医学微生物学：实验4

1、实验四实验四 一一. .药敏试验药敏试验 K-BK-B法（示教）法（示教） E E试验（示教）试验（示教） 微量稀释法（操作，微量稀释法（操作，1 1份份/ /组）组） 二二. .抗抗“O O”试验试验胶乳法胶乳法 （操作，（操作，1 1份份/ /组）组） 三三. .链球菌菌落链球菌菌落 （示教）（示教） 四四. .奈瑟菌镜下形态奈瑟菌镜下形态 （示教）（示教） 五五. .病例一病例一11讨论讨论 K-B(纸片扩散）法纸片扩散）法 原理： 含抗菌药物的纸片贴在已接种菌的琼脂平 板上，药物吸取琼脂的水分溶解后向纸片周围 扩散，形成透明的抑菌圈。 MIC: 最低抑菌浓度。抑菌圈越大，MIC越 小

2、24mm 15mm 结果判读： 用毫米尺量取抑菌圈直径，参照标准判读 可以观察一种细菌对多种药物的作用，也可以观 察一种药物对多种细菌的作用。 微量稀释法微量稀释法 材料：营养肉汤、药液、测试菌液、加样枪、材料：营养肉汤、药液、测试菌液、加样枪、 酶标条等酶标条等 方法：方法：1.1-111.1-11孔：营养肉汤孔：营养肉汤100100l/l/孔；孔； 1212孔：孔：200200l l肉汤。肉汤。 2.12.1孔：孔：Pen(128IU/ml)100Pen(128IU/ml)100l,l,依次作依次作 倍比稀释至倍比稀释至1010孔；孔； 3.3.加菌液自加菌液自1111孔开始至孔开始至1

3、1孔每孔孔每孔100100l l 4. 4.混匀，反复吹打混匀，反复吹打 注意加菌液时按注意加菌液时按121121的顺序加样。的顺序加样。 100ul 100ul 11 12 只有肉只有肉 汤汤 肉汤菌肉汤菌 液液 结果判读 37。C，24h后 肉汤对照 肉汤+菌液对照 测试菌不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该 药对测试菌的MIC 清澈 浑浊，甚至出现沉淀 E试验 E试验试条: 宽5mm，长50mm，内含干化，稳定的，浓度由高至 低呈指数梯度分布的一种抗菌药物的商品化塑料试条。 试条上面用数字标出所含药物的浓度刻度（ug/ml）， 浓度梯度范围一般为15个自然对数 E试验结合了稀释法和扩散法

4、的原理和特点，可以直 接定量测出抗菌药物对测试菌的MIC，结果准确，重 复性好。 140mm平板 结果判读 椭圆的抑菌圈和试条的横向相交处的读数刻度 即是该测定抗菌药物对测试均的最低抑菌浓度 选择题： 下列可用于做定量药敏试验的方法有： A：试管法 B：微量稀释法 C：E试验 D: KB法 抗抗“ O ”实验实验（胶乳法）（胶乳法） 乙型溶血性链球菌能产生链球菌溶血素 “O”， 其能溶解红细胞，对氧敏感，可使之暂时失去 溶血能力，但若加入还原剂又可恢复其溶血作 用 溶血素 “O”有很强的抗原性，人受乙型溶血性 链球菌感染2-3周就能产生抗链球菌溶血素 “O”抗体，此抗体可中和溶血素 “O”的活

5、性。 n原理原理 链球菌溶血素链球菌溶血素 “O” 抗抗“O”抗体（血清中）抗体（血清中） 链球菌溶血素链球菌溶血素“O” 羧化聚苯乙烯胶乳羧化聚苯乙烯胶乳 ASO胶乳试剂（胶乳试剂（Ag） 肉眼可见的凝集反应肉眼可见的凝集反应 + + 试剂试剂 1.ASO1.ASO胶乳试剂胶乳试剂 （蓝色瓶盖）（蓝色瓶盖） 2.2.阳性对照阳性对照200IU/ml 200IU/ml （红色瓶盖）（红色瓶盖） 3.3.阴性对照阴性对照200IU/ml 200IU/ml （绿色瓶盖）（绿色瓶盖） 标本采集标本采集 经离心获得新鲜血清标本，贮存于经离心获得新鲜血清标本，贮存于2-82-8，4848 小时内使用，时

