测器 选择型，仅对电负性物质（对卤化物，含磷、硫、氧的化合物，硝基化合 物，多环芳烃，共轭羰基化合物，金属有机物，金属化合物，甾族化合物 等）有响应 不破坏检测样品组分结构 气相色谱仪检测器 LTM色谱柱是将常规的毛细管色谱柱与 相同长度的加热丝和一定长度的热敏电 阻丝以及极细的绝缘玻璃纤维缠绕而成 优点：

4、 可节约200倍能耗，仅相当于传统气相 色谱法1%； 升温速度提升到1800/min，大大缩 短分析时间，提高检测通量； 体积远小于传统空气浴柱温箱。 低热容技术（low thermal mass technology，LTM） 液相色谱仪构造 临床色谱质谱检验技术 五个基本组成系统：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和 数据处理系统。 液相色谱仪的构造 液相色谱仪构造与流程 2021-6-8 高效液相色谱仪的组成 流动相 管路 脱气机 数据处理系统 检测系统 溶剂管理系统 高压输液 系统 进样系统 分离系统 高效液相色谱仪输液泵 输液泵柱塞往复泵结构示意图 输液泵单向阀工作原理 高效

5、液相色谱仪进样器 进样计量泵 自动进样器 样品架 高效液相色谱仪进样器 高效液相色谱仪分离系统 2021-6-8 包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。 色谱柱 恒温器 连接管 2021-6-8 仪器类型经典液相色 谱仪（LC） 高效液相色谱 仪（HPLC） 超高效液相色谱 仪（UPLC） 色谱柱 柱长/cm102001025315 填料粒径/m756005501.73.5 填料粒度填料粒度 压力压力 仪器部件要求仪器部件要求 根据所使用的色谱柱填料粒径大小，可将液相色谱仪分为三类 经典液相色谱仪（liquid chromatography，LC） 高效液相色谱仪（high performance

6、 liquid chromatography，HPLC） 超高效液相色谱仪（ultra high performance liquid chromatography， UPLC） 高效液相色谱仪分类 2021-6-8 高灵敏度高灵敏度 液相色谱仪检测器 临床色谱质谱检验技术 紫外检测器(包括二极管阵列)（ultraviolet detector, UVD） 荧光检测器（fluorescence detector，FLD） 电化学检测器（electrochemical detector，ECD） 示差折光检测器（refractive index detector ，RID） 检测系统常用检测器

7、高效液相色谱仪检测系统 2021-6-8 原理：分子吸收光谱，基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 优点：1）对温度和流速不敏感 2）可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 检测系统紫外检测器 光电二极管阵列检测器 二十一世纪标准紫外检测器 1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，形成三维立体 谱图 色谱定性依据： 保留时间 常规紫外检测器 峰纯度 二极管阵列 优点： 采集三维谱图 峰纯度检验 光谱库检索 可以发现单波长检测时未测到的峰 检测系统紫外检测器（二极管阵列） 检测系统紫外检测器（二极管阵列） 原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点： 1）灵

8、敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定有荧光活性的物质 天然荧光活性物质（具有对称共轭体系：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸 、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨类等） 通过反应转化为具有荧光活性物质（维生素B1、B6，大部分氨基酸等） 检测系统荧光检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电化学变化来测定电离物 质含量。即利用电化学原理和物质的电化学性质进行检测。 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱。 缺点：对温度变化敏感 种类：主要有安倍检测器、极谱检测器、库伦检测器和电导检测器。前 三种统称为伏安检测器，以测电解电流

9、的大小为基础，后者以测量电阻 变化为基础。 检测系统电化学检测器 应用范围：没有紫外吸收或不能发出荧光但具有电活性的物质。若采用 分离柱后衍生技术，还可将它扩展到非电活性物质的检测。 安倍和库伦检测器广泛应用于测定生物胺（儿茶酚胺）、氨基酸、抗坏 血酸、尿素与尿黑酸、酚类和甾体化合物、有机碱、肽及其衍生物、嘌 呤化合物以及许多药物，如嘧啶、噻吩嗪类化合物等。 检测系统电化学检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数） 缺点：1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器 种类：偏转式、反射式和干涉型三种 检测系统示差折光检测器 超高效液相色谱仪超高效液相色谱仪双液相系统色谱仪双液相系统色谱仪 液相色谱仪在医学检验中的应用 本节思考 临床色谱质谱检验技术 气相/液相色谱仪的构造如何（主要由哪几部分组成）? 气相/液相色谱仪的常用检测器有哪些? 本节思考题 本章总结 临床色谱质谱检验技术 本章总结 第一