6、间过长须冰冻贮存，血浆不能使小时内使用，时间过长须冰冻贮存，血浆不能使 用。用。 抗抗“O”试验试验 n方法方法 1.1.在反应板上标记好反应区域；在反应板上标记好反应区域； 2.2.分别在相应区域加：血清分别在相应区域加：血清5050l l、阳、阳/ /阴性对照阴性对照1 1滴滴 3.3.再各加再各加1 1滴胶乳试剂，搅拌充分混匀；滴胶乳试剂，搅拌充分混匀； 4.4.约约2 2分钟观察结果。分钟观察结果。 结果观察 n阴性对照 n阳性对照 n待测血清 均匀浑浊，白色 颗粒状凝集，白色 ？ 抗抗“O”试验试验 凝集出现凝集出现 ASO200IU/ml ASO200IU/ml 阳性阳性 无凝集出

7、现无凝集出现 ASO200IU/ml ASO200IU/ml 阴性阴性 注意事项注意事项 1.1.试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。 2.2.加试剂时，要保证液滴大小一致。加试剂时，要保证液滴大小一致。 3.3.试剂盒贮存于试剂盒贮存于2-102-10，切勿冰冻。，切勿冰冻。 意义意义 1.1.抗体滴度抗体滴度 200IU/ml200IU/ml以上，新近有可能反复以上，新近有可能反复 感染过乙型溶血型链球菌感染过乙型溶血型链球菌 2.2.作为风湿活动期、急性肾小球肾炎、风湿性关作为风湿活动期、急性肾小球肾炎、风湿性关 节炎的辅助诊断节炎的辅助诊断 链球菌菌落（

8、示教）链球菌菌落（示教） n甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌 溶血溶血 n乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌 溶血溶血 n丙型链球菌丙型链球菌 不溶血不溶血 示教镜示教镜 n脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌：G-,肾形或豆形，0.6-0.8um排 列不规则，单个，成双或4个相连等，无鞭毛， 无芽胞，有菌毛和荚膜。 n淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌： G-,肾形或豆形， 0.6-0.8um 双排列，像一对咖啡豆。无鞭毛，无芽胞，有 菌毛和荚膜 注意观察形态，排列，染色注意观察形态，排列，染色 病例一1讨论 n患者男性，15岁，初中生，因发热腿痛4天，气促2天 入院。患者诉5天前因额部有一疖肿，自行用手挤压 并用针刺

9、破，挤出少量脓液，当时有疼痛出血。4天 前突起畏寒、发热，体温38-39，无咳嗽、流涕， 并感到右大腿根部疼痛，但仍活动自如，于诊所静脉 点滴“阿莫西林”1天，用药剂量不详，症状无好转， 腿痛逐渐加剧，活动受限。2天前感觉症状进行性加 重，出现气促、心慌，偶有咳嗽，无痰。1天前出现 高热，体温40，右大腿剧痛难忍，髋关节不能活动， 气促加剧，呼吸困难，于9月2日下午5时在家人搀扶 下入院。患者家境较差，且长期偏食，故体质较差， 营养不良，易感冒，既往无其他特殊病史，预防接种 史不详。 n入院查体：T 39.5，P 150次/分，R 50次/分，BP 100/60 mmHg。发育一般，体质瘦弱，

10、营养差，痛苦 面容，贫血貌，被迫卧位，右腿蜷曲，神志清，查体 不合作。右额部可见一大小为11 cm大小的硬结， 表面及周围皮肤发红，有结痂。双下肢皮肤可见多个 0.50.5cm褐色斑疹，口唇发绀，张口呼吸，气管居 中，颈软，双肺呼吸音粗，未闻及干湿罗音，心界不 大，心率150次/分，心音低钝，律齐，腹平软，肝脾 未扪及。右股部肿胀，表面不红，触痛明显，无波动 感，髋关节处无红肿，压痛明显，被迫制动。 n实验室检查结果：WBC 14.6109/L，Neutrophil 91%，Lymphocyte 8%，Monocyte 1%。RBC 2.91012/L，Hb 84g/L。 病例一1讨论 n患者的各种症状、查体及实验室检查结果中， 哪些属于异常表现？ n患者最可能的初步临床诊断是什么？有哪些疾 病需作鉴别诊断？ n该患者还需要做哪些检查以帮助诊断？ n可采集哪些标本？可用什么可靠的病原学检查 作进一步确诊？ 病例一1分析 n败血症、脓毒血症 、休克、多器官衰竭等 肺结核、大叶性肺炎、猩红热、病毒性肺炎等 n胸片、B超、血生化、血气 n血标本、痰标本、脓肿穿刺液等 培养、药敏、痰涂片染色镜检（Gram、抗酸） 微生物学检查 n1.标